29/04/2013

TRABAJO PRÁCTICO Nº 5 ESTUDIO DE ANEMIAS

BIOQUÍMICA CLÍNICA I. INSTITUTO DE BIOQUÍMICA APLICADA. FACULTAD DE BIOQUÍMICA, QUÍMICA Y FARMACIA. UNT.

ESTUDIO DE LAS ANEMIAS • EVALUACIÓN CLÍNICA: 1) ¿Cuándo fue el último análisis sin anemia? 2) Origen étnico 3) Antecedentes personales y heredofamiliares de: anemia, esplenectomía, ictericia. 4) Tratamiento previo con hierro, ácido fólico, vitamina B12. 5) Exposición a tóxicos o químicos. 6) Enfermedad subyacente. 7) Dieta. 8) Presencia de hemorragias.

• ESTUDIOS DE LABORATORIO: 1) Hemograma. Buena observación del frotis. 2) Reticulocitos 3) Estudio del metabolismo del hierro 4) Determinaciones especiales

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Toma de muestra

Extendido

Con EDTA

Suero

Hemograma

Con Heparina

• Fe • TIBC • % Saturación •Test de Ham

Reticulocitos Electroforesis de Hb

ROE

Hb fetal. Falciformación. Test de Ham

Hb disminuida IPR >3 Regenerativas Anemias Poshemorrágicas Agudas

3 Regenerativas A. Posthemorrágicas Agudas Intracorpusculares

A. Hemolíticas

Fe-Tf-Ferritina D-A-D D-D-N ó A (A.Ferropénica)

VCM

PCD D (A.SideroblásticaInmunes

(ATC) N/A

Extracorpusculares

P. Especiales (ROE, Elect. Hb)

< 1 Arregenerativas

No Inmunes

R. de Perls)

HPN (Ham) N (A.Aplásica, por ocupación)

A (A.Megaloblástica)

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ESTUDIO DEL METABOLISMO DEL HIERRO Determinación de la concentración de hierro sérico • Método Colorimétrico

Fe3+

Fe3+

Buffer succinato – ph 3,7

Fe2+

Reductor

TF

Fe2+

+

TF

+ Ferrozina

Fe2+

Complejo coloreado

Fe2+

Capacidad total de unión de Fe a transferrina (TIBC) • Método Colorimétrico Fe3+

Fe3+ Fe3+

Fe3+

Fe3+

TF

TF Fe3+

Fe3+ Fe3+

Fe3+

+

TF

Fe3+ Fe3+ Fe3+

Fe3+ Fe3+

TF

Fe3+

Fe3+

ph>7,2 Fe3+

Fe3+

Fe3+

Fe3+

TF

Fe3+ Fe3+

Fe3+

TF Fe3+

TF

TF

TF Fe3+

+ Agente quelante

r.p.m. Reacción de color para Fe

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• Muestra • Fase Preanalítica

• Limpieza del material

• Fase Analítica PROCESAMIENTO Blanco

Standard

Fe

Tf

200 µL

H2O

200 µL

Estándar

200 µL

Suero

200 µL

Sobrenadante Buffer/Reductor

1 mL

1 mL

1 mL

1 mL

200 µL

200 µL

Mezclar y leer a 560 nm 200 µL

Ferrozina

200 µL

Mezclar y leer a 560 nm contra agua destilada

VR de Hierro sérico (mujeres): 50 – 170 µg/dL; hombres: 65-175 µg/dL; niños: 35-135 µg/dL VR de TIBC: 250-400 µg/dL

% de Saturación de la Transferrina Fe sérico µg/dL

% Saturación =

x 100

VR: 20 – 55 %

Transferrina µg/dL

INTERPRETACIÓN Anemia ferropénica

A.T.C.

Fe sérico TIBC % Saturación Ferritina

Talasemia

Anemia Sideroblástica

No No

N

N

No No

No

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ANEMIA FERROPÉNICA

Hb disminuida

> 3 Regenerativas A. Posthemorrágicas Agudas

A. Hemolíticas

< 1 Arregenerativas Fe-Tf-Ferritina D-A-D D-D ó N-A (A.Ferropénica)

Intracorpusculares

VCM

PCD D (A.SideroblásticaInmunes

No Inmunes

(ATC) N/A

Extracorpusculares

P. Especiales (ROE, Elect. Hb)

IPR

R. de Perls)

HPN (Ham) N (A.Aplásica, por ocupación)

A (A.Megaloblástica, aplásica) N: normal; D: disminuido; A: aumentado

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ANEMIA SIDEROBLÁSTICA: REACCIÓN DE PERLS • Muestra: Extendidos de médula ósea • Fundamento: El Fe+++ no hemínico reacciona con ferrocianuro de potasio en solución clorhídrica, dando ferrocianuro férrico o Azul de Prusia.

ANEMIA MEGALOBLÁSTICA

RBC: 2.94 M/µL HGB: 10.2 g/dL HCT: 31.8 % MCV: 108 fL MCH: 34.7 pg MCHC: 32.1 g/dL RDW: 22.8 %

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ANEMIA MEGALOBLÁSTICA: MÉDULA ÓSEA

HEMOGLOBINURIA PAROXÍSTICA NOCTURNA: TEST DE HAM Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

HPN: orina

-Suero normal -Suero normal -Suero paciente acidificado acidificado -GR paciente -GR paciente -GR paciente Tubo 4

Tubo 5

Tubo 6

Tubo 7

Controles (sin hemólisis)

-Suero normal -Suero normal -Suero normal inactivado acidificado acidificado -GR paciente -GR normal -GR normal

-Suero normal inactivado acidificado -GR normal

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Hb disminuida IPR

> 3 Regenerativas A. Posthemorrágicas Agudas

A. Hemolíticas

Fe-Tf-Ferritina D-A-D D-D ó N-A (A.Ferropénica)

Intracorpusculares

VCM

PCD D (A.SideroblásticaInmunes

No Inmunes

(ATC) N/A

Extracorpusculares

P. Especiales (ROE, Elect. Hb)

< 1 Arregenerativas

R. de Perls)

HPN (Ham) N (A.Aplásica, por ocupación)

A (A.Megaloblástica, aplásica) N: normal; D: disminuido; A: aumentado

DEFECTOS DE MEMBRANA: RESISTENCIA OSMÓTICA ERITROCITARIA Medida de la capacidad de una población de hematíes para resistir el efecto hipotónico del medio. Técnica

100 % Hemólisis

0 % Hemólisis

+

Concentración de NaCl

-

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RESULTADOS DE LA PRUEBA DE ROE

NORMAL

EH TALASEMIA

Microesferocitos

HEMÓLISIS 50% INMEDIATA: 4,0-4,5 g/L HEMÓLISIS 50% POSTINCUBACIÓN 24 hs: 4,6-5,9 g/L

Talasemia

DEFECTOS DE HEMOGLOBINA: ELECTROFORESIS DE Hb • Electroforesis de hemoglobina a ph alcalino • Electroforesis de hemoglobina a ph ácido • Muestra: sangre entera ( EDTA). Las muestras deben ser lavadas 3 veces en solución salina isotónica. • Hemolizado: se usa una solución lisante (EDTA, KCN y agua). • Siempre procesar, simultáneamente, una muestra control. • Medir y equiparar las concentraciones de Hb del control y muestras problema.

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PATRÓN ELECTROFORÉTICO A PH ALCALINO

+

-

NORMAL b-TALASEMIA MENOR RASGO FALCIFORME ENFERMEDAD SC SANGRE NORMAL DE CORDÓN RASGO C CONTROL

º

AC

A2

S

C

D

E-O

G

F

A

J º: Indica el origen

ELECTROFORESIS DE Hb A PH ALCALINO 1

Anemia drepanocítica (Hb S homocigota)

2

Anemia drepanocítica

Control Normal β-talasemia menor

3

β-talasemia menor δβ-talasemia

Control Normal A F A2

β-talasemia menor (Hb A2 aumentada) δβ-talasemia homocigota (Hb F únicamente , Hb A y Hb A2 ausentes)

Control Normal A F A2

Hemoglobinopatía S-C β-talasemia menor

Normal

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GRACIAS POR SU ATENCIÓN!!

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