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OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

A61K 31/505 (2006.01) A61K 38/10 (2006.01) A61P 3/04 (2006.01)

ESPAÑA

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11 Número de publicación: 2 264 679

51 Int. Cl.:

TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA

T3

86 Número de solicitud europea: 01303855 .9

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Fecha de presentación : 27.04.2001 87 Número de publicación de la solicitud: 1157695

87 Fecha de publicación de la solicitud: 28.11.2001

54 Título: Procedimiento para tratar la obesidad usando un ligando de receptor de neurotensina.

30 Prioridad: 27.04.2000 US 199951

73 Titular/es: Pfizer Products Inc.

Eastern Point Road Groton, Connecticut 06340, US

45 Fecha de publicación de la mención BOPI:

72 Inventor/es: Hadcock, John Richard Neville

16.01.2007

45 Fecha de la publicación del folleto de la patente:

74 Agente: Carpintero López, Francisco

ES 2 264 679 T3

16.01.2007

Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art. 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. Pº de la Castellana, 75 – 28071 Madrid

ES 2 264 679 T3 DESCRIPCIÓN Procedimiento para tratar la obesidad usando un ligando de receptor de neurotensina. 5

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Campo de la invención La presente invención se refiere al uso de y a composiciones que comprenden un ligando de receptor de neurotensina para tratar obesidad, diabetes, disfunción sexual (incluyendo disfunción eréctil), aterosclerosis, resistencia a la insulina, tolerancia a la glucosa deteriorada, hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia. La presente invención se refiere también a composiciones y kits que comprenden un ligando de receptor de neurotensina. Antecedentes de la invención

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La obesidad es una enfermedad devastadora. Además de dañar la salud física, la obesidad puede hacer estragos en la salud mental, ya que la obesidad afecta a la autoestima, lo que en última instancia puede afectar a la capacidad de una persona de interaccionar socialmente con otras. Por desgracia, la obesidad no se entiende bien, y los estereotipos sociales y las suposiciones referentes a la obesidad tienden sólo a agravar los efectos psicológicos de la enfermedad. Debido al impacto de la obesidad en las personas y la sociedad, se ha invertido un notable esfuerzo para encontrar formas de tratar la obesidad, pero se ha conseguido un éxito escaso en el tratamiento y/o prevención a largo plazo de la obesidad. La neurotensina es un péptido de trece aminoácidos que parece tener funciones como neurotransmisor y neuromodulador en el sistema nervioso y como hormona local en la periferia. Específicamente, la neurotensina es un neuromodulador de transmisión de dopamina y de secreción de hormona de la pituitaria anterior, y ejerce potentes efectos hipotérmicos y analgésicos en el cerebro. En la periferia, la neurotensina es un modulador paracrino y endocrino del tracto digestivo y actúa como un factor de crecimiento en una diversidad de células. Hasta ahora, se han identificado tres tipos de receptores de neurotensina: receptores de neurotensina-1, receptores de neurotensina-2 y receptores de neurotensina-3. (El receptor de neurotensina-3 se llama también sortlina o gp95). Los receptores de neurotensina-1 y neurotensina-2 son receptores acoplados a proteína G; el receptor de neurotensina3 no es un receptor acoplado a proteína G. Resumen de la invención

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La presente invención proporciona el uso de un agonista de receptor de neurotensina-1 en la fabricación de un medicamento para tratar la obesidad, en un paciente obeso o un paciente con riesgo de convertirse en obeso. En una forma de realización preferida del uso, el agonista de receptor de neurotensina-1 es un agonista de receptor de neurotensina-1 selectivo.

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También se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden: a) un compuesto que es un ligando de receptor de neurotensina; y 45

b) un segundo compuesto útil para el tratamiento de obesidad, diabetes, disfunción sexual, aterosclerosis, resistencia a la insulina, tolerancia a la glucosa deteriorada, hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia. En una forma de realización preferida de las composiciones, el ligando de receptor de neurotensina es un agonista de receptor de neurotensina-1.

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En otra forma de realización preferida de la composición, el segundo compuesto es un agonista de receptor β3 -adrenérgico, un agonista de colecistoquinina-A, un inhibidor de recaptación de monoamina, un agente simpatomimético, un agente serotoninérgico, un agonista de dopamina, un agonista o mimético de receptor de hormona de estimulación de melanocitos, un análogo de receptor de hormona de estimulación de melanocitos, un antagonista de receptor de cannabinoide, un antagonista de hormona de concentración de melanina, leptina, un análogo de leptina, un agonista de receptor de leptina, un antagonista de galanina, un agonista de bombesina, un antagonista de neuropéptido-Y, un agente tiromimético, deshidroepiandrosterona o un análogo de la misma, un agonista o antagonista de receptor de glucocorticoide, un antagonista de receptor de orexina, un antagonista de proteína de unión a urocortina, un agonista de receptor de péptido-1 semejante a glucagón o un factor neurotrófico ciliar.

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También se proporcionan kits que comprenden: a) una primera composición farmacéutica que comprende un compuesto que es un ligando de receptor de neurotensina; 65

b) una segunda composición farmacéutica que comprende un compuesto que es útil para el tratamiento de obesidad, diabetes, disfunción sexual, aterosclerosis, resistencia a la insulina, tolerancia a la glucosa deteriorada, hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia; y 2

ES 2 264 679 T3 c) un recipiente para las composiciones primera y segunda. En una forma de realización preferida de los kits, el ligando de receptor de neurotensina es un agonista de receptor de neurotensina-1. 5

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En otra forma de realización preferida de los kits, la segunda composición farmacéutica comprende un compuesto que es un agonista de receptor β3 -adrenérgico, un agonista de colecistoquinina-A, un inhibidor de recaptación de monoamina, un agente simpatomimético, un agente serotoninérgico, un agonista de dopamina, un agonista o mimético de receptor de hormona de estimulación de melanocitos, un análogo de receptor de hormona de estimulación de melanocitos, un antagonista de receptor de cannabinoide, un antagonista de hormona de concentración de melanina, leptina, un análogo de leptina, un agonista de receptor de leptina, un antagonista de galanina, un agonista de bombesina, un antagonista de neuropéptido-Y, un agente tiromimético, deshidroepiandrosterona o un análogo de la misma, un agonista o antagonista de receptor de glucocorticoide, un antagonista de receptor de orexina, un antagonista de proteína de unión a urocortina, un agonista de receptor de péptido-1 semejante a glucagón o un factor neurotrófico ciliar.

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También se proporciona el uso de un ligando de receptor de neurotensina para la fabricación de un medicamento para tratar diabetes, disfunción sexual, aterosclerosis, resistencia a la insulina, tolerancia a la glucosa deteriorada, hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia en un paciente que tiene o tiene riesgo de tener diabetes, disfunción sexual, aterosclerosis, resistencia a la insulina, tolerancia a la glucosa deteriorada, hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia. 20

En una forma de realización preferida del uso, el ligando de receptor de neurotensina es un ligando de receptor de neurotensina-1. 25

Otra forma de realización de la invención es un compuesto que es un agonista de receptor de neurotensina-1 para su uso como medicamento para tratar a pacientes con obesidad o con riesgo de convertirse en obesos. Una forma de realización adicional de la invención es un procedimiento para mejorar la apariencia corporal de un mamífero que comprende la administración a ese mamífero de una cantidad eficaz de un agonista de receptor de neurotensina-1 hasta que se haya producido una pérdida estéticamente beneficiosa de peso corporal.

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Descripción detallada de la invención

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La presente invención se refiere al uso de y a composiciones que comprenden un ligando de receptor de neurotensina para tratar obesidad, diabetes, disfunción sexual (incluida disfunción eréctil), aterosclerosis, resistencia a la insulina, tolerancia a la glucosa deteriorada, hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia. Además, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas y kits que comprenden un ligando de receptor de neurotensina.

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Según la presente invención, puede usarse una cantidad terapéuticamente eficaz de un ligando de receptor de neurotensina en la fabricación de un medicamento para tratar obesidad, diabetes, disfunción sexual (incluida disfunción eréctil), aterosclerosis, resistencia a la insulina, tolerancia a la glucosa deteriorada, hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia en un paciente obeso o un paciente con riesgo de convertirse en obeso o un paciente que tiene o con riesgo de tener diabetes, disfunción sexual (incluida disfunción eréctil), aterosclerosis, resistencia a la insulina, tolerancia a la glucosa deteriorada, hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia. En una forma de realización preferida de la invención, el ligando de receptor de neurotensina es un ligando de receptor de neurotensina-1. En una forma de realización más preferida de la invención, el ligando de receptor de neurotensina es un agonista de receptor de neurotensina-1 selectivo.

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El término “cantidad terapéuticamente eficaz” significa una cantidad de un compuesto o combinación de compuestos que trata una enfermedad; mejora, atenúa o elimina uno o más síntomas de una enfermedad particular; o previene o retrasa el inicio de uno o más síntomas de una enfermedad. 50

El término “paciente” significa animales, como perros, gatos, vacas, caballos, ovejas, gansos y seres humanos. Se prefieren particularmente pacientes mamíferos, incluyendo seres humanos de ambos sexos. El término “farmacéuticamente aceptable” significa que la sustancia o composición debe ser compatible con los otros ingredientes de una formulación, y no perjudiciales para el paciente.

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Los términos “tratando”, “tratar” o “tratamiento” incluyen tratamiento preventivo (por ejemplo, profiláctico) y paliativo. 60

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La frase “ligando de receptor de neurotensina” significa un compuesto que se une a un receptor de neurotensina, o un estereoisómero del compuesto, una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto o del estereoisómero, un profármaco del compuesto o del estereoisómero, o una sal farmacéuticamente aceptable del profármaco. También se contempla que cualquier compuesto farmacéuticamente activo adicional usado en combinación con un ligando de receptor de neurotensina puede ser un estereoisómero del compuesto activo adicional, una sal del compuesto activo adicional o un estereoisómero del mismo, un profármaco del compuesto adicional o estereoisómero del mismo, o una sal del profármaco. La frase “agonista de receptor de neurotensina” significa un ligando de receptor de neurotensina que activa un receptor de neurotensina. 3

ES 2 264 679 T3 La frase “antagonista de receptor de neurotensina ” significa un ligando de receptor de neurotensina que bloquea la activación de un receptor de neurotensina.

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El término “selectivo” significa que un ligando se une con mayor afinidad a un receptor particular cuando se compara con la afinidad de unión del ligando a otro receptor. Preferentemente, la afinidad de unión del ligando para el primer receptor es aproximadamente del 50% o mayor que la afinidad de unión para el segundo receptor. Más preferentemente, la afinidad de unión del ligando al primer receptor es aproximadamente del 75% o mayor que la afinidad de unión al segundo receptor. Con la máxima preferencia, la afinidad de unión del ligando al primer receptor es aproximadamente del 90% o mayor que la afinidad de unión al segundo receptor. En una forma de realización preferida de la invención, el ligando muestra una mayor afinidad de unión a uno de los tres receptores de neurotensina. Se prefieren particularmente ligandos que se unen con mayor afinidad a los receptores de neurotensina-1 en comparación con la unión a receptores de neurotensina-2 o neurotensina-3. Se contempla que los compuestos preferidos se unen a receptores de neurotensinas con afinidad micromolar o mayor. Los compuestos más preferidos se unen a receptores de neurotensina con afinidad nanomolar o mayor. Los ligandos de receptores de neurotensina preferidos de la presente invención incluyen compuestos que son agonistas selectivos del receptor de neurotensina-1.

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Los ligandos de receptores de neurotensina pueden identificase, por ejemplo, por detección sistemática de una biblioteca de compuestos. Los procedimientos de identificación de agonistas y antagonistas de receptores son bien conocidos entre los expertos en la materia. A continuación se presentan procedimientos específicos que pueden usarse para identificar ligandos de receptores de neurotensina.

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Los ejemplos de ligandos de receptores de neurotensina conocidos incluyen hormonas como neurotensina (también denominada NT(1-13)) y neuromedina N, agonistas no peptídicos como los descritos en la patente de EE.UU. nº 5.407.916, antagonistas no peptídicos como ácido 2([1-[7-cloro-4-quinolinil]-5-[2,6-dimetoxifenil]pirazol-3-il]carboxilamino) triciclo(3.3.1.1.3.7)decan-2-carboxílico [SR48692], que es un antagonista de receptor de neurotensina1 selectivo, y ácido 2-(5,6-dimetilaminopropil)-1-[4-[N-(3-dimetilaminopropil)-N-metilcarbamoil]-2-isopropilfenil]1H-pirazol-3carbonil)aminoadamantano-2-carboxílico (SR142948A), que es un antagonista no selectivo que se une con igual afinidad a receptores de neurotensina-1 y neurotensina-2. Otro compuesto que es un ligando de unión a neurotensina es levocabastina. Además, las patentes de EE.UU. 5.250.558 y 5.204.354 describen antagonistas de receptores de neurotensina, y la patente de EE.UU. 5.407.916 describe agonistas de neurotensina peptídicos. Un ejemplo de un agonista de receptor de neurotensina-1 selectivo es neurotensina nativa [NT(1-13)], que tiene una Kd de aproximadamente 0,3 nM en el receptor de neurotensina-1 y de aproximadamente 2 a 6 nM en el receptor de neurotensina2. Otro ejemplo de un agonista de receptor de neurotensina-1 selectivo es Trp11 NT(1-13), que muestra una afinidad de unión de aproximadamente 1 nM en el receptor de neurotensina-1 y de aproximadamente 27 nM en el receptor de neurotensina-2. Trp11 NT(1-13) es NT(1-13) en el que el aminoácido 11 es triptófano. Las secuencias de aminoácidos y las secuencias de nucleótidos que codifican cada uno de los tres receptores de neurotensinas humanos son conocidas por los expertos en la materia y pueden encontrarse en GenBank con los números de acceso NM_002531, Y10148 y NM_002569.

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Un ligando de receptor de neurotensina se administra a un paciente en una cantidad terapéuticamente eficaz. Un ligando de receptor de neurotensina puede administrarse solo o como parte de una composición farmacéuticamente aceptable. Además, un compuesto o composición puede administrarse todo de una vez, como por ejemplo, por una inyección de bolo, múltiples veces, como por una serie de comprimidos, o suministrarse sustancialmente de manera uniforme durante un período de tiempo, como por ejemplo, usando suministro transdérmico. También se observa que la dosis del compuesto puede variarse con el tiempo. Un ligando de receptor de neurotensina puede administrarse usando una formulación de liberación inmediata, una formulación de liberación controlada o combinaciones de las mismas. El término “liberación controlada” incluye liberación sostenida, liberación retardada y combinaciones de las mismas.

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Además, un ligando de receptor de neurotensina puede administrarse en solitario, en combinación con otros ligandos de receptores de neurotensina o con otros compuestos farmacéuticamente activos. Los otros compuestos farmacéuticamente activos pueden estar dirigidos a tratar la misma enfermedad que el ligando del receptor de neurotensina u otra enfermedad diferente. Si el paciente va a recibir o está recibiendo múltiples compuestos farmacéuticamente activos, los compuestos pueden administrarse simultáneamente o secuencialmente en cualquier orden. Por ejemplo, en el caso de comprimidos, los compuestos activos pueden encontrarse en un comprimido o en comprimidos separados, que pueden administrarse de una vez o secuencialmente en cualquier orden. Además, debe reconocerse que las composiciones pueden ser formas diferentes. Por ejemplo, uno o más compuestos pueden suministrarse a través de un comprimido, mientras que otro se administra por inyección u oralmente como un jarabe. Se contemplan todas las combinaciones, procedimientos de suministro y secuencias de administración. Dado que se contempla el tratamiento de las enfermedades referidas con una combinación de agentes farmacéuticamente activos que pueden administrarse por separado, la invención se refiere además a la combinación de composiciones farmacéuticas separadas en forma de kit. Por ejemplo, un kit puede comprender dos composiciones farmacéuticas separadas que comprenden: 1) un ligando de receptor de neurotensina; y 2) un segundo compuesto farmacéuticamente activo. El kit comprende también un recipiente para las composiciones separadas, como una botella dividida o un paquete de aluminio dividido. Los ejemplos adicionales de recipientes incluyen jeringuillas, cajas, bolsas y similares. Normalmente, un kit comprende instrucciones para la administración de los componentes separados. La forma de kit 4

ES 2 264 679 T3 es particularmente ventajosa cuando los componentes separados se administran preferentemente en diferentes formas de dosificación (por ejemplo, oral y parenteral), se administran a diferentes intervalos de dosificación o cuando se desea la valoración de los componentes individuales de la combinación por parte del médico que hace la prescripción. 5

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Un ejemplo de un kit es un blíster. Los blísteres son bien conocidos en la industria del envasado y se están usando ampliamente para el envasado de formas farmacéuticas de dosificación unitaria (comprimidos, cápsulas, y similares). Los blísteres consisten generalmente en una lámina de material relativamente rígido cubierto con una hoja de un material de plástico preferentemente transparente. Durante el procedimiento de envasado, en la hoja de plástico se hacen rebajes. Los rebajes tienen el tamaño y la forma de los comprimidos o cápsulas que se van a envasar. A continuación, los comprimidos o cápsulas se colocan en los rebajes y se sella una lámina de un material relativamente rígido contra la hoja de plástico en la cara de la hoja opuesta a la dirección en la que se formaron los rebajes. En consecuencia, los comprimidos o cápsulas se sellan en rebajes entre la hoja de plástico y la lámina. Preferentemente, la resistencia de la lámina es tal que los comprimidos o cápsulas pueden extraerse del blíster manualmente aplicando presión sobre los rebajes, con lo que se forma una abertura en la lámina en el lugar del rebaje. A continuación pueden retirarse el comprimido o la cápsula a través de dicha abertura. Puede ser deseable proporcionar un recordatorio en el kit, por ejemplo, en forma de números junto a los comprimidos o cápsulas en los que los números se corresponden con los días del régimen en que deben ingerirse los comprimidos o cápsulas así especificados. Otro ejemplo de dicho recordatorio es un calendario impreso en la tarjeta, por ejemplo, del modo siguiente: “Primera semana, Lunes, Martes, ... etc .... Segunda semana, Lunes, Martes”, etc. Otras variantes de recordatorios serán fácilmente evidentes. Una “dosis diaria” puede ser un único comprimido o cápsula o varias píldoras o cápsulas que se tomarán en un día dado. También, una dosis diaria de un ligando de receptor de neurotensina puede consistir en un comprimido o cápsula, mientras que una dosis diaria del segundo compuesto puede consistir en varios comprimidos o cápsulas y viceversa. El recordatorio debe reflejar esto y ayudar a la correcta administración de los agentes activos. En otra forma de realización de la presente invención, se proporciona un dispensador diseñado para dispensar las dosis diarias de una en una en el orden de su uso pretendido. Preferentemente, el dispensador está equipado con un recordatorio, de manera que facilite aún más el cumplimiento con el régimen de dosificación. Un ejemplo de dicho recordatorio es un contador mecánico, que indica el número de dosis diarias que se han dispensado. Otro ejemplo de dicho recordatorio es una memoria de microchip alimentada por pilas acoplada con un lector de cristal líquido, o una señal audible de recuerdo que, por ejemplo, lee la fecha en la que se tomó la última dosis diaria y/o recuerda cuándo se debe tomar la dosis siguiente.

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Un ligando de receptor de neurotensina y otros compuestos farmacéuticamente activos, si se desea, pueden administrarse a un paciente por vía oral, rectal, parenteral (por ejemplo, intravenosa, intramuscular o subcutánea) intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, intravesical, local (por ejemplo, polvos, pomadas o gotas) o como nebulizador bucal o nasal.

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Las composiciones adecuadas para inyección parenteral pueden comprender soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas estériles fisiológicamente aceptables, o pueden comprender polvos estériles para reconstitución en soluciones o dispersiones inyectables estériles. Los ejemplos de excipientes, diluyentes, disolventes o vehículos acuosos y no acuosos adecuados incluyen agua, etanol, polioles (propilenglicol, polietilenglicol, glicerol y similares), mezclas adecuadas de los mismos, triglicéridos, incluyendo aceites vegetales como aceite de oliva, o ésteres orgánicos inyectables como oleato de etilo. Un excipiente preferido es Miglyol®. Puede mantenerse la fluidez apropiada, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento como lecitina, por el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones y/o por el uso de tensioactivos.

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Estas composiciones pueden contener también adyuvantes como agentes conservantes, humectantes, emulsionantes y/o dispersantes. La prevención de contaminación por microorganismos de las composiciones puede lograrse por la adición de diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico y similares. También puede ser deseable incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, cloruro de sodio y similares. La absorción prolongada de composiciones farmacéuticas inyectables puede conseguirse mediante el uso de agentes capaces de retardar la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y/o gelatina.

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Las formas de dosificación sólidas para administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, polvos y gránulos. En dichas formas de dosificación sólidas, el compuesto activo se mezcla con al menos un excipiente (o excipiente) inerte habitual como citrato de sodio o fosfato de dicalcio o (a) cargas o extensores, como por ejemplo, almidones, lactosa, sacarosa, manitol o ácido silícico; (b) aglutinantes, como por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa o acacia; (c) humectantes, como por ejemplo, glicerol; (d) agentes de desintegración, como por ejemplo, agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos complejos o carbonato de sodio; (e) retardantes de solución, como por ejemplo, parafina; (f) aceleradores de absorción, como por ejemplo, compuestos de amonio cuaternario; (g) agentes humidificantes, como por ejemplo, alcohol cetílico o monoestearato de glicerol; (h) adsorbentes, como por ejemplo, caolín o bentonita; y/o (i) lubricantes, como por ejemplo, talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, laurilsulfato de sodio o mezclas de los mismos. En el caso de cápsulas y comprimidos, las formas de dosificación pueden comprender también agentes de tamponamiento. 5

ES 2 264 679 T3 Las composiciones sólidas de un tipo similar pueden usarse también como cargas en cápsulas de gelatina de carga blanda o dura usando dichos excipientes como lactosa o azúcar de la leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares. 5

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Las formas de dosificación sólidas como comprimidos, grageas, cápsulas y gránulos pueden prepararse con recubrimientos o cubiertas, como recubrimientos entéricos y otros bien conocidos en la técnica. También pueden contener agentes de opacificación, y también pueden ser de composición tal que liberen el compuesto o compuestos activos de forma retardada. Los ejemplos de composiciones embebidas que pueden usarse son sustancias poliméricas y ceras. Los compuestos activos pueden también estar en forma microencapsulada, si resulta apropiado, con uno o más de los excipientes mencionados anteriormente. Las formas de dosificación líquidas para administración oral incluyen emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además de los compuestos activos, la forma de dosificación líquida puede contener diluyentes inertes usados comúnmente en la técnica, como agua u otros disolventes, agentes de solubilización y emulsionantes, como por ejemplo, alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites, en particular, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, aceite de germen de maíz, aceite de oliva, aceite de ricino, aceite de semilla de sésamo, Miglyol®, glicerol, alcohol tetrahidrofurfurílico, polietilenglicoles, ésteres de ácidos grasos de sorbitano o mezclas de estas sustancias, y similares.

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Además de dichos diluyentes inertes, la composición puede incluir también adyuvantes, como agentes humidificantes, agentes emulsionantes y de suspensión, y agentes edulcorantes, aromatizantes y perfumantes. 25

Las suspensiones, además del compuesto activo, pueden contener agentes de suspensión, como por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilensorbitol o ésteres de sorbitano, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar, tragacanto o mezclas de estas sustancias, y similares.

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Las composiciones para administración rectal o vaginal pueden prepararse mezclando un ligando de receptor de neurotensina y cualquier compuesto adicional con excipientes o excipientes no irritantes adecuados como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera supositoria, que son sólidos a temperatura ambiente normal pero líquidos a la temperatura corporal, y por tanto, se funden en el recto o la cavidad vaginal y liberan el ligando de receptor de neurotensina.

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Las formas de dosificación para administración tópica de un ligando de receptor de neurotensina incluyen pomadas, polvos, nebulizadores e inhalantes. El o los compuestos se mezclan en condiciones estériles con un excipiente fisiológicamente aceptable, y cualquier conservante, tampón y/o propelente que pudiera requerirse. Las formulaciones oftálmicas, pomadas oculares, polvos y soluciones también se contemplan como dentro del ámbito de esta invención. Un ligando de receptor de neurotensina puede administrarse a un paciente en niveles de dosificación en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 7.000 mg al día. Un intervalo de dosificación preferido es de aproximadamente 1 a aproximadamente 100 mg al día. La dosificación y el intervalo de dosificación específicos que pueden usarse dependen de una serie de factores, que incluyen los requisitos del paciente, la gravedad de la dolencia o la enfermedad que se está tratando y la actividad farmacológica del compuesto que se va a administrar. La determinación de los intervalos de dosificación y las dosificaciones óptimas para un paciente en particular están perfectamente dentro de la habilidad de un experto en la técnica a la vista de esta descripción. Los párrafos siguientes describen formulaciones, dosificaciones, etc., ilustrativas útiles para animales no humanos. La administración de un ligando de receptor de neurotensina puede efectuarse oralmente o no oralmente, por ejemplo por inyección. Se administra una cantidad de un ligando de receptor de neurotensina tal que se recibe una dosis terapéuticamente eficaz, generalmente una dosis diaria que, cuando se administra oralmente a un animal, está habitualmente entre 0,01 y 1.000 mg/kg de peso corporal, preferentemente entre 0,1 y 50 mg/kg de peso corporal. Convenientemente, el compuesto o compuestos pueden transportarse en el agua potable de manera que se ingiera una dosis terapéutica del compuesto o compuestos con el suministro de agua diaria. El compuesto o compuestos pueden medirse directamente en agua potable, preferentemente en forma de un líquido, un concentrado hidrosoluble (como una solución acuosa de una sal hidrosoluble). Convenientemente, el compuesto o compuestos pueden añadirse también directamente al alimento, como tal, o en forma de un suplemento alimentario animal, también referido como premezcla o concentrado. Una premezcla o concentrado en un excipiente se emplea más habitualmente para la inclusión del compuesto o compuestos en el alimento. Excipientes adecuados son líquidos o sólidos, según se desee, como agua, diversas harinas como harina de alfalfa, harina de soja, harina de aceite de semilla de algodón, harina de aceite de linaza, harina de mazorcas de maíz y harina de maíz, melazas, urea, harina de huesos, y mezclas minerales como se usan habitualmente en el alimento para aves de corral. Un excipiente particularmente eficaz es el alimento animal respectivo en sí; es decir, una pequeña porción de dicho alimento. El excipiente facilita la distribución uniforme del compuesto o compuestos en el alimento final con el que se mezcla la premezcla. Es importante que el compuesto o compuestos se mezclen minuciosamente en la premezcla y, posteriormente, el alimento. A este respecto, el compuesto o compuestos pueden dispersarse o disolverse en un vehículo oleoso adecuado como aceite de soja, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón y similares, o en un disolvente orgánico volátil y a continuación mezclarse con el excipiente. Se apreciará que las proporciones de compuesto o compuestos en el concentrado son capaces de una amplia variación, ya que la cantidad de compuesto o compuestos activos en el alimento final puede ajustar6

ES 2 264 679 T3 se mezclando la proporción apropiada de premezcla con el alimento para obtener un nivel deseado del compuesto o compuestos. 5

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Los concentrados de alta potencia pueden ser mezclados por el fabricante de alimentos con excipiente proteináceo como harina de aceite de soja u otras harinas, según se describe anteriormente, para producir suplementos concentrados que son adecuados para alimentación directa a animales. En tales casos, se permite a los animales que consuman la dieta habitual. Alternativamente, dichos suplementos concentrados pueden añadirse directamente al alimento para producir un alimento final equilibrado nutricionalmente que contiene un nivel terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención. Las mezclas se mezclan minuciosamente mediante procedimientos convencionales, como en una mezcladora de doble carcasa, para garantizar la homogeneidad. Si el suplemento se usa como aderezo superior del alimento, ayuda análogamente a garantizar la uniformidad de distribución del compuesto o compuestos en toda la parte superior del alimento aderezado.

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Para administración parenteral en animales no humanos, el compuesto o compuestos pueden prepararse en forma de una pasta o un sedimento y administrarse como un implante habitualmente bajo la piel de la cabeza o la oreja del animal. Las formulaciones de pasta pueden prepararse dispersando un compuesto o compuestos en aceite farmacéuticamente aceptable como aceite de cacahuete, aceite de sésamo, aceite de maíz o similares. Los sedimentos que contienen una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o compuestos pueden prepararse mezclando el compuesto con un diluyente como carbocera, cera de carnauba y similares, y puede añadirse un lubricante como estearato de magnesio o calcio, para mejorar el procedimiento de formación de sedimento.

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Naturalmente, se reconoce que puede administrarse más de un sedimento a un animal para conseguir el nivel de dosis deseado. Por otra parte, se ha encontrado que pueden hacerse también periódicamente implantes durante el período de tratamiento del animal para mantener el nivel apropiado de agente activo en el cuerpo del animal. 30

Los términos sales o profármacos farmacéuticamente aceptables incluyen las sales y profármacos de compuestos que, dentro del ámbito del criterio médico fundado, son adecuados para su uso con pacientes sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica indebida y similares, proporcionados con una proporción de beneficio/riesgo razonable, y eficaces para su uso pretendido, así como las formas iónicas bipolares, si son posibles, de los compuestos.

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El término “sales” se refiere a sales inorgánicas y orgánicas de compuestos. Estas sales pueden prepararse in situ durante el aislamiento y purificación final de un compuesto, o por reacción separada de un compuesto purificado con ácido o base orgánicos o inorgánicos adecuados, según resulte apropiado, y aislamiento de la sal así formada. Las sales representativas incluyen las sales bromhidrato, clorhidrato, sulfato, bisulfato, nitrato, acetato, oxalato, palmitiato, estearato, laurato, borato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, besilato, esilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactobionato y laurilsulfonato y similares. Éstas pueden incluir cationes basados en los metales alcalinos y alcalinotérreos como sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y similares, así como amonio no tóxico, amonio cuaternario y cationes amina incluyendo, pero sin limitarse a, amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina y similares. Ver, por ejemplo, S.M. Berge, y col., “Pharmaceutical Salts,” J Pharm Sci, 66:1-19 (1977).

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El término “profármaco” significa un compuesto que se transforma in vivo para producir un compuesto terapéuticamente activo. La transformación puede ocurrir por diversos mecanismos, como a través de hidrólisis en sangre. Se proporciona una exposición del uso de profármacos en T. Higuchi y W. Stella, “Pro-drugs as Novel Delivery Systems,” Vol. 14 de A.C.S Symposium Series, y en Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association y Pergamon Press, 1987. Por ejemplo, si un compuesto contiene un grupo funcional de ácido carboxílico, un profármaco puede comprender un éster formado por la sustitución del átomo de hidrógeno del grupo ácido por un grupo como alquilo(C1 -C8 ), alcanoiloximetilo(C2 -C12 ), 1-(alcanoiloxi)etilo que tiene de 4 a 9 átomos de carbono, 1-metil-1-(alcanoiloxi)-etilo que tiene de 5 a 10 átomos de carbono, alcoxicarboniloximetilo que tiene de 3 a 6 átomos de carbono, 1-(alcoxicarboniloxi) etilo que tiene de 4 a 7 átomos de carbono, 1-metil-1-(alcoxicarboniloxi)etilo que tiene de 5 a 8 átomos de carbono, N(alcoxicarbonil)aminometilo que tiene de 3 a 9 átomos de carbono, 1-(N-(alcoxicarbonil)amino)etilo que tiene de 4 a 10 átomos de carbono, 3-ftalidilo, 4-crotonolactonilo, gamma-butirolacton-4-ilo, di-N,N-alquil(C1 -C2 )aminoalquilo(C2 -C3 ) (como β-dimetilaminoetilo), carbamoil-alquilo(C1 -C2 ), N,N-dialquil (C1 -C2 ) carbamoilalquilo (C1 -C2 ) y piperidino-, pirrolidino- o morfolinoalquilo(C2 -C3 ). Análogamente, si un compuesto comprende un grupo funcional alcohol, un profármaco puede formarse por la sustitución del átomo de hidrógeno del grupo alcohol por un grupo como alcanoiloximetilo(C1 -C6 ), 1-(alcanoiloxi (C1 -C6 ))etilo, 1-metil-1(alcanoiloxi(C1 -C6 ))etilo, alcoxicarboniloximetilo(C1 -C6 ), N-alcoxicarbonilaminometilo(C1 C6 ), succinoílo, alcanoílo(C1 -C6 ), α-aminoalcanoílo(C1 -C4 ), arilacilo y un α-aminoacilo, o α-aminoacil-α-aminoacilo, en los que cada grupo α-aminoacilo se selecciona independientemente entre los L-aminoácidos que aparecen de forma natural, P(O)-(OH)2 , -P(O)-(O-alquilo(C1 -C6 ))2 o glicosilo (el radical resultante de la eliminación de un grupo hidroxilo de la forma hemiacetal de un carbohidrato). 7

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Si un compuesto comprende un grupo funcional amina, un profármaco puede formarse por la sustitución de un átomo de hidrógeno en el grupo amina por un grupo como R-carbonilo, RO-carbonilo, NRR’-carbonilo en el que R y R’ son cada uno independientemente (alquilo(C1 -C10 ), cicloalquilo(C3 -C7 ), bencilo, o R-carbonilo es un α-aminoacilo natural o un α-aminoacil natural-α-aminoacilo natural, -C-(OH)C(O)OY en el que Y es H, alquilo(C1 -C6 ) o bencilo, -C (OY0 )Y1 en el que Y0 es alquilo(C1 -C4 ) e Y1 es (alquilo(C1 -C6 ), carboxialquilo(C1 -C6 ), aminoalquilo(C1 -C4 ) o monoN- o di-N,N-alquilaminoalquilo(C1 -C6 ), -C(Y2 )Y3 en el que Y2 es H o metilo e Y3 es mono-N- o di-N,N-alquilamino (C1 -C6 ), morfolino, piperidin-1-ilo o pirrolidin-1-ilo. Un ligando de receptor de neurotensina puede contener centros asimétricos o quirales, y por tanto, existir en diferentes formas estereoisoméricas. Se contempla que todas las formas estereoisoméricas, así como las mezclas de las mismas, incluyendo mezclas racémicas, forman parte de la presente invención. Además, la presente invención contempla todos los isómeros geométricos y posicionales. Por ejemplo, si un compuesto contiene un doble enlace, se contemplan las formas cis y trans, así como sus mezclas. Las mezclas de isómeros, incluyendo estereoisómeros, pueden separarse en sus isómeros individuales sobre la base de sus diferencias físico-químicas por procedimientos bien conocidos por los expertos en la materia, como por cromatografía y/o cristalización fraccionaria. Los enantiómeros pueden separarse convirtiendo la mezcla enantiomérica en una mezcla diastereomérica por reacción con un compuesto activo ópticamente apropiado (por ejemplo, alcohol), separando los diastereoisómeros y convirtiendo (por ejemplo, hidrolizando) los diastereómeros individuales en los correspondientes enantiómeros puros. También, algunos de los compuestos de esta invención pueden ser atropisómeros (por ejemplo, biarilos sustituidos) y se consideran parte de esta invención. Un ligando de receptor de neurotensina puede existir en formas sin solvatar así como formas solvatadas con disolventes farmacéuticamente aceptables como agua, etanol y similares. La presente invención contempla y abarca las formas solvatadas y sin solvatar. También es posible que un ligando de receptor de neurotensina pueda existir en diferentes formas tautoméricas. Se contemplan todos los tautómeros de un ligando de receptor de neurotensina.

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Los expertos en la materia reconocerán que los nombres de los compuestos contenidos en la presente memoria descriptiva pueden basarse en un tautómero particular de un compuesto. Aunque puede usarse el nombre de un único tautómero particular, se pretende que en el nombre del tautómero particular estén abarcados todos los tautómeros, y todos los tautómeros se consideran parte de la presente invención.

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También se pretende que la invención descrita en la presente memoria descriptiva abarque compuestos que se sintetizan in vitro usando técnicas de laboratorio, como las que son bien conocidas para los químicos sintéticos; o se sinteticen usando técnicas in vivo, como a través de metabolismo, fermentación, digestión, y similares. Se contempla también que los compuestos puedan sintetizarse usando una combinación de técnicas in vitro e in vivo.

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La presente invención incluye también compuestos marcados isotópicamente, que son idénticos a los compuestos no marcados isotópicamente, salvo por el hecho de que uno o más átomos están sustituidos por un átomo que tiene una masa atómica o número másico diferentes de la masa atómica o número másico habitualmente encontrados de forma más abundante en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en compuestos identificados por la presente invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, como 2 H, 3 H, 13 C, 14 C, 15 N, 18 O, 17 O, 31 P, 32 P, 35 S, 18 F, 135 I y 36 Cl, respectivamente. Los ligandos de receptores de neurotensina, profármacos de los mismos, y sales farmacéuticamente aceptables de dichos ligandos o de dichos profármacos que contienen los isótopos mencionados anteriormente y/u otros isótopos de otros átomos están dentro del ámbito de esta invención. Ciertos compuestos marcados isotópicamente de la presente invención, por ejemplo aquéllos en los que se incorporan isótopos radiactivos como 3 H y 14 C, son útiles en los ensayos de distribución de fármaco y/o sustrato en tejido. Los isótopos tritiados, es decir, 3 H, y carbono-14, es decir, 14 C, se prefieren particularmente por su facilidad de preparación y detectabilidad. Además, la sustitución con isótopos más pesados como deuterio, es decir, 2 H, puede producir ciertas ventajas terapéuticas resultantes de mayor estabilidad metabólica, por ejemplo semivida in vivo aumentada o requisitos de dosificación reducidos y, por ello, puede preferirse en algunas circunstancias. Los compuestos marcados isotópicamente pueden prepararse generalmente por sustitución de un reactivo no marcado isotópicamente por un reactivo marcado isotópicamente de fácil disponibilidad.

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La presente invención se refiere al uso de ligandos de receptores de neurotensina para tratar obesidad, diabetes, disfunción sexual, aterosclerosis, resistencia a la insulina, tolerancia a la glucosa deteriorada. hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia. Además, un ligando de receptor de neurotensina, en particular ligandos de receptores de neurotensina-2, puede usarse para tratar hipertermia; hipotermia; úlceras gastrointestinales; abuso de sustancias; depresión; enfermedad de Alzheimer; discinesia tardía; ataque de pánico; trastorno con reflujo gastrointestinal; síndrome del intestino irritable; diarrea; cólico; dispepsia; pancreatitis; esofagitis; gastroparesia; enfermedades neurológicas como esquizofrenia, psicosis, ansiedad, depresión maníaca, demencia por delirio, retraso mental grave y discinesias como enfermedad de Huntington y síndrome de Tourett; infecciones fúngicas y virales, incluyendo infecciones por VIH-1 y VIH-2; dolor (es decir, un analgésico); cáncer (Incluyendo tumores gastrointestinales); anorexia; bulimia; asma; enfermedad de 8

ES 2 264 679 T3 Parkinson; insuficiencia cardíaca aguda; hipotensión: hipertensión; retención urinaria; osteoporosis; angina de pecho; infarto de miocardio; alergias; inflamación; o hipertrofia prostática benigna. 5

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Los usos de la presente invención pueden incluir también terapia de combinación en la que se usan otros compuestos farmacéuticamente activos útiles para el tratamiento de obesidad u otras enfermedades en combinación con un ligando de receptor de neurotensina. Se sabe que ciertas enfermedades como aterosclerosis, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, hipertensión, disfunción sexual (incluyendo disfunción eréctil), resistencia a la insulina, tolerancia a la glucosa deteriorada, diabetes, (particularmente diabetes mellitus no insulinodependiente (DMNID o diabetes de tipo 2)) y las enfermedades asociadas con diabetes como nefropatía, neuropatía, retinopatía, cardiomiopatía, cataratas y síndrome del ovario poliquístico tienen incidencias más altas en pacientes obesos. Estas enfermedades pueden tratarse indirectamente tratando la obesidad usando un ligando de receptor de neurotensina o directamente tratando la enfermedad específica en sí usando un ligando de receptor de neurotensina. Estas enfermedades pueden tratarse en ausencia de obesidad usando un ligando de receptor de neurotensina. En un paciente obeso o un paciente con riesgo de convertirse en obeso puede administrarse una combinación de: 1) un ligando de receptor de neurotensina; y 2) un compuesto adicional útil para tratar obesidad, diabetes [incluyendo (DMNID) y las dolencias y/o enfermedades asociadas con diabetes, como nefropatía, neuropatía, retinopatía, cardiomiopatía, cataratas y síndrome del ovario poliquístico], aterosclerosis, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, disfunción sexual (incluyendo disfunción eréctil), resistencia a la insulina o tolerancia a la glucosa deteriorada, o combinaciones de compuestos útiles para tratar estas enfermedades. La disfunción sexual se produce en varones y mujeres e incluye trastorno de deseo sexual hipoactivo, anhedonia sexual y dispareunia. El trastorno de deseo sexual hipoactivo es un trastorno en el que las fantasías sexuales y el deseo de actividad sexual están disminuidos o ausentes de forma persistente o recurrente, causando un acusado malestar o dificultades interpersonales. Los síntomas y signos del trastorno de deseo sexual hipoactivo incluyen la queja del paciente de una falta de interés en el sexo, incluso en situaciones normalmente eróticas. El trastorno se asocia habitualmente con actividad sexual infrecuente, causando a menudo un serio conflicto en la pareja. La anhedonia sexual es el placer disminuido o ausente en la actividad sexual. La anhedonia sexual se clasifica casi siempre como trastorno del deseo sexual hipoactivo, porque la pérdida de placer produce normalmente pérdida de deseo. La dispareunia es el coito o intento de coito doloroso. La disfunción eréctil es otro ejemplo de una disfunción sexual. La disfunción eréctil, como la obesidad, es otra dolencia que puede provocar un malestar emocional grave. Las personas que sufren disfunción eréctil son incapaces de desarrollar y/o mantener una erección del pene. Históricamente, la disfunción eréctil se ha visto como derivada de componentes biológicos y psicológicos, y parece haberse ejercido más esfuerzo en tratar los componentes psicológicos de la dolencia. Sólo recientemente, con la introducción de Viagra®, se ha ofrecido a las personas que tienen esta dolencia un tratamiento medicinal oral.

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La diabetes se encuentra más frecuentemente en pacientes obesos que en pacientes no obesos. A pesar del descubrimiento temprano de la insulina y su posterior uso extendido en el tratamiento de diabetes, y del posterior descubrimiento y uso de sulfonilureas, biguanidas y tiazolidendionas, como troglitazona, rosiglitazona o pioglitazona, como agentes hipoglucémicos orales, el tratamiento de la diabetes sigue siendo menos que satisfactorio. 45

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El uso de insulina requiere actualmente múltiples dosis diarias, habitualmente por autoinyección. La determinación de la dosificación apropiada de insulina requiere frecuentes estimaciones del azúcar en orina o sangre. La administración de una dosis en exceso de insulina causa hipoglucemia, con efectos que van desde anomalías leves en la glucosa en sangre al coma e incluso la muerte. El tratamiento de la diabetes mellitus no insulinodependiente (diabetes de tipo 2, DMNID) consiste habitualmente en una combinación de dieta, ejercicio, agentes hipoglucémicos orales, por ejemplo, tiazolidendionas y, en casos más graves, insulina. Sin embargo, los agentes hipoglucémicos clínicamente disponibles pueden tener efectos secundarios que limitan su uso, o un agente puede no ser eficaz para un paciente determinado. En el caso de diabetes mellitus insulinodependiente (Tipo 1), la insulina es habitualmente el paso primario de la terapia. Se necesitan agentes hipoglucémicos adicionales que tengan menos efectos secundarios o que tengan éxito cuando otros fracasan. La aterosclerosis, una enfermedad de las arterias, se reconoce como una causa primaria de muerte en los Estados Unidos y Europa occidental. La secuencia patológica que lleva a aterosclerosis y enfermedad cardíaca oclusiva es bien conocida. La primera fase de esta secuencia es la formación de “bandas grasas” en las arterias carótida, coronaria y cerebral y en la aorta. Estas lesiones son de color amarillo debido a la presencia de depósitos lipídicos encontrados principalmente en las células del músculo liso y en macrófagos de la capa íntima de las arterias y la aorta. Además, se postula que la mayoría del colesterol encontrado en las bandas grasas, a su vez, da origen al desarrollo de “placas fibrosas”, que consisten en células de músculo liso de la íntima acumuladas cargadas con lípidos y rodeadas por lípido extracelular, colágeno, elastina y proteoglicanos. Las células más la matriz forman una cubierta fibrosa que cubre un depósito más profundo de desecho celular y más lípido extracelular. El lípido es principalmente colesterol libre y esterificado. La placa fibrosa se forma lentamente, y es probable que con el tiempo se calcifique y se necrose, avanzando a una “lesión complicada”, que supone oclusión arterial y tendencia hacia la trombosis mural y el espasmo muscular arterial que caracterizan a la aterosclerosis avanzada. 9

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La evidencia epidemiológica ha establecido firmemente hiperlipidemia como factor de riesgo primario para causar enfermedad cardiovascular (ECV) debido a aterosclerosis. En los últimos años, los líderes de la profesión médica han puesto un énfasis renovado en reducir los niveles de colesterol en plasma, y en particular de colesterol de lipoproteínas de baja densidad, como un paso esencial en la prevención de ECV. Se sabe ahora que los límites superiores de “normalidad” son significativamente menores que lo que se había apreciado hasta el momento. Como consecuencia, grandes segmentos de las poblaciones occidentales presentan, según se sabe ahora, riesgo particularmente alto. Dichos factores de riesgo independientes incluyen intolerancia a la glucosa, hipertrofia ventricular izquierda, hipertensión y ser del sexo masculino. La enfermedad cardiovascular es especialmente prevalente entre sujetos diabéticos, al menos en parte debido a la existencia de múltiples factores de riesgo independientes en esta población. El tratamiento con éxito de la hiperlipidemia en la población general, y en sujetos diabéticos en particular, es por tanto de importancia médica excepcional. La hipertensión (o alta presión arterial) es una dolencia que se da en la población humana como un síntoma secundario a otros trastornos diversos como estenosis arterial renal, feocromocitoma o trastornos endocrinos. Sin embargo, la hipertensión se evidencia también en muchos pacientes en los que el agente o trastorno causante se desconoce. Aunque dicha hipertensión “esencial” se asocia a menudo con trastornos como obesidad, diabetes e hipertrigliceridemia, la relación entre estos trastornos no se ha elucidado. Además, muchos pacientes muestran los síntomas de alta presión arterial en ausencia completa de cualquier otro signo de enfermedad o trastorno.

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Se sabe que la hipertensión puede conducir directamente a insuficiencia cardíaca, insuficiencia renal y accidente cerebrovascular (hemorragia encefálica). Estas dolencias pueden causar la muerte de un paciente. La hipertensión puede contribuir también al desarrollo de aterosclerosis y enfermedad coronaria. Estas dolencias debilitan gradualmente al paciente y pueden provocar la muerte.

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La causa exacta de hipertensión esencial se desconoce, aunque se cree que una serie de factores contribuyen al inicio de la enfermedad. Entre estos factores están estrés, emociones no controladas, liberación hormonal no regulada (el sistema de renina, angiotensina, aldosterona), exceso de sal y agua debido a mal funcionamiento renal, engrosamiento e hipertrofia de las paredes de la vasculatura que produce vasos sanguíneos constreñidos y factores genéticos.

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El tratamiento de hipertensión esencial se ha emprendido teniendo en cuenta los factores anteriores. Así, se ha desarrollado y comercializado como antihipertensivos una amplia gama de beta-bloqueantes, vasoconstrictores, inhibidores de enzimas de conversión de angiotensina y similares. El tratamiento de hipertensión que utiliza estos compuestos se ha mostrado beneficioso en la prevención de muertes en intervalo breve como insuficiencia cardíaca, insuficiencia renal y hemorragia encefálica.

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La hipertensión se ha asociado con altos niveles de insulina en sangre, una dolencia conocida como hiperinsulinemia. La insulina, una hormona peptídica cuyas acciones primarias son promover el uso de glucosa, la síntesis de proteínas y la formación y almacenamiento de lípidos neutros, actúa también para promover el crecimiento celular vascular y aumentar la retención renal de sodio, entre otras cosas. Estas últimas funciones pueden conseguirse sin afectar a los niveles de glucosa y son causas conocidas de hipertensión. El crecimiento de la vasculatura periférica, por ejemplo, puede causar constricción de capilares periféricos, mientras que la retención de sodio aumenta el volumen de la sangre. Así, la disminución de los niveles de insulina en hiperinsulinémicos puede prevenir el crecimiento vascular anormal y la retención renal de sodio causados por altos niveles de insulina y, con ello, aliviar la hipertensión.

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Un ligando de receptor de neurotensina puede usarse en combinación con uno o más compuestos que son útiles para tratar la obesidad. Los ejemplos de clases de compuestos que pueden usarse para tratar la obesidad incluyen el o los compuestos activos en supresores de apetito como Adipex®, Bontril®, Desoxin Gradumet®, Fastin®, Ionamin® y Meridia®, e inhibidores de lipasa como Xenical®.

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Los agentes antiobesidad adicionales que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina incluyen un agonista de receptor β3 -adrenérgico, un agonista de colecistoquinina-A, un inhibidor de recaptación de monoamina, un agente simpatomimético, un agente serotoninérgico, un agonista de dopamina, un agonista o mimético de receptor de hormona estimuladora de melanocitos, un análogo de receptor de hormona estimuladora de melanocitos, un antagonista de receptor de cannabinoide, un antagonista de hormona de concentración de melanina, leptina, un análogo de leptina, un agonista de receptor de leptina, un antagonista de galanina, un agonista de bombesina, un antagonista de neuropéptido-Y (incluyendo NPY-1 y NPY-5), un agente tiromimético, deshidroepiandrosterona o un análogo de la misma, un agonista o antagonista de receptor de glucocorticoide, un antagonista de receptor de orexina, un antagonista de proteína de unión a urocortina, un agonista de receptor de péptido-1 de tipo glucagón y un factor neurotrófico ciliar.

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Agentes antiobesidad preferidos especialmente que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina incluyen compuestos seleccionados del grupo que consiste en sibutramina, fenfluramina, dexfenfluramina, bromocriptina, fentermina, orlistat, efedrina, leptina, fenilpropanolamina, pseudoefedrina, ácido {4-[2-(2-[6-aminopiridin-3-il]-2(R)hidroxietilamino)etoxi]fenil}acético, ácido {4(2-[2-[6-aminopiridin-3-il]-2(R)-hidroxietilamino] etoxi)fenil}-benzoico, ácido {4[2-2-[6-aminopiridin-3-il]-2(R)-hidroxietilamino)etoxi]fenil}propiónico y ácido {4[2-(2-[6-aminopiridin-3-il]-2(R)-hidroxietilamino)etoxi]fenoxi}acético.

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ES 2 264 679 T3 Los ejemplos de tiromiméticos que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina incluyen los descritos en las solicitudes de patente provisionales de EE.UU. nº 60/178.968 y 60/177.987. 5

Los ejemplos de ligandos de receptores de glucocorticoides que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina incluyen los descritos en el documento WO-00/66.522. Los ejemplos de antagonistas neuropéptido-Y que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina incluyen los descritos en los documentos WO-98/23.603, US 5.900.415, US 5.914.329 y WO-00/66.578 (NPY-5).

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Los ejemplos de agonistas de receptores β3 -adrenérgicos que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina incluyen los descritos en el documento WO-96/35.671. Los compuestos adicionales que pueden usarse para tratar la obesidad y que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina incluyen los compuestos descritos en el documento WO-98/46.243. Análogamente, los compuestos que pueden usarse para tratar la disfunción sexual, y particularmente la disfunción eréctil, como Viagra®, pueden usarse también en combinación con un ligando de receptor de neurotensina. Otros compuestos que pueden usarse para tratar la disfunción sexual, particularmente la disfunción eréctil, y que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina incluyen apomorfina e IC351 (ICOS). Una clase de compuestos que son útiles para tratar la disfunción sexual, particularmente la disfunción eréctil, son inhibidores de la fosfodiesterasa V. Los ejemplos de inhibidores de la fosfodiesterasa V pueden encontrarse en la patente de EE.UU. nº 5.272.147. Un ligando de receptor de neurotensina puede administrarse en combinación con un compuesto que se conoce para tratar la hipertensión. Los ejemplos de clases de compuestos que pueden usarse para tratar hipertensión incluyen bloqueantes del calcio, inhibidores de ACE, diuréticos, bloqueantes de receptor de angiotensina II, β-bloqueantes y bloqueantes α-adrenérgicos. Además, se han usado combinaciones de compuestos de las clases enumeradas anteriormente para tratar la hipertensión. Algunos ejemplos de compuestos específicos que pueden usarse en combinación con ligandos de receptores de neurotensina incluyen quinapril; amlodipina, incluyendo la sal mesilato; nifedipina; doxazosina, incluyendo la sal mesilato, y prazosina, incluyendo la sal clorhidrato. Un ligando de receptor de neurotensina puede usarse en combinación con compuestos usados para el tratamiento de diabetes, incluyendo tolerancia a la glucosa deteriorada, resistencia a la insulina, diabetes mellitus insulinodependiente (Tipo 1) y diabetes mellitus no insulinodependiente (DMNID o Tipo 2). También se pretende abarcar en el tratamiento de diabetes las complicaciones diabéticas, como neuropatía, nefropatía, retinopatía, cardiomiopatía o cataratas. Los agentes representativos que pueden usarse para tratar diabetes y que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina incluyen, pero no se limitan a, insulina y análogos de insulina (por ejemplo, insulina LysPro); GLP-1 (7-37) (insulinotropina) y GLP-1 (7-36)-NH2 ; sulfonilureas y análogos: clorpropamida, glibenclamida, tolbutamida, tolazamida, acetohexamida, glipizida, glimepirida, repaglinida, meglitinida; biguanidas: metformina, fenformina, buformina; α2 -antagonistas e imidazolinas: midaglizol, isaglidol, deriglidol, idazoxan, efaroxan, fluparoxan; otros secretagogos de insulina: linoglirida, A-4166; glitazonas: ciglitazona, pioglitazona, englitazona, troglitazona, darglitazona, BRL49653; inhibidores de oxidación de ácidos grasos: clomoxir, etomoxir; inhibidores de α-glucosidasa: acarbosa, miglitol, emiglitato, voglibosa, MDL-25.637, carniglibosa, MDL-73.945; β-agonistas: BRL 35135, BRL. 37344, Ro 16-8714, ICI D7114, CL 316.243; inhibidores de fosfodiesterasa: L-386.398; agentes reductores de lípidos: benfluorex; agentes antiobesidad: fenfluramina y orlistat; antagonistas de vanadato y vanadio; antagonistas de glucagón; inhibidores de gluconeogénesis; agonistas y antagonistas de somatostatina; agentes antilipolíticos: ácido nicotínico, acipimox, WAG 994; e inhibidores de glicógeno fosforilasa, como los descritos en el documento WO96/39.385 y WO-96/39.384. También se contemplan en combinación con compuestos de la presente invención acetato de pramlintida (SymlinTM ) y nateglinida. Los ejemplos preferidos de inhibidores de glucógeno fosforilasa que pueden usarse en la presente invención en combinación con un ligando de receptor de neurotensina incluyen:

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Ácido 6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]-amida; 60

Ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxo-propil]-amida; Ácido 2-metil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxo-propil]-amida;

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Ácido (±)-2-metil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [1-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil] amida; 11

ES 2 264 679 T3 Ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida; 5

Ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxo-propil]amida; Ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida;

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Ácido 2,4-dicloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxo-propil]-amida; Ácido (±)-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [1-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; 15

Ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxo-propil]-amida; 20

Ácido 4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]-amida; Ácido (±)-2-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [1-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida;

25

Ácido 2-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxo-propil]-amida; 30

Ácido 6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; Ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida;

35

40

Ácido 2-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida; Ácido 2,4-dicloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxoetil]-amida; Ácido 2-ciano-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-(3-hidroxi-azetidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; Ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-morfolin-4-il-2-oxo-etil]-amida;

45

Ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-dimetilcarbamoil-2-feniletil]amida; Ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-(1,1-dioxo-1tiazolidin-3-il)-2-oxo-etil]-amida; 50

Éster etílico del ácido 1-((2S)[(2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carbonil)amino]-3-fenil-propionil)-piperidina-4carboxílico; 55

Ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-(3-hidroxi-azetidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; Ácido 2-metil-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida;

60

Ácido 2-trimetilsilaniletinil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-(3-hidroxi-azetidin-1-il)-2-oxoetil]-amida; Ácido 2-etinil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida;

65

Ácido 2-fluoro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida; 12

ES 2 264 679 T3 Ácido 2-ciano-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-(3-hidroxi-azetidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida;

5

Ácido 2-cloro-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil] amida; Ácido 2-cloro-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi3-oxo-propil]-amida;

10

Ácido 1-((2S)-[(2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carbonil)amino]-3-fenil-propionil)piperidin-4-carboxílico; Ácido 3-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida;

15

20

Ácido 3-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxo-propil]-amida; Ácido 3-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida; Ácido 3-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxo-propil]-amida;

25

30

Ácido 2-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxo-propil]-amida; Ácido 2-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida; Ácido 3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida;

35

40

Ácido 3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-(00(3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxo-propil]-amida; Ácido 2-ciano-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida; Ácido 2-ciano-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-(3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi3-oxo-propil]-amida;

45

50

Ácido 3-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida; Ácido 3-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxo-propil]-amida; Ácido 4H-1,7-ditia-4-aza-ciclopenta[a]pentalen-5-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)(2R)-hidroxi-3-oxo-propil]-amida;

55

60

Ácido 4H-1,7-ditia-4-aza-ciclopenta[a]pentalen-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)2-oxo-etil]-amida; Ácido 2-cloro-3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2oxo-etil]-amida; Ácido 2-cloro-3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-3((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)hidroxi-3-oxo-propil]-amida;

65

Ácido 2-metilsulfanil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4S)dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2oxo-etil]-amida;

13

ES 2 264 679 T3 Ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-(3-hidroxi-azetidin-1-il) 2-oxo-etil]-amida; Ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-(1,1-dioxo-1-tiazolidin-3-il)-2-oxo-etil]-ami5

da; Ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-morfolin-4-il-2-oxo-etil]-amida;

10

Ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3S,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida; Ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3R,4R)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]amida;

15

20

Ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico [(1S)-bencil-2-(4-hidroxipiperidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; y las sales y profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, y sales de los profármacos. Los procedimientos para preparar los inhibidores de glucógeno fosforilasa enumerados anteriormente pueden encontrarse en la solicitud de patente provisional de EE.UU. nº 60/157.148, presentada el 30 de septiembre de 1999. Las solicitudes publicadas PCT de cesión común con la presente WO-96/39.384 y WO-96/39.385 describen inhibidores de glucógeno fosforilasa adicionales que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina. Los inhibidores de glucógeno fosforilasa adicionales preferidos incluyen:

25

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-((R)-hidroxi-dimetilcarbamoilmetil)-2-fenil-etil]-amida; Ácido 5,6-dicloro-1H-indol-2-carboxílico {(1S)[(R)-hidroxi-(metoxi-metil-carbamoil)-metil]-2-fenil-etil}amida;

30

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico {(1S)[(R)-hidroxi-(metoxi-metilcarbamoil)metil]-2-fenil-etil}amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico ((1S)-((R)-hidroxi-[(2-hidroxi-etil)-metil-carbamoil]-metil)-2-fenil-etil)amida;

35

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxo-propil]-amida; 40

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-[(R)-hidroxi-(metil-piridin-2-ilcarbamoil)metil]2-fenil-etil]-amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico ((1S)-((R)-hidroxi-[metil-(2-piridin-2-il-etil)carbamoil]-metil)-2-fenil-etil) amida;

45

Clorhidrato del ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-(2R)-hidroxi-3-(4-metilpiperazin-1-il)-3-oxopropil]-amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-(2R)-hidroxi-3-(3-hidroxi-azetidin-1-il)-3-oxo-propil]-amida;

50

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-(2R)-hidroxi-3-isoxazolidin-2-il-3-oxo-propil]-amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-(2R)-hidroxi-3-[1,2]oxazinan-2-il-3-oxo-propil]-amida;

55

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-(2R)-hidroxi-3-((3S)-hidroxi-pirrolidin-1-il)-3-oxo-propil]amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3S,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)(2R)-hidroxi 3-oxo-propil]-amida;

60

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-3-(cis-3,4-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxo-propil]-amida; 65

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-(2R)-hidroxi-3-morfolin-4-il-3-oxo-propil)-amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico ((1S)-bencil-2-(3-hidroxi-iminopirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; 14

ES 2 264 679 T3 Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [2-(cis-3,4-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [2-((3S,4S)dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; 5

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-2-(cis-3,4-dihidroxi-pirrolidin-1-il)2-oxo-etil]-amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [2-(1,1-dioxo-tiazolidin-3-il)-2-oxo-etil]-amida;

10

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico (2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etil)-amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-(4-fluoro-bencil)2-(4-hidroxipiperidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3RS)-hidroxi-piperidin1-il)-2-oxo-etil]-amida;

15

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [2-oxo-2-((1RS)-oxo-1-tiazolidin-3-il)etil]-amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-(2-fluoro-bencil)-2-(4-hidroxi-piperidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida;

20

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-2((3S,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-2-(3-hidroxi-azetidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; 25

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-2-(3-hidroxi-imino-azetidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-2-(4-hidroxi-imino-piperidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; 30

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico (1-bencil-2-(3-hidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil)amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)((R)-hidroxi-dimetil-carbamoilmetil)-2-fenil-etil]-amida; 35

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-((R)-hidroxi-(metoxi-metilcarbamoil)metil)-2 fenil-etil]amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-3-((3-hidroxi-azetidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]-amida;

40

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-((R)-hidroxi-[metil-(2-hidroxietil)-carbamoil]-metil)-2-fenil-etil]amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-(2R)-hidroxi-3((3S)-hidroxi-pirrolidin-1-il)-3-oxopropil]-ami-

45

da; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-(2R)-hidroxi-3-((3S,4S) dihidroxi-pirrolidin-1-il)-3-oxo-propil]-amida;

50

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-3-(cis-3,4-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [1-bencil-2-(3-hidroxipirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida;

55

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-2-(cis-3,4-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-(4-fluorobencil-2-(4-hidroxipiperidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida:

60

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico (2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etil)-amida; Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-2-(3-hidroxi-azetidin-1-il)2-oxo-etil]-amida;

65

Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-2-(3-hidroxi-imino-azetidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida;

15

ES 2 264 679 T3 Ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico [(1S)-bencil-2-((3S,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida; y las sales y profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, y sales de los profármacos. 5

10

15

20

Cualquier inhibidor de glucógeno fosforilasa puede usarse como un compuesto (agente activo) en el aspecto de combinación de la presente invención. La inhibición de glucógeno fosforilasa se determina fácilmente por los expertos en la materia según ensayos convencionales (por ejemplo, Pesce y col. (1977) Clinical Chemistry 23:1711-1717). Anteriormente se ha descrito una diversidad de inhibidores de glucógeno fosforilasa, sin embargo, los expertos en la materia conocerán otros inhibidores de glucógeno fosforilasa (por ejemplo, documento WO-95/24.391-A y los descritos en la patente de EE.UU. nº 5.952.363). Los siguientes documentos también describen inhibidores de glucógeno fosforilasa que pueden usarse en la presente invención: patente de EE.UU. nº 5.998.463; Oikanomakos y col., Protein Science, 1999 8(10) 1930-1945, que en particular describe el compuesto 3-isopropil-4(2-clorofenil)-1,4-dihidro1-etil-2-metilpiridina; documentos WO-9.524.391; WO-9.709.040; WO-9.840.353; WO-9.850.359; WO-9.731.901; EP-884.050; y Hoover y col., J. Med. Chem., 1998, 41, 2934-2938. Un ligando de receptor de neurotensina puede usarse también en combinación con un inhibidor de aldosa reductasa. Los inhibidores de aldosa reductasa constituyen una clase de compuestos que se han hecho ampliamente conocidos por su utilidad en el tratamiento de dolencias que surgen de complicaciones de la diabetes, como neuropatía y nefropatía diabéticas. Dichos compuestos son bien conocidos por los expertos en la materia y se identifican fácilmente mediante pruebas biológicas convencionales. Por ejemplo, el inhibidor de aldosa reductasa zopolrestat, ácido 1-ftalazinacético ácido, 3,4-dihidro-4-oxo-3-[[5-(trifluorometil)-2-benzotiazolil]metil]-, y compuestos relacionados, se describen en la patente de EE.UU. 4.939.140. Los inhibidores de aldosa reductasa se han mostrado para su uso en la reducción de los niveles de lípidos en mamíferos. Ver, por ejemplo, patente de EE.UU. 4.492.706 y documento EP-0.310.931-A2.

25

La patente de EE.UU. 5.064.830 describe el uso de ciertos inhibidores de aldosa reductasa de ácido oxoftalazinil acético, incluyendo zopolrestat, para reducir los niveles de ácido úrico en sangre. 30

35

40

45

50

La patente de EE.UU. de cesión común con la presente 5.391.551 describe el uso de ciertos inhibidores de aldosa reductasa, incluyendo zopolrestat, para reducir los niveles de lípidos en sangre en seres humanos. La descripción muestra que se derivan utilidades terapéuticas del tratamiento de enfermedades causadas por un nivel aumentado de triglicéridos en la sangre; dichas enfermedades incluyen trastornos cardiovasculares como trombosis, arteriosclerosis, infarto de miocardio y angina de pecho. Un inhibidor de aldosa reductasa preferido es zopolrestat. El término inhibidor de aldosa reductasa se refiere a un compuesto que inhibe la bioconversión de glucosa en sorbitol, que es catalizada por la enzima aldosa reductasa. Cualquier inhibidor de aldosa reductasa puede usarse en una combinación con un ligando de receptor de neurotensina. La inhibición de aldosa reductasa se determina fácilmente por los expertos en la materia según ensayos convencionales (J. Malone, Diabetes, 29:861-864 (1980) “Red Cell Sorbitol, an Indicator of Diabetic Control”). En la presente memoria descriptiva se describe una diversidad de inhibidores de aldosa reductasa; sin embargo, los expertos en la materia conocerán otros inhibidores de aldosa reductasa útiles en ciertas composiciones y procedimientos de esta invención. La actividad de un inhibidor de aldosa reductasa en un tejido puede determinarse ensayando la cantidad de inhibidor de aldosa reductasa que se requiere para reducir el sorbitol en tejidos (es decir, inhibiendo la producción adicional de sorbitol como consecuencia del bloqueo de aldosa reductasa) o reducir la fructosa en tejidos (inhibiendo la producción de sorbitol como consecuencia del bloqueo de aldosa reductasa y, en consecuencia, la producción de fructosa). Consiguientemente, los ejemplos de inhibidores de aldosa reductasa útiles en algunas de las composiciones, combinaciones y procedimientos de la presente invención incluyen. 1. Ácido 3-(4-bromo-2-fluorobencil)-3,4-dihidro-4-oxo-1-ftalazinacético (ponalrestat, documento US 4.251.528);

55

2. N[[(5-trifluorometil)-6-metoxi-1-naftalenil]tioxometil]-N-metilglicina (tolrestat, documento US 4.600.724); 3. Ácido 5-[(Z,E)-β-metilcinnamiliden]-4-oxo-2-tioxo-3-tiazolidenacético (epalrestat, documento de EE.UU. 4.464.382, documento de EE.UU. 4.791.126, documento US 4.831.045);

60

4. Ácido 3-(4-bromo-2-fluorobencil)-7-cloro-3,4-dihidro-2,4-dioxo-1(2H)-quinazolinacético (zenarestat, documentos US 4.734.419, y 4.883.800); 5. Ácido 2R,4R-6,7-dicloro-4-hidroxi-2-metilcroman-4-acético (documento US 4.883.410);

65

6. Ácido 2R,4R-6,7-dicloro-6-fluoro-4-hidroxi-2-metilcroman-4-acético (documento US 4.883.410); 7. Ácido 3,4-dihidro-2,8-diisopropil-3-oxo-2H-1,4-benzoxazin-4-acético (documento US 4.771.050); 16

ES 2 264 679 T3 8. Ácido 3,4-dihidro-3-oxo-4[(4,5,7-trifluoro-2-benzotiazolil)metil]-2H-1,4benzotiazin-2-acético (SPR-210, documento US 5.252.572); 5

9. N-[3,5-dimetil-4-[(nitrometil)sulfonil]fenil]-2-metil-bencenoacetamida (ZD5522, documento US 5.270.342 y documento US 5.430.060); 10. (S)-6-fluoroespiro[croman-4,4’-imidazolidin]-2,5’-diona (sorbinil, documento US 4.130.714); 11. d-2-metil-6-fluoro-espiro(croman-4’,4’-imidazolidin)-2’,5’-diona (documento US 4.540.704);

10

12 2-fluoro-espiro(9H-fluoren-9,4’-imidazolidin)-2’,5’-diona (documento US 4.438.272); 13. 2,7-di-fluoro-espiro(9H-fluoren-9,4’-imidazolidin)-2’,5’-diona (documento US 4.436.745, documento US 4.438.272); 15

14. 2,7-di-fluoro-5-metoxi-espiro(9H-fluoren-9,4’-imidazolidin)-2’,5’-diona (documento US 4.436.745, documento US. 4.438.272); 20

15. 7-fluoro-espiro(5H-indenol[1,2-b]piridin-5,3’-pirrolidin)-2,5’-diona (documento US 4.436.745, documento US 4.438.272); 16. d-cis-6’-cloro-2’,3’-dihidro-2’-metil-espiro-(imidazolidin-4,4’-4’-Hpirano[2,3-b]piridin)-2,5-diona (documento US 4.980.357);

25

17. espiro[imidazolidin-4,5’(6H)-quinolin]2,5-diona-3’-cloro-7’,8’-dihidro-7’-metil-(5’-cis) (documento US 5.066.659); 18. (2S,4S)-6-fluoro-2’,5’-dioxoespiro(croman-4,4’-imidazolidin)-2carboxamida (documento US 5.447.946);

30

19. 2-[(4-bromo-2-fluorofenil)metil]-6-fluoroespiro[isoquinolin-4(1H),3’-pirrolidin]-1,2’,3,5’(2H)tetrona (ARI509, documento US 5.037.831); 20. Ácido 3,4-dihidro-3-(5-fluorobenzotiazol-2-ilmetil)-4-oxoftalazin-1-ilacético;

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21. Ácido 3-(5,7-difluorobenzotiazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4-oxoftalazin-1ilacético; 22. Ácido 3-(5-clorobenzotiazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4-oxoftalazin-1-ilacético;

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23. Ácido 3-(5,7-diclorobenzotiazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4-oxoftalazin-1ilacético; 24. Ácido 3,4-dihidro-4-oxo-3-(5-trifluorometilbenzoxazol-2-ilmetil)ftalazin-1-ilacético;

45

25. Ácido 3,4-dihidro-3-(5-fluorobenzoxazol-2-ilmetil)-4-oxoftalazin-1-il-acético; 26. Ácido 3-(5,7-difluorobenzoxazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4-oxoftalazin-1-ilacético;

50

27. Ácido 3-(5-clorobenzoxazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4-oxoftalazin-1-ilacético; 28. Ácido 3-(5,7-diclorobenzoxazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4-oxoftalazin-1ilacético:

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29. zopolrestat; ácido 1-ftalazinacético, 3,4-dihidro-4-oxo-3-[[5(trifluorometil)-2-benzotiazolil]metil]-; y las sales y profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, y sales de los profármacos. Los procedimientos para preparar los inhibidores de aldosa reductasa 20 a 29 se describen en la publicación PCT nº WO 99/26.659.

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Un ligando de receptor de neurotensina puede usarse también en combinación con un inhibidor de sorbitol deshidrogenasa. Los inhibidores de sorbitol deshidrogenasa reducen los niveles de fructosa y se han usado para tratar o prevenir complicaciones diabéticas como neuropatía, retinopatía, nefropatía, cardiomiopatía, microangiopatía y macroangiopatía. Las patentes de EE.UU. nº 5.728.704 y 5.866.578 describen compuestos y procedimientos para tratar complicaciones diabéticas inhibiendo la enzima sorbitol deshidrogenasa. Los compuestos descritos en estas patentes y otros inhibidores de sorbitol deshidrogenasa pueden usarse en la presente invención en combinación con un ligando de receptor de neurotensina.

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Un ligando de receptor de neurotensina puede usarse también en combinación con un antagonista de receptor de glucocorticoide. El receptor de glucocorticoide (RG) está presente en células que responden a glucocorticoides en las que reside en el citosol en un estado inactivo hasta que es estimulado por un agonista. Tras la estimulación, el receptor de glucocorticoide se trasloca al núcleo celular en el que interacciona específicamente con ADN y/o proteína o proteínas y regula la transcripción de una manera que responde a glucocorticoides. Dos ejemplos de proteínas que interaccionan con el receptor de glucocorticoides son los factores de transcripción API y NFκ-β. Dichas interacciones dan como resultado la inhibición de transcripción mediada por API y NFκ-β y se cree que son responsables de la actividad antiinflamatoria de glucocorticoides administrados endógenamente. Además, los glucocorticoides pueden ejercer también efectos fisiológicos independientes de transcripción nuclear. Los agonistas de receptores de glucocorticoides biológicamente relevantes incluyen cortisol y corticosterona. Existen muchos agonistas de receptores de glucocorticoides sintéticos, incluyendo dexametasona, prednisona y prednisilona. Por definición, los antagonistas de receptores de glucocorticoides se unen al receptor y previenen que los agonistas de receptores de glucocorticoides se unan y provoquen eventos mediados por RG, incluyendo transcripción. RU486 es un ejemplo de un antagonista del receptor de glucocorticoide no selectivo. Los antagonistas de RG pueden usarse en el tratamiento de enfermedades asociadas con un exceso o una deficiencia de glucocorticoides en el cuerpo. Como tales, pueden usarse para tratar lo siguiente: obesidad, diabetes, enfermedad cardiovascular, hipertensión, síndrome X, depresión, ansiedad, glaucoma, virus de inmunodeficiencia humana (VIH) o síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), neurodegeneración (por ejemplo, enfermedades de Alzheimer y Parkinson), potenciación de la cognición, síndrome de Cushing, enfermedad de Addison, osteoporosis, fragilidad, enfermedades inflamatorias (como osteoartritis, artritis reumatoide, asma y rinitis), disfunción suprarrenal, infección viral, inmunodeficiencia, inmunomodulación, enfermedades autoinmunes, alergias, curación de heridas, conducta compulsiva, resistencia a múltiples fármacos, adicción, psicosis, anorexia, caquexia, síndrome del estrés postraumático, fractura ósea posquirúrgica, catabolismo médico y prevención de fragilidad muscular. Pueden encontrarse ejemplos de antagonistas de receptores de glucocorticoides que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina en la publicación PCT nº WO-00/66.522. Un ligando de receptor de neurotensina puede usarse también en combinación con un inhibidor de intercambiador de sodio-hidrógeno de tipo 1 (NHE-1). Pueden encontrarse inhibidores de NHE-1 que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina en la publicación PCT nº WO-99/43.663. Además, un ligando de receptor de neurotensina puede usarse en combinación con un tiromimético. Se acepta generalmente que las hormonas tiroideas, específicamente, yodotironinas biológicamente activas, son críticas para el desarrollo normal y para mantener la homeostasis metabólica. Las hormonas tiroideas estimulan el metabolismo de colesterol en ácidos biliares y potencian la respuesta lipolítica de las células grasas a otras hormonas. Las patentes de EE.UU. nº 4.766.121; 4.826.876; 4.910.305; y 5.061.798 describen ciertos miméticos de hormonas tiroideas (tiromiméticos), a saber, 3,5-dibromo-3’-[6-oxo-3(1H)-piridazinilmetil]-tironinas. La patente de EE.UU. nº 5.284.971 describe ciertos agentes de reducción de colesterol tiromiméticos, a saber, compuestos 4-(3-ciclohexil-4-hidroxi o -metoxi fenilsulfonil)-3,5-dibromofenilacético. Las patentes de EE.UU. nº 5.401.772; 5.654.468; y 5.569.674 describen ciertos tiromiméticos que son agentes reductores de lípidos, a saber, derivados del ácido heteroacético. Además, en la técnica se conocen ciertos derivados del ácido oxámico de hormonas tiroideas. Por ejemplo, N. Yokoyama, y col., en un artículo publicado en el Journal of Medicinal Chemistry, 38 (4): 695-707 (1995) describen la sustitución de un grupo -CH2 en un metabolito que aparece de forma natural de T3 por un grupo -NH, de lo que se obtiene -HNCOCO2 H. Análogamente, R.E. Steele y col. en un artículo publicado en International Congressional Service (Atherosclerosis X) 1066: 321-324 (1995) y Z.F. Stephan y col. en un artículo publicado en Atherosclerosis, 126: 5363 (1996), describen ciertos derivados de ácido oxámico que son útiles como agentes tiromiméticos de reducción de lípidos y están desprovistos de actividades cardiacas no deseadas. Además, un ligando de receptor de neurotensina puede administrarse en combinación con otros agentes farmacéuticos como inhibidores de biosíntesis de colesterol e inhibidores de absorción de colesterol, especialmente inhibidores de HMG-CoA reductasa e inhibidores de HMG-CoA sintasa, inhibidores de expresión génica de HMG-CoA reductasa y sintasa, inhibidores de PTEC, secuestrantes de ácidos biliares, fibratos, inhibidores de ACAT, inhibidores de escualeno-sintetasa, antioxidantes y niacina. También puede administrarse un ligando de receptor de neurotensina en combinación con compuestos que aparecen de forma natural que actúan para reducir los niveles de colesterol en plasma. Estos compuestos que aparecen de forma natural se denominan comúnmente nutracéuticos e incluyen, por ejemplo, extracto de ajo, Benecol® y niacina. Los inhibidores de absorción de colesterol e inhibidores de biosíntesis de colesterol específicos se describen en detalle más adelante. Los expertos en la materia conocen inhibidores de absorción de colesterol adicionales, que se describen, por ejemplo, en el documento WO-94/00.480. Puede emplearse cualquier inhibidor de HMG-CoA reductasa como compuesto adicional en el aspecto de terapia de combinación de la presente invención. El término inhibidor de HMG-CoA reductasa se refiere a un compuesto que inhibe la biotransformación de hidroximetilglutaril-coenzima A en ácido mevalónico catalizada por la enzima HMG-CoA reductasa. Dicha inhibición puede determinarse fácilmente por un experto en la materia según ensayos convencionales (por ejemplo, Methods of Enzymology, 71: 455-509 (1981); y las referencias citadas en el mismo). A continuación se describe y referencia una diversidad de estos compuestos. La patente de EE.UU. nº 4.231.938 describe ciertos compuestos aislados después de cultivo de un microorganismo perteneciente al género Aspergillus, como 18

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lovastatina. También, la patente de EE.UU. nº 4.444.784 describe derivados sintéticos de los compuestos mencionados anteriormente, como simvastatina. Además, la patente de EE.UU. nº 4.739.073 describe ciertos indoles sustituidos, como fluvastatina. Además, la patente de EE.UU. nº 4.346.227 describe derivados de ML-236B, como pravastatina. Además, el documento EP-491.226 enseña ciertos ácidos piridildihidroxiheptenoicos, como rivastatina. También, la patente de EE.UU. nº 4.647.576 describe ciertas 6-[2-(pirrol sustituido-1-il)-alquil]-piran-2-onas como atorvastatina. Otros inhibidores de HMG-CoA reductasa serán conocidos por los expertos en la materia. Los ejemplos de productos comercializados que contienen inhibidores de HMG-CoA reductasa que pueden usarse en combinación con compuestos de la presente invención incluyen Baycol®, Lescol®, Lipitor®, Mevacor®, Pravachol® y Zocor®. Cualquier inhibidor de HMG-CoA sintasa puede usarse como segundo compuesto en el aspecto de terapia de combinación de esta invención. El término inhibidor de HMG-CoA sintasa se refiere a un compuesto que inhibe la biosíntesis de hidroximetilglutaril-coenzima A a partir de acetil-coenzima A y acetoacetil coenzima A, catalizado por la enzima HMG-CoA sintasa. Dicha inhibición puede determinarse fácilmente por un experto en la materia según ensayos convencionales (por ejemplo, Methods of Enzymology, 35:155-160 (1975); y Methods of Enzymology, 110:1926 (1985); y las referencias citadas en el mismo). A continuación se describe y referencia una diversidad de estos compuestos. La patente de EE.UU. nº 5.120.729 describe ciertos derivados de beta-lactama. La patente de EE.UU. nº 5.064.856 describe ciertos derivados de espirolactona preparados por cultivo del microorganismo MF5253. La patente de EE.UU. nº 4.847.271 describe ciertos compuestos de oxetano como derivados del ácido 11-(3-hidroximetil-4-oxo2-oxetail)-3,5,7-trimetil-2,4-undecadienoico. Otros inhibidores de HMG-CoA sintasa serán conocidos por los expertos en la materia. Cualquier compuesto que reduzca la expresión génica de HMG-CoA reductasa puede usarse como un compuesto adicional en el aspecto de terapia de combinación de esta invención. Estos agentes pueden ser inhibidores de transcripción de HMG-CoA reductasa que bloquean la transcripción de ADN o inhibidores de traducción que previenen la traducción de ARNm que codifica HMG-CoA reductasa en proteína. Dichos inhibidores pueden afectar a la transcripción o traducción directamente, o pueden biotransformarse en compuestos que tienen los atributos mencionados anteriormente por una o más enzimas en la cascada biosintética de colesterol o pueden conducir a la acumulación de un metabolito de isopreno que tiene las actividades mencionadas anteriormente. Dicha regulación se determina fácilmente por los expertos en la materia según ensayos convencionales (Methods of Enzymology, 110: 9-19, 1985). Varios de dichos compuestos se describen y referencian más adelante. Sin embargo, otros inhibidores de expresión génica de HMG-CoA reductasa serán conocidos por los expertos en la materia. La patente de EE.UU. nº 5.041.432 describe ciertos derivados de lanosterol sustituidos en 15. Otros esteroles oxigenados que suprimen la biosíntesis de HMG-CoA reductasa se exponen en E.I. Mercer (Prog. Lip. Res., 32:357-416 1993). Cualquier compuesto que tiene actividad como inhibidor de PTEC puede servir como segundo compuesto en el aspecto de terapia de combinación de la presente invención. El término inhibidor de PTEC se refiere a compuestos que inhiben el transporte mediado por la proteína de transferencia de éster de colesterilo (PTEC), de diversos ésteres de colesterilo y triglicéridos de HDL a LDL y VLDL. A continuación se describe y referencia una diversidad de estos compuestos. Sin embargo, otros inhibidores de PTEC serán conocidos por los expertos en la materia. La patente de EE.UU. nº 5.512.548 describe ciertos derivados de polipéptidos que tienen actividad como inhibidores de PTEC, mientras que ciertos derivados de rosenonolactona inhibidora de PTEC y análogos que contienen fosfato de éster de colesterilo se describen en J. Antibiot. 49(8): 815-816 (1996), y Bioorg. Med. Chem. Lett.; 6:1951-1954 (1996), respectivamente. Otros inhibidores de PTEC que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina se describen en los documentos WO-99/20.302, EP-796.846, EP-818.197, EP-818.448, WO-99/14.204, WO-99/41.237, WO-95/04.755, WO-96/15.141, WO-95/05.227, DE-19.704.244, DE-19.741.051, DE-19.741.399, DE-19.704.243, DE-19.709.125, DE-19.627.430, DE-19.832.159, DE-19.741.400, JP-11.049.743 y JP-09.059.155. Los inhibidores de PTEC preferidos que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina incluyen: Éster isopropílico del ácido [2R,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometil-bencil)-metoxicarbonil-amino]-2-etil-6-trifluorometil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico; Éster isopropílico del ácido [2S,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometil-bencil)-metoxicarbonil-amino]-2-metoximetil-6-trifluorometil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico;

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Éster 2-hidroxietílico del ácido [2R,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometil-bencil)-metoxicarbonil-amino]-2-etil-6-trifluorometil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico; 60

Éster etílico del ácido [2S,4S]-4[(3,5-bis-trifluorometil-bencil)-metoxicarbonil-amino]-2ciclopropil-6-trifluorometil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico, Éster etílico del ácido [2R,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometil-bencil)metoxicarbonil-amino]-2-etil-6trifluorometil-3,4dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico,

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Éster propílico del ácido [2S,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometilbencil)-metoxicarbonil-amino]-2-ciclopropil-6-trifluorometil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico, 19

ES 2 264 679 T3 Éster propílico del ácido [2R,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometilbencil)metoxicarbonil-amino]-2-etil-6-trifluorometil3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico, 5

Éster isopropílico del ácido [2S,4S]-4-[[3,5-bis-trifluorometil-bencil]-metoxicarbonil-amino]-2-isopropil-6-trifluorometil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico; Éster isopropílico del ácido [2S,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometil-bencil)-metoxicarbonil-amino]-6-cloro-2-ciclopropil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico;

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Éster isopropílico del ácido [2S,4S]-2-ciclopropil-4-(3,5-dicloro-bencil)-metoxicarbonil-amino]-6-trifluorometil3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico; 15

Éster terc-butílico del ácido [2S,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometil-bencil)-metoxicarbonil-amino]-2-ciclopropil-6-trifluorometil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico; Éster isopropílico del ácido [2S,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometil-bencil)-metoxicarbonil-amino]-2-ciclopropil-6-trifluorometil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico,

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Éster isopropílico del ácido [2S,4S]-4[(3,5-bis-trifluorometil-bencil)-metoxicarbonil-amino]-2-ciclobutil-6-trifluorometil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico; Éster isopropílico del ácido [2R,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometil-bencil)-metoxicarbonil-amino]-2-etil-6-trifluorometil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico; Éster isopropílico del ácido [2S,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometil-bencil)metoxicarbonil-amino]-2-metoximetil-6-trifluorometil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico,

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Éster 2-hidroxietílico del ácido [2R,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometil-bencil)metoxicarbonil-amino]-2-etil-6-trifluorometil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico; Éster etílico del ácido [2S,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometil-bencil)-metoxicarbonil-amino]-2-ciclopropil-6-trifluorometil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico; Éster etílico del ácido [2R,4S]-4[(3,5-bis-trifluorometil-bencil)-metoxicarbonil-amino]-2-etil-6-trifluorometil-3,4dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico;

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Éster propílico del ácido [2S,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometilbencil)-metoxicarbonil-amino]-2-ciclopropil-6-trifluorometil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico; Éster propílico del ácido [2R,4S]-4-[(3,5-bis-trifluorometilbencil)-metoxicarbonil-amino]-2-etil-6-trifluorometil3,4-dihidro-2H-quinolin-1-carboxílico, y las sales y profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, y las sales de los profármacos. Cualquier inhibidor de ACAT puede servir como compuesto adicional en el aspecto de terapia de combinación de esta invención. El término inhibidor de ACAT se refiere a un compuesto que inhibe la esterificación intracelular de colesterol de la dieta por la enzima acil CoA:colesterol-aciltransferasa. Dicha inhibición puede determinarse fácilmente por un experto en la materia según ensayos estándar, como el procedimiento de Heider y col. descrito en Journal of Lipid Research., 24:1127 (1983). A continuación se describe y referencia una diversidad de estos compuestos. Sin embargo, otros inhibidores de ACAT serán conocidos por los expertos en la materia. La patente de EE.UU. nº 5.510.379 describe ciertos carboxisulfonatos, mientras que los documentos WO-96/26.948 y WO-96/10.559 describen derivados de urea que tienen actividad inhibidora de ACAT. Cualquier compuesto que tiene actividad como inhibidor de escualeno-sintetasa puede servir como un compuesto adicional en el aspecto de terapia de combinación de la presente invención. El término inhibidor de escualeno-sintetasa se refiere a un compuesto que inhibe la condensación de dos moléculas de pirofosfato de farnesilo para formar escualeno, una reacción que es catalizada por la enzima escualeno-sintetasa. Dicha inhibición se determina fácilmente por los expertos en la materia según metodología estándar (Methods of Enzymology, 15:393-454 (1969); y Methods of Enzymology 110: 359-373 (1985); y referencias citadas en los mismos). Se ha compilado un resumen de inhibidores de escualeno-sintetasa en Curr. Op. Ther. Patents, 861-4, (1993). La publicación de solicitud de patente europea nº 0.567.026-A1 describe ciertos derivados de 4,1-benzoxazepina como inhibidores de escualeno-sintetasa y su uso en el tratamiento de hipercolesterolemia y como fungicidas. La publicación de solicitud de patente europea nº 0.645.378A1 describe ciertos heterociclos de siete u ocho miembros como inhibidores de escualeno-sintetasa y su uso en el tratamiento y prevención de hipercolesterolemia e infecciones fúngicas. La publicación de solicitud de patente europea nº 0.645.377-A1 describe ciertos derivados de benzoxazepina como inhibidores de escualeno-sintetasa útiles para el 20

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tratamiento de hipercolesterolemia o esclerosis coronaria, La publicación de solicitud de patente europea nº 0.611.749A1 describe ciertos derivados de ácido ámico sustituido útiles para el tratamiento de arteriosclerosis. La publicación de solicitud de patente europea nº 0.705.607-A2 describe ciertos compuestos heterocíclicos de siete u ocho miembros condensados útiles como agentes antihipertrigliceridémicos. La publicación PCT WO-96/09.827 describe ciertas combinaciones de inhibidores de absorción de colesterol e inhibidores de biosíntesis de colesterol que incluyen derivados de benzoxazepina y derivados de benzotiazepina. La publicación de solicitud de patente europea nº 0.701.725A1 describe un procedimiento para preparar ciertos compuestos activos ópticamente; que incluyen derivados de benzoxazepina, que tienen actividades de reducción de colesterol y triglicéridos en plasma. Otros compuestos que se comercializan para hiperlipidemia, incluyendo hipercolesterolemia, y que están pensados para ayudar a prevenir o tratar la aterosclerosis incluyen secuestrantes de ácidos biliares, como Colestid®, LoCholest® y Questran®; y derivados de ácido fíbrico, como Atromid®, Lopid® y Tricor®. Estos compuestos pueden usarse también en combinación con un ligando de receptor de neurotensina. También se contempla que un ligando de receptor de neurotensina se administre con un inhibidor de lipasa y/o un inhibidor de glucosidasa, que se usan normalmente en el tratamiento de dolencias resultantes de la presencia de exceso de triglicéridos, ácidos grasos libres, colesterol, ésteres de colesterol o glucosa incluyendo, entre otros, obesidad, hiperlipidemia, hiperlipoproteinemia, síndrome X y similares. En una combinación con un ligando de receptor de neurotensina, puede emplearse cualquier inhibidor de lipasa o inhibidor de glucosidasa. Los inhibidores de lipasa preferidos comprenden inhibidores de lipasa gástricos o pancreáticos como orlistat. Los inhibidores de glucosidasa preferidos comprenden inhibidores de amilasa. Un inhibidor de lipasa es un compuesto que inhibe la escisión metabólica de los triglicéridos de la dieta en ácidos grasos libres y monoglicéridos. En condiciones fisiológicas normales, la lipólisis ocurre a través de un procedimiento en dos etapas que implica acilación de un motivo de serina activado de la enzima lipasa. Esto conduce a la producción de un producto intermedio hemiacetal lipasa - ácido graso, que a continuación se escinde para liberar un diglicérido. Después de desacilación adicional, el producto intermedio de lipasa-ácido graso se escinde, dando como resultado lipasa libre, un monoglicérido y un ácido graso. Los ácidos grasos libres y monoglicéridos resultantes se incorporan en las micelas de fosfolípidos-ácidos biliares, que posteriormente se absorben al nivel del borde rugoso del intestino delgado. Las micelas entran finalmente en la circulación periférica como quilomicrones. En consecuencia, los compuestos, incluyendo inhibidores de lipasa que limitan o inhiben selectivamente la absorción de precursores grasos ingeridos, son útiles en el tratamiento de dolencias que incluyen obesidad, hiperlipidemia, hiperlipoproteinemia, síndrome X y similares. La lipasa pancreática media la escisión metabólica de ácidos grasos a partir de triglicéridos en las posiciones de carbono 1 y 3. El sitio primario del metabolismo de grasas ingeridas es en el duodeno y el yeyuno próximo por lipasa pancreática, que habitualmente se secreta en inmenso exceso de las cantidades necesarias para la descomposición de las grasas en el intestino delgado superior. Como la lipasa pancreática es la enzima primaria requerida para la absorción de triglicéridos en la dieta, los inhibidores tienen utilidad en el tratamiento de obesidad y las otras dolencias relacionadas. La lipasa gástrica es una lipasa inmunológicamente distinta que es responsable de aproximadamente el 10 al 40% de la digestión de grasas en la dieta. La lipasa gástrica se secreta en respuesta a estimulación mecánica, ingestión de alimento, la presencia de una comida grasa o por agentes simpáticos. La lipólisis gástrica de grasas ingeridas es de importancia fisiológica en la provisión de ácidos grasos necesarios para desencadenar la actividad de lipasa pancreática en el intestino y tiene también importancia para absorción de grasas en una diversidad de condiciones fisiológicas y patológicas asociadas con insuficiencia pancreática. Ver, por ejemplo, C.K. Abrams, y col., Gastroenterology, 92, 125 (1987).

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Los expertos en la materia conocen una diversidad de inhibidores de lipasa. Sin embargo, en la práctica de algunos de los procedimientos, composiciones farmacéuticas y kits de la presente invención, generalmente se prefieren como inhibidores de lipasa aquellos inhibidores que se seleccionan del grupo que consiste en lipstatina, tetrahidrolipstatina (orlistat), FL-386, WAY-121898, Bay-N-3176, valilactona, esterastina, ebelactona A, ebelactona B y RHC 80267.

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Los inhibidores de lipasa pancreática lipstatina, ácido (2S,3S,5S,7Z,10Z)-5-[(S)-2-formamido-4-metil-valeriloxi]2-hexil-3-hidroxi-7,10-hexadecanoico lactona y tetrahidrolipstatina (orlistat), ácido [2S,3S,5S]5-[(S)2-formamido-4metil-valeriloxi]-2-hexil-3-hidroxi-hexadecanoico lactona y los derivados de N-formil-leucina sustituidos de forma diversa y estereoisómeros de los mismos, se describen en la patente de EE.UU. nº 4.598.089.

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El inhibidor de lipasa pancreática FL-386, 1-[4-(2-metilpropil)ciclohexil]-2-[(fenilsulfonil)oxi]-etanona, y sus derivados de sulfonato sustituidos de forma diversa, se describen en la patente de EE.UU. nº 4.452.813.

65

El inhibidor de lipasa pancreática WAY-121.898, 4-fenoxifenil-4-metilpiperidin-1-il-carboxilato y los diversos ésteres carbamato y sales farmacéuticamente aceptables relacionadas con los mismos, se describen en la patente de EE.UU. nº 5.512.565, 5.391.571 y 5.602.151. El inhibidor de lipasa Bay-N-3176, N-3-trifluorometilfenil-N’-3-cloro-4’-trifluorometilfenilurea, y los diversos derivados de urea relacionados con el mismo, se describen en la patente de EE.UU. nº 4.405.644. 21

ES 2 264 679 T3 El inhibidor de lipasa pancreática valilactona, y un procedimiento para la preparación del mismo por el cultivo microbiano de la cepa de Actinomycetes MG147-CF2, se describen en Kitahara, y col., J. Antibiotics, 40 (11), 16471650 (1987). 5

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30

35

40

45

50

55

El inhibidor de lipasa esteracina, y ciertos procedimientos para la preparación del mismo por el cultivo microbiano de la cepa Streptomyces ATCC 31336, se describen en las patentes de EE.UU. nº 4.189.438 y 4.242.453. Los inhibidores de lipasa pancreática ebelactona A y ebelactona B, y un procedimiento para la preparación de los mismos por el cultivo microbiano de la cepa de Actinomycetes MG7-G1, se describen en Umezawa, y cols., J. Antibiotics, 33,1594-1596 (1980). El uso de ebelactonas A y B en la supresión de formación de monoglicéridos se describe en la “Kokai” de solicitud de patente japonesa 08-143.457, publicada el 4 de junio de 1996. El inhibidor de lipasa RHC-80.267, ciclo-O,O’-[(1,6-hexandiil)-bis(iminocarbonil)]dioxima, y las diversas bis(iminocarbonil)-dioximas relacionadas con la misma, pueden prepararse según se describe en Petersen y col., Liebig’s Annalen, 562, 205-229 (1949). La capacidad de RHC 80267 de inhibir la actividad de lipoproteína lipasa miocárdica se describe en Carroll y col., Lipids, 27, pág. 305-307 (1992) y Chuang y col., J. Mol. Cell Cardiol., 22, 1009-1016 (1990). Un inhibidor de glucosidasa inhibe la hidrólisis enzimática de carbohidratos complejos por glucósido hidrolasas, por ejemplo amilasa o maltasa, en azúcares simples biodisponibles, por ejemplo, glucosa. La rápida acción metabólica de las glucosidasas, particularmente después de la ingestión de altos niveles de carbohidratos, produce un estado de hiperglucemia alimentaria que, en sujetos adiposos o diabéticos, conduce a una secreción potenciada de insulina, síntesis de grasas aumentada y una reducción en la degradación de grasas. Después de dichas hiperglucemias, se produce frecuentemente hipoglucemia, debido a los niveles aumentados de insulina presentes. Además, se sabe que las hipoglucemias y el quimo que permanece en el estómago promueven la producción de jugo gástrico, lo que inicia o favorece el desarrollo de gastritis o úlceras duodenales. En consecuencia, se sabe que los inhibidores de glucosidasa tienen utilidad para acelerar el paso de carbohidratos a través del estómago e inhibir la absorción de glucosa del intestino. Por otra parte, la conversión de carbohidratos en lípidos del tejido graso y la posterior incorporación de grasa alimentaria en depósitos de tejidos grasos se reduce o retrasa en consecuencia, con el beneficio concomitante de reducir o prevenir las anomalías perjudiciales resultantes de ello. En combinación con un ligando de receptor de neurotensina, puede emplearse cualquier inhibidor de glucosidasa; sin embargo, un inhibidor de glucosidasa preferido generalmente comprende un inhibidor de amilasa. Un inhibidor de amilasa es un inhibidor de glucosidasa que inhibe la degradación enzimática de almidón o glucógeno en maltosa. La inhibición de dicha degradación enzimática es beneficiosa para reducir las cantidades de azúcares biodisponibles, incluyendo glucosa y maltosa, y las dolencias perjudiciales concomitantes que proceden de ello. Los expertos en la materia conocen una diversidad de inhibidores de glucosidasa y amilasa. Sin embargo, en la práctica de los procedimientos y las composiciones farmacéuticas de la presente invención, los inhibidores de glucosidasa preferidos generalmente son aquellos inhibidores que se seleccionan del grupo constituido por acarbosa, adiposina, voglibosa, miglitol, emiglitato, MDL-25637, carniglibosa, tendamistato, AI-3688, trestatina, pradimicinaQ y salbostatina. El inhibidor de glucosidasa acarbosa, O-4,6-didesoxi-4-[[(1S,4R,5S,6S)-4,5,6-trihidroxi-3-(hidroximetil)-2-ciclohexen-1-il]amino]-α-glucopiranosil-(1→4)-Oα-D-glucopiranosil-(1→4)-D-glucosa, los diversos derivados de aminoazúcares relacionados con el mismo y un procedimiento para la preparación de los mismos por el cultivo microbiano de las cepas de Actinoplanes SE 50 (CBS 961.70), SB 18 (CBS 957.70), SE 82 (CBS 615.71), SE 50/13 (614.71) y SE 50/110 (674.73) se describen en las patentes de EE.UU. nº 4.062.950 y 4.174.439, respectivamente. El inhibidor de glucosidasa adiposina, consistente en formas de adiposina 1 y 2, se describe en la patente de EE.UU. nº 4.254.256. Además, un procedimiento para la preparación y purificación de adiposina se describe en Namiki y col., J. Antibiotics, 35,1234-1236 (1982). El inhibidor de glucosidasa voglibosa, 3,4-didesoxi-4-[[2-hidroxi-1(hidroximetil)etil]amino]-2-C-(hidroximetil)D-epi-inositol, y los diversos pseudoaminoazúcares sustituidos en N relacionados con el mismo, se describen en la patente de EE.UU. nº 4.701.559. El inhibidor de glucosidasa miglitol, (2R,3R,4R,5S)-1-(2-hidroxietil)-2-(hidroximetil)-3,4,5-piperidintriol, y las diversas 3,4,5-trihidroxipiperidinas relacionadas con el mismo, se describen en la patente de EE.UU. nº 4.639.436.

60

El inhibidor de glucosidasa emiglitato, p-[2-[(2R,3R,4R,5S]-3,4,5-trihidroxi-2-(hidroximetil)piperidino]etoxi]benzoato de etilo, los diversos derivados relacionados con el mismo y las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de los mismos, se describen en la patente de EE.UU. nº 5.192.772. 65

El inhibidor de glucosidasa MDL-25637, 2,6-didesoxi-7-O-β-D-glucopiranosil-2,6-imino-D-glicero-L-gluco-heptitol, los diversos homodisacáridos relacionados con el mismo y las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de los mismos, se describen en la patente de EE.UU. nº 4.634.765. 22

ES 2 264 679 T3 El inhibidor de glucosidasa carniglibosa, metil-6-desoxi-6-[(2R,3R,4R,5S)-3,4,5-trihidroxi-2-(hidroximetil)piperidino]-α-D-glucopiranósido sesquihidratado, los derivados de desoxi-nojirimicina relacionados con el mismo, las diversas sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y los procedimientos sintéticos para la preparación de los mismos, se describen en las patentes de EE.UU. nº 5.157.116 y 5.504.078. 5

El inhibidor de amilasa tendamistat, los diversos péptidos cíclicos relacionados con el mismo y los procedimientos para la preparación de los mismos por el cultivo microbiano de las cepas de Streptomyces tendae 4158 o HAG 1226, se describen en la patente de EE.UU. nº 4.451.455. 10

15

20

El inhibidor de amilasa Al-3688, los diversos polipéptidos cíclicos relacionados con el mismo y un procedimiento para la preparación de los mismos por el cultivo microbiano de la cepa de Streptomyces aureofaciens FH 1656, se describen en la patente de EE.UU. nº 4.623.714. El inhibidor de amilasa trestatina, consistente en una mezcla de trestatina A, trestatina B y trestatina C, los diversos aminoazúcares que contienen trehalosa relacionados con el mismo y un procedimiento para la preparación de los mismos por el cultivo microbiano de las cepas de Streptomyces dimorphogenes NR-320-OM7HB y NR-320-OM7HBS, se describen en la patente de EE.UU. nº 4.273.765. El inhibidor de glucosidasa pradimicina-Q y un procedimiento para la preparación del mismo por el cultivo microbiano de las cepas de Actinomadura verrucospora R103-3 o A10102, se describen en las patentes de EE.UU. nº 5.091.418 y 5.217.877, respectivamente.

25

El inhibidor de glucosidasa salbostatina, los diversos pseudosacáridos relacionados con el mismo, las diversas sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y un procedimiento para la preparación de los mismos por el cultivo microbiano de la cepa de Streptomyces albus ATCC 21838, se describen en la patente de EE.UU. nº 5.091.524.

30

Los inhibidores de lipasa preferidos comprenden compuestos seleccionados del grupo que consiste en lipstatina, tetrahidrolipstatina, FL-386, WAY-121898, Bay-n-3176, valilactona, esteracina, ebelactona A, ebelactona B, RHC 80267, estereoisómeros de los mismos, y sales farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos y estereoisómeros. El compuesto tetrahidrolipstatina es especialmente preferido.

35

Los inhibidores de glucosidasa preferidos comprenden compuestos seleccionados del grupo que consiste en acarbosa, adiposina, voglibosa, miglitol, emiglitato, MDL-25637, carniglibosa, pradimicina-Q y salbostatina. Un inhibidor de glucosidasa preferido especialmente es acarbosa. Los inhibidores de glucosidasa preferidos especialmente comprenden además inhibidores de amilasa que se seleccionan del grupo que consiste en tendamistato, Al-3688 y trestatina. Además, la presente invención incluye el uso de un ligando de receptor de neurotensina en combinación con inhibidores de secreción de apo B/MTP.

40

45

50

55

Los expertos en la materia conocen una diversidad de inhibidores de secreción apo B/MTP. Aunque en la práctica de los procedimientos y composiciones farmacéuticas de la presente invención puede usarse cualquier inhibidor de secreción apo B/MTP, los inhibidores de secreción apo B/MTP preferidos generalmente incluyen aquellos compuestos que se describen en, por ejemplo, las publicaciones de solicitud de patente europea nº EP-643.057, EP-719.763, EP753.517, EP-764.647, EP-765.878, EP-779.276, EP-779.279, EP-799.828, EP-799.829, EP-802.186, EP-802.188, EP802.192 y EP-802.197; la publicación de solicitudes PCT nº WO-96/13.499, WO-96/33.193, WO-96/40.640, WO97/26.240, WO-97/43.255, WO-97/43.257, WO-98/16.526 y WO-98/23.593; y las patentes de EE.UU. nº 5.595.872; 5.646.162; 5.684.014; 5.712.279; 5.739.135 y 5.789.197. Los inhibidores de secreción apo B/MTP preferidos especialmente son aquellos derivados de ácido bifenil-2carboxílico-tetrahidroisoquinolin-6-il-amida descritos en la publicación de solicitud PCT nº WO-96/40.640 y WO98/23.593. Los inhibidores de secreción apo B/MTP preferidos especialmente descritos en las publicaciones de solicitud PCT nº WO-96/40.640 y WO-98/23.593, y útiles en los procedimientos y composiciones farmacéuticas de la presente invención, son ácido 4’-trifluorometil-bifenil-2-carboxílico-[2-(1H-[1,2,4]triazol-3-ilmetil)-1,2,3,4-tetrahidroisoquin-6-il]-amida y ácido 4’-trifluorometil-bifenil-2-carboxílico-[2-(acetilaminoetil)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il]-amida. Otra clase preferida especialmente de inhibidores de secreción apo B/MTP se describe en las patentes de EE.UU. nº 5.595.872; 5.721.279; 5.739.135 y 5.789.197.

60

65

Los inhibidores de secreción apo B/MTP preferidos especialmente descritos en las patentes de EE.UU. nº 5.595.872; 5.721.279; 5.739.135 y 5,.789.197 y útiles en los procedimientos y composiciones farmacéuticas de la presente invención son ácido 9-(4-(4-[4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil]amino]-piperidin-1-il)-butil-9H-fluoreno9-carboxílico-(2,2,2-trifluoroetil)-amida y ácido 9-(4-[4-(2-benzotiazol-2-il-benzoilamino)-piperidin-1-il]-butil)-9Hfluoren-9-carboxílico-(2,2,2-trifluoroetil)-amida.

23

ES 2 264 679 T3 Otra clase de inhibidores de secreción apo B/MTP se describe en la publicación de solicitud PCT nº WO-98/16.526.

5

10

Los inhibidores de secreción apo B/MTP preferidos especialmente descritos en la publicación de solicitud PCT nº WO-98/16.526, y útiles en los procedimientos y composiciones farmacéuticas de la presente invención, son [11a-R]8-[(4-cianofenil)metoxi]-2-ciclopentil-7-(prop-2-enil)-2,3,11,11a-tetrahidro-6H-pirazino[1,2b]Isoquinolin-1,4-diona y [11a-R]-ciclopentil-7-(prop-2-enil)-8((piridin-2-il)metoxi)-2,3,11,11a-tetrahidro-6H-pirazino[1,2b]isoquinolin-1,4diona. Otra clase preferida especialmente de inhibidores de secreción apo B/MTP se describe en la patente de EE.UU. nº 5.684.014. Un inhibidor de secreción apo B/MTP preferido especialmente descrito en la patente de EE.UU. nº 5.684.014, y útil en algunos de los procedimientos y composiciones farmacéuticas de la presente invención es 2-ciclopentil-2-[4-(2,4dimetil-pirido[2,3-b]indol-9-ilmetil)-fenil]-N-(2-hidroxi-1-fenil-etil)-acetamida.

15

Otra clase más de inhibidores de secreción apo B/MTP preferidos especialmente se describe en la patente de EE.UU. nº 5.646.162. 20

25

Un inhibidor de secreción apo B/MTP preferido especialmente descrito en la patente de EE.UU. nº 5.646.162 y útil en los procedimientos y composiciones farmacéuticas de la presente invención es 2-ciclopentil-N-(2-hidroxi-1 feniletil)-2-[4(quinolin-2-ilmetoxi)-fenil]-acetamida. Los inhibidores de secreción apo B/MTP adicionales que pueden usarse en combinación con un ligando de receptor de neurotensina se describen en la solicitud de patente provisional de EE.UU. nº 60/164.803. Los ejemplos de inhibidores de secreción apo B/MTP preferidos específicos descritos en esa solicitud incluyen: Éster etílico del ácido 7-amino-quinolin-3-carboxílico;

30

Éster etílico del ácido 7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico; Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico; Ácido 7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (dipiridin-2-il-metil)-amida;

35

Etanosulfonato del ácido 7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)amino]-quinolin-3-carboxílico (dipiridin-2-il-metil)-amida; 40

Bis-etanosulfonato del ácido 7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)amino]-quinolin-3-carboxílico [dipiridin-2-ilmetil)-amida; Ácido 7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (fenil-piridin-2 il-metil)-amida;

45

Etanosulfonato del ácido 7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin 3-carboxílico (fenil-piridin-2il-metil)-amida; Ácido (S)-7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (fenil-piridin-2-il-metil)-amida;

50

Etanosulfonato del ácido [S]-7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (fenil-piridin2-il-metil)-amida; Bis-etanosulfonato del ácido (S)-7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (fenil-piridin-2-il-metil)-amida;

55

Ácido (R)-7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil]amino)-quinolin-3-carboxílico (fenil-piridin-2-ilmetil)-amida; Etanosulfonato del ácido (R)-7-[(4’-fluorometil-bifenil-2-carbonil]amino]-quinolin-3-carboxílico (fenil-piridin-2il-metil)-amida; 60

Bis-etanosulfonato del ácido 7-[(4’-bifluorometil-bifenil-2-carbonil]amino]-quinolin-3-carboxílico (fenil piridin2-il-metil)-amida; 65

Ácido 7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-carbamoil-2-fenil-etil)amida; Ácido 7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (carbamoil-fenil-metil)amida; 24

ES 2 264 679 T3 Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico propilamida; Ácido 7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amina]-quinolin-3-carboxílico (2,2,2-trifluoro-etil)-amida; 5

Ácido 7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil]amino]-quinolin-3-carboxílico-(1-metil-1-fenil-etil)-amida; Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico ciclopentilamida;

10

Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-fenil-propil)amida; Etanosulfato del ácido (R)-7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-fenil-etil)amida;

15

Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-fenil-etil)amida; Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-piridin-2 il-propil)-amida;

20

Ácido (R)-7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-piridin-2-il-propil)amida; Etanosulfato del ácido (R)-7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-piridin-2-ilpropil)amida;

25

Ácido (S)-7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-piridin-2-il-propil)-amida; Etanosulfonato del ácido (S)-7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-piridin-2il-propil)amida;

30

35

Etanosulfonato del ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-piridin-2 il-propil)amida; Etanosulfonato del ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (piridin-2-ilmetil)-amida), Etanosulfonato del ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (2-piridin-2-iletil)amida;

40

Etanosulfonato del ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico etilamida; Etanosulfonato del ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico butilamida;

45

Etanosulfonato del ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (tiofen-2-ilmetil)amida; Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-metil-1-piridin-2-il-etil)amida; Ácido (S)-7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-piridin-2-il-etil)-amida;

50

Etanosulfonato del ácido (R)-7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-piridin-2il-etil)-amida; 55

Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-piridin 2-il-etil)-amida; Etanosulfonato del ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico (1-piridin-2-etil) amida;

60

Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico amida; Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico bencilamida; Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico 4-metoxi-bencilamida;

65

Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico 4-cloro-bencilamida;

25

ES 2 264 679 T3 Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico 4-metil-bencilamida; Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico ciclopropilmetil-amida; 5

Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico 4-fluorobencilamida; Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico isopropil-amida;

10

Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico benzhidril-amida; Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico ciclopropilamida;

15

Ácido 7-[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico [1-(4-fluoro-fenil)-etil]-amida; Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico 3-metil-bencilamida;

20

Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico 3-metoxi-bencilamida; Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico 3-cloro-bencilamida. Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico 2-fluoro-bencilamida;

25

Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico 3-fluoro-bencilamida; Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico 2-metil-bencilamida; 30

Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico 2-metoxi-bencilamida; Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico 2-clorobencilamida; 35

Ácido 4’-trifluorometil-bifenil-2-carboxílico [3-(pirrolidin-1-carbonil)-quinolin-7-il]amida; Ácido 4’-trifluorometil-bifenil-2-carboxílico [3-(morfolin-4-carbonil)-quinolin-7-il]amida;.

40

Ácido 7[(4’-trifluorometil-bifenil-2-carbonil)-amino]-quinolin-3-carboxílico dietilamida; Ácido 4’-trifluorometil-bifenil-2-carboxílico [3-(piperidin-1-carbonil)-quinolin-7-il]-amida; y las sales y profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, y sales de los profármacos.

45

Además, un ligando de receptor de neurotensina puede usarse en combinación con uno o más compuestos adicionales que son ligandos de receptores de neurotensinas como los expuestos anteriormente. A continuación se definen algunas abreviaturas usadas en esta solicitud:

50

55

60

65

GTP

Guanosin-5’-trifosfato

GDP

Guanosin 5’-difosfato

DTT

Ditiotreitol

PEI

Polietilenimina

FLIPR

Lector de placa de imagen de fluorescencia

DMSO

Dimetilsufóxido

HEPES

(N-[2-hidroxietil]piperazina-N’-[ácido 2-etanosulfónico])

NT

Neurotensina

BSA

Albúmina de suero bovino

26

ES 2 264 679 T3

5

PBS

Solución salina tamponada con fosfato

EDTA

Ácido etilendiamintetraacético

EGTA

Ácido de etilenglicol-bis(β-éter aminoetílico) N,N,N’,N’-tetraacético

Los ejemplos presentados a continuación pretenden ilustrar formas de realización particulares de la invención. 10

Ejemplos Unión de saturación: unión a GTPγ[35 S]

15

20

25

30

35

La unión a GTPγ[35 S] estimulada por agonista es un procedimiento fiable para la determinación de la eficacia y la potencia del agonista en receptores acoplados a proteína G (GPCR). GDP se une preferentemente sobre GTP en subunidades alfa de proteína G heterotrimérica sin activar. Cuando un agonista activa un GPCR, GDP es desplazado por GTP (o análogos de GTP) causando disociación de la subunidad alfa de las subunidades beta y gamma de la proteína G heterotrimérica. Para medir la eficacia y la potencia del agonista se usa GTPγ[35 S] en vez de GTP. Pocillo

-

+

[GTPγ[35 S]] disolución madre

[GTPγ[35 S]] final

A B C D E F G H

1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2

3,4 3,4 3,4 3,4 3,4 3,4 3,4 3,4

1 nM 2 nM 5 nM 10 nM 15 nM 20 nM 100 nM 200 nM

0,05 nM 0,1 nM 0,25 nM 0,5 nM 0,75 nM 1 nM 5 nM 10 nM

La actividad específica de GTPγ[35 S] es aproximadamente 1.250 Ci/mmol. La vida útil de GTPγ[35 S] es de un mes aproximadamente. Pueden usarse calculadoras de radiactividad conocidas por los expertos en la materia para determinar la concentración real de la solución madre de GTPγ[35 S] de reserva. A cada pocillo se añaden en orden:

40

20 µl de tampón de unión a pocillos “-” 20 µl de neurotensina en tampón de unión (1 µM final) a pocillos “+” 10 µl de concentración apropiada de GTPγ[35 S] en tampón de unión

45

170 µl de membranas de células que expresan receptores de neurotensina diluidas a 20 µg/170 µl en tampón de unión. Tampón de unión:

50

Hepes 50 mM/MgCl2 5 mM, pH 7,4 NaCl 150 mM

55

GDP 2 µM Ditiotreitol (DTT) 1 mM Inhibidores de proteasa

60

100 µg/ml de bacitracina 100 µg/ml de benzamidina

65

5 µg/ml de aprotinina 5 µg/ml de leupeptina 27

ES 2 264 679 T3 Los inhibidores de proteasa pueden obtenerse en Sigma, St. Louis, MO. Tampón de lavado: 5

Hepes 50 mM/MgCl2 10 mM pH 7,4, enfriado con hielo Procedimiento:

10

1. Se dispone el ensayo en un sistema de filtrado de 96 pocillos (Unifilter® GF/CTM , Packard Instrument Company, Meriden, CT). 2. Se incuba de 60 a 90 minutos agitando a temperatura ambiente.

15

3. Usando un recolector de células, se aspiran muestras en el cabezal de procesamiento. Se usa un filtro prehumedecido (el agua es adecuada). (No usar polietilenimina (PEI)) 4. Se lava cuatro veces con tampón de lavado frío. 5. Se seca la placa, se añaden 25 µl de fluido de centelleo a cada pocillo.

20

6. Se cuentan las muestras. Análisis de datos: 25

Se analizan los datos como si fueran para una curva de saturación de unión a radioligandos. Se resta la media de los pocillos “menos” de la media de los pocillos “más”. A continuación, se convierte en pmoles/mg de proteína unida y se realiza una regresión no lineal para determinar la Kd para unión a GTPγ[35 S]. Movilización de Ca++ usando el ensayo FLIPR

30

35

40

Otra medida de eficacia y potencia de agonista es la estimulación de liberación de calcio intracelular. Los receptores acoplados a la proteína G heterotrimérica Gq conducen a estimulación de fosfolipasa C. La activación de fosfolipasa C conduce a la producción de diacilglicerol y 1,4,5-inositol-trisfosfato (IP3 ). A continuación, IP3 se une a receptores de IP3 estimulando la liberación de Ca++ intracelular. La estimulación de liberación Ca++ puede medirse usando tintes fluorescentes que se unen a Ca++ como Fluo-4AM y Fura-2AM (Molecular Probes, Inc., Eugene, OR). Lo siguiente es un protocolo para medir la liberación de Ca++ intracelular mediada por agonistas de neurotensina. La medida de Ca++ liberada tras activación de GPCR es conocida por los expertos en la materia y pueden usarse también otros procedimientos. A continuación se enumeran todos los componentes de la solución. 1. Se prepara solución salina de Hepes y soluciones de probenecid nuevas para cada ensayo. 1 L de tampón de ensayo es suficiente para un experimento a pequeña escala.

45

2. Se preparan 11 ml de solución de tinte por placa de células de 96 pocillos. Se reparten 100 µl de partes alícuotas por pocillo, se incuba a 37◦ C, incubadora de CO2 , 1 hora.

50

3. Se prepara una placa que contiene el compuesto que se va a someter a prueba, diluyendo el compuesto que se va a someter a prueba en tampón de ensayo (se prepara tampón de ensayo justo antes del uso). Se dejan 100 µl de volumen de compuesto en exceso que se va a someter a prueba por pocillo. Por ejemplo, si se van a añadir 50 µl de compuesto que se va a someter a prueba a 100 µl de células, se añade entonces 150 µl de compuesto tres veces concentrado por pocillo.

55

4. Se vacían medios de la placa de células y se lava con tampón de ensayo en un lavador de placa Scatron (si se preparan grandes cantidades de placas). Para cantidades menores de placas, se puede aspirar con cuidado. Se equilibran las células 10 minutos en tampón de ensayo. 5. Se cargan la placa de células y la placa de fármacos en FLIPR; se realiza el experimento.

60

Solución salina de Hepes 1 L 29 ml de NaCl 5 M (145 mM final) 5 ml de glucosa 2 M (10 mM final)

65

1,65 ml de KCl 3 M (5 mM final) 1 ml de MgSO4 1 M (1 mM final) 28

ES 2 264 679 T3 10 ml de Hepes 1 M (10 mM final) 2 ml de CaCl2 1 M (2 mM final) 5

Solución de probenecid - 12,5 ml 925 mg de probenecid (2,5 mM final) 1,25 ml de NaOH 5 N

10

11,25 ml de solución salina de Hepes Solución de tinción (11 ml) 15

20

1. Se combinan 11 ml de medio libre de suero y 110 µl de solución de probenecid. 2. En un tubo separado, se añaden 22 µl de dimetilsulfóxido (DMSO) a un vial fluo-4 AM; se vuelve a suspender pipeteando arriba y abajo. Se añaden 22 µl de plurónicos al 20% a este vial. Se mezcla pipeteando; los plurónicos son muy viscosos. NOTA: Pueden usarse dos viales fluo-4, y se producirá una señal más intensa. En este caso, se duplican los volúmenes de DMSO/plurónicos. 3. Se añade suspensión de fluo-3/plurónicos a medio libre de suero; se mezcla bien por inversión. Tampón de ensayo (solución de probenecid al 1% en solución salina de Hepes)

25

10 ml solución de probenecid 1 L solución salina de Hepes 30

35

40

45

Unión de saturación: [125 I]neurotensina (NT) en receptores de neurotensina Pocillo

-

+

[[125 I]NT] final

A B C D E F G H

1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2

3,4 3,4 3,4 3,4 3,4 3,4 3,4 3,4

0,02 nM 0,05 nM 0,75 nM 0,10 nM 0,25 nM 0,50 nM 0,75 nM 1,00 nM

El volumen total en cada pocillo es 200 µl. La actividad específica de [125 I]NT es 2.200 Ci/mmol. Pueden usarse calculadoras de radiactividad conocidas por los expertos en la materia para determinar las actividades específicas de las soluciones madre.

50

A cada pocillo se añade en orden: 20 µl de tampón a pocillos “-”

55

20 µl de NT 10 µM a pocillos “+” 10 µl de concentración apropiada de [125 I]NT 170 µl de membranas diluidas a 10 µg/170 µl.

60

Tampón de unión: Hepes 50 mM/MgCl2 10 mM, pH 7,4

65

BSA al 0,2% (fracción V)

29

ES 2 264 679 T3 Inhibidores de proteasa 100 µg/ml de bacitracina 100 µg/ml de benzamidina

5

5 µg/ml de aprotinina 5 µg/ml de leupeptina 10

Tampón de lavado: Hepes 50 mM/MgCl2 10 mM pH 7,4, enfriado con hielo 15

Procedimiento: 1. Se dispone el ensayo en un sistema de filtrado de 96 pocillos (Unifilter® GF/CTM , Packard Instrument Company, Meriden, CT).

20

2. Se incuba de 90 a 120 minutos agitando a temperatura ambiente. 3. Usando un recolector de células, se aspiran muestras en el cabezal de procesamiento. Se usa un filtro prehumedecido en PEI al 0,3%.

25

4. Se lava cuatro veces con tampón de lavado frío. 5. Se seca la placa, se añaden 25 µl de fluido de centelleo a cada pocillo. 6. Se cuentan las muestras.

30

Análisis de datos: Se resta la media de los pocillos “más” de la media de los pocillos “menos”. A continuación, se convierte en fmoles/mg de proteína unida y se realiza una regresión no lineal para determinar la Kd para unión a [125 I]NT. 35

Nota: Este procedimiento puede modificarse para usar neurotensina tritiada. Unión de competencia: [125 I]NT en receptores de neurotensina 40

45

50

Pueden someterse a prueba hasta siete compuestos en curvas de competencia de 7 puntos en un formato de 96 pocillos. Las primeras seis filas de cada compuesto se usarán para ensayar 6 compuestos a 6 concentraciones por duplicado. A continuación se expone un ejemplo de un solo compuesto. El siguiente compuesto estará en las filas A a F, columnas 3 y 4. Un séptimo compuesto puede colocarse en la fila G1-12 (-9 a -4). A B C D E F

1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2

-9 -8 -7 -6 -5 -4

Los pocillos H1,2 son para recuentos totales por minuto (cpm) unidos. 55

Los pocillos H3,4 son para NT 1 µM para determinar unión no específica. Los huecos en blanco del filtro (sólo tampón, no membranas) están en H5,6.

60

65

Las muestras se preparan en las siguientes concentraciones de disolución madre: 10−3 , 10−4 , 10−5 , 10−6 , 10−7 , 10−8 M. Las concentraciones finales serán un orden de magnitud inferiores (10−4 a 10−9 ). La concentración de disolución madre de compuestos es habitualmente de 25 mM de forma que se requiere una dilución 25:1. Se preparan 6 tubos etiquetados como -4 a -9. Se ponen 100 µl de tampón de unión en cada tubo. Se añaden 4 µl de disolución madre 25 mM al tubo etiquetado como -4. Se agita con vórtice y se toman 11 µl de la muestra -4 y se añaden al tubo -5. Se repite hasta que se preparan todas las diluciones.

30

ES 2 264 679 T3 A cada pocillo se añade en orden: 20 µl de tampón a pocillos “totales” (H1, 2). 5

20 µl de NT 10 µM a pocillos H3, 4. 170 µl de tampón a pocillos H5, 6. 20 µl de cada concentración de compuesto a los pocillos apropiados.

10

10 µl de [125 I]NT 5 nM a todos los pocillos. 170 µl de membranas diluidas a 10 µg/170 µl.

15

Procedimiento: 1. Se dispone el ensayo en un sistema de filtrado de 96 pocillos (Unifilter® GF/CTM , Packard Instrument Company, Meriden, CT).

20

2. Se incuba de 90 a 120 minutos agitando a temperatura ambiente. 3. Usando un recolector de células, se aspiran muestras en el cabezal de procesamiento. Se usa un filtro prehumedecido (PEI al 0,3%).

25

4. Se lava cuatro veces con tampón de lavado frío. 5. Se seca la placa, se añaden 25 µl de fluido de centelleo a cada pocillo. 6. Se cuentan las muestras.

30

Tampón de unión: Hepes 50 mM/MgCl2 10 µM, pH 7,4 (preparado a partir de disolución madre 10X). 35

BSA al 0,2% (fracción V). Inhibidores de proteasa (preparados como disoluciones madre 100X). 100 µg/ml de bacitracina

40

100 µg/ml de benzamidina 5 µg/ml de aprotinina 5 µg/ml de leupeptina

45

Tampón de lavado: Hepes 50 mM/MgCl2 , 10 mM pH 7,4, enfriado con hielo (preparado a partir de disolución madre 10X). 50

Ensayo de unión a GTPγ[35 S] mediado por agonista

55

60

65

Pueden someterse a prueba hasta siete compuestos en curvas de competencia de 7 puntos en un formato de 96 pocillos. Las primeras seis filas de cada compuesto se usarán para probar 6 compuestos a 6 concentraciones por duplicado. A continuación se expone un ejemplo de un solo compuesto. El siguiente compuesto estará en las filas A a F, columnas 3 y 4. Un séptimo compuesto puede colocarse en la fila G1-12 (-9 a -4). A B C D E F

1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2

-9 -8 -7 -6 -5 -4

Los pocillos H1,4 son para GTPγ[35 S] basal unido.

31

ES 2 264 679 T3 Los pocillos H5,6 son para GTPγS 10 µM frío para determinar la unión no específica. Los huecos en blanco del filtro (sólo tampón, no membranas) están en H7,8. 5

10

Las muestras se preparan en las siguientes concentraciones de disolución madre: 10−3 , 10−4 , 10−5 , 10−6 , 10−7 , 10−8 M. Las concentraciones finales serán un orden de magnitud inferiores (10−4 a 10−9 ). La concentración de disolución madre de compuestos es habitualmente de 25 mM de forma que se requiere una dilución 25:1. Se preparan 6 tubos etiquetados como -4 a -9. Se ponen 100 µl de tampón de unión en cada tubo. Se añaden 4 µl de disolución madre 25 mM al tubo etiquetado como -4. Se agitan con vórtice y se toman 11 µl de la muestra -4 y se añaden al tubo -5. Se repite hasta que se preparan todas las diluciones. La primera muestra es siempre neurotensina nativa. A cada pocillo se añade en orden: 20 µl de tampón de unión a pocillos H1, 4.

15

20 µl de cada concentración de compuesto a los pocillos apropiados. 20 µl de GTPγS 100 µM a pocillos H5, 6.

20

10 µl de concentración apropiada de GTPγ[35 S]. 170 µl de membranas diluidas a 20 µg/170 µl en tampón de unión. Tampón de unión a GTPγS:

25

(Preparar nuevo) Hepes 50 mM/MgCl2 5 mM, pH 7,4. 30

NaCl 150 mM (3 M). GDP 2 µM (10 mM). DTT 1 mM (1 M).

35

Inhibidores de proteasa. 100 µg/ml de bacitracina 40

100 µg/ml de benzamidina 5 µg/ml de aprotinina 5 µg/ml de leupeptina

45

Tampón de lavado: Hepes 50 mM/MgCl2 , 10 mM pH 7,4, enfriado con hielo. 50

Procedimiento: 1. Se dispone el ensayo en un sistema de filtrado de 96 pocillos (Unifilter® GF/CTM , Packard Instrument Company, Meriden, CT).

55

2. Se incuba 60 minutos agitando a temperatura ambiente. 3. Usando un recolector de células, se aspiran muestras en el cabezal de procesamiento. Se usa un filtro prehumedecido (el agua es adecuada). No usar PEI.

60

4. Se lava cuatro veces con tampón de lavado frío. 5. Se seca la placa, se añaden 25 µl de fluido de centelleo a cada pocillo. 6. Se cuentan las muestras.

65

Análisis de datos: Se analizan los datos como si fuera para una curva de dosis-respuesta. Se convierte en pmoles/mg unido. 32

ES 2 264 679 T3 Preparaciones de membrana a partir de células 2. Se recogen las células. Para células adherentes (habitualmente se preparan 10 placas de 150 mm) se usa PBS/EDTA para eliminar las células. Se gira a 1.000 X g durante 10 minutos a 4◦ C. 5

Se retira el sobrenadante y se vuelve a suspender en 10 ml de tampón de homogeneización. Se deja reposar en hielo durante 10 minutos. Debe observarse que pueden usarse células como células HEK293 o CHO que expresan receptores recombinantes de neurotensinas. Además, puede usarse receptor de neurotensina nativo, como células HT29 o SW. 10

3. Se homogeiniza con 20 golpes de un homogeinizador Dounce de ajuste hermético vidrio/vidrio. 4. Se eliminan los núcleos y las células no lisadas centrifugando las muestras a 1.000 X g durante 10 minutos a 4◦ C.

15

5. Se transfiere sobrenadante al nuevo tubo. 6. Se realizan dos centrifugados a 25.000 X g durante 20 minutos en un Sorvall SS34 (o comparable) a 4◦ C.

20

7. Se vuelve a suspender en un volumen apropiado de tampón de homogeinización que producirá una concentración de proteína de 1 a 5 mg/ml. Se preparan partes alícuotas de 250 µl de cada muestra más una parte alícuota de 10 µl para determinación de proteínas. Para el ensayo de proteínas, se diluye al 1:5 y se mide. Tampón de homogeinización 10x

25

EDTA 10 mM EGTA 10 mM Bicarbonato de Na 10 mM, pH 7,4

30

Inhibidores de proteasa 100x 10 mg/ml de benzamidina 35

10 mg/ml de bacitracina 0,5 mg/ml de leupeptina 0,5 mg/ml de aprotinina.

40

45

50

55

60

65

33

ES 2 264 679 T3 REIVINDICACIONES

5

1. Uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que es un agonista de receptor de neurotensina1 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de obesidad en un paciente obeso o un paciente con riesgo de convertirse en obeso. 2. El uso de la reivindicación 1 en el que el ligando es un agonista selectivo de receptor de neurotensina-1.

10

3. Una composición farmacéutica que comprende: a) un compuesto que es un ligando de receptor de neurotensina; y

15

b) un segundo compuesto útil para el tratamiento de obesidad, diabetes, disfunción sexual, aterosclerosis, resistencia a la insulina, tolerancia a la glucosa deteriorada, hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia. 4. La composición farmacéutica de la reivindicación 3 en la que el ligando de receptor de neurotensina es un agonista de receptor de neurotensina-1.

20

25

30

35

40

45

50

5. La composición farmacéutica de la reivindicación 3 en la que el segundo compuesto es un agonista de receptor β3 -adrenérgico, un agonista de colecistoquinina-A, un inhibidor de recaptación de monoamina, un agente simpatomimético, un agente serotoninérgico, un agonista de dopamina, un agonista o mimético de receptor de hormona de estimulación de melanocitos, un análogo de receptor de hormona de estimulación de melanocitos, un antagonista de receptor de cannabinoide, un antagonista de hormona de concentración de melanina, leptina, un análogo de leptina, un agonista de receptor de leptina, un antagonista de galanina, un agonista de bombesina, un antagonista de neuropéptido-Y, un agente tiromimético, deshidroepiandrosterona o un análogo de la misma, un agonista o antagonista de receptor de glucocorticoide, un antagonista de receptor de orexina, un antagonista de proteína de unión a urocortina, un agonista de receptor de péptido-1 semejante a glucagón o un factor neurotrófico ciliar. 6. Un kit que comprende una primera composición farmacéutica que comprende un ligando de receptor de neurotensina y una segunda composición farmacéutica que comprende un compuesto que es útil para el tratamiento de obesidad, diabetes, disfunción sexual, aterosclerosis, resistencia a la insulina, tolerancia a la glucosa deteriorada, hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia como una preparación combinada para el uso simultáneo, separado o secuencial, para tratar a un paciente con obesidad o con riesgo de convertirse en obeso. 7. El kit de la reivindicación 6, en el que el ligando de receptor de neurotensina es un agonista de receptor de neurotensina-1. 8. El kit de la reivindicación 6 en el que la segunda composición farmacéutica comprende un compuesto que es un agonista de receptor β3 -adrenérgico, un agonista de colecistoquinina-A, un inhibidor de recaptación de monoamina, un agente simpatomimético, un agente serotoninérgico, un agonista de dopamina, un agonista o mimético de receptor de hormona de estimulación de melanocitos, un análogo de receptor de hormona de estimulación de melanocitos, un antagonista de receptor de cannabinoide, un antagonista de hormona de concentración de melanina, leptina, un análogo de leptina, un agonista de receptor de leptina, un antagonista de galanina, un agonista de bombesina, un antagonista de neuropéptido-Y, un agente tiromimético, deshidroepiandrosterona o un análogo de la misma, un agonista o antagonista de receptor de glucocorticoide, un antagonista de receptor de orexina, un antagonista de proteína de unión a urocortina, un agonista de receptor de péptido-1 semejante a glucagón o un factor neurotrófico ciliar. 9. El uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un ligando de receptor de neurotensina para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un paciente con o con riesgo de tener diabetes, disfunción sexual, aterosclerosis, resistencia a la insulina, tolerancia a la glucosa deteriorada, hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia. 10. El uso de la reivindicación 9, en el que el ligando de receptor de neurotensina es un ligando de receptor de neurotensina-1.

55

60

11. Un compuesto que es un agonista de receptor de neurotensina-1 para su uso como un medicamento para tratar a pacientes con obesidad o con riesgo de convertirse en obesos. 12. Un procedimiento para mejorar la apariencia corporal de un mamífero que comprende la administración a ese mamífero de una cantidad eficaz de un agonista de receptor de neurotensina-1 hasta que se haya producido una pérdida estéticamente beneficiosa de peso corporal.

65

34