CHROMagar™ O157 Terreno cromogeno indicato differenziazione di E.coli O157

per

lʼisolamento

e

la

articolo codice EE220 : confezione da 1000 ml articolo codice EE222 : confezione da 5000 ml articolo codice EE223 : alla rinfusa CONSERVAZIONE Conservare a temperatura compresa tra 15 e 30°C, al buio e in ambiente asciutto, fino alla data di scadenza indicata sullʼetichetta del contenitore. COMPOSIZIONE in g/L Agar 15,0; Peptone ed estratto di lievito 13,0; Miscela cromogena 1,2; pH: 6.9 +/- 0,2 (Formula standard adeguata e/o completata per rispondere a criteri di efficienza). PREPARAZIONE Versare una dose completa prepesata nel corrispondente volume di acqua distillata o deionizzata. In alternativa pesare 29,2 g/litro di acqua distillata o deionizzata. Sospendere la polvere nellʼacqua mediante lenti movimenti rotatori del contenitore. Sciogliere il terreno riscaldando lentamente fino a portarlo ad ebollizione (100°C). Durante questa fase mantenere agitato il terreno con un movimento di rotazione lento e regolare. Qualora si faccia uso di autoclave non tenerla in pressione. NON SURRISCALDARE OLTRE I 100°C. La miscela può essere sciolta anche utilizzando un forno a microonde: dopo la prima ebollizione, togliere il contenitore dal forno e mescolare secondo le modalità sopra descritte. Rimettere nel forno per brevi e ripetuti riscaldamenti fino ad ottenere il completo scioglimento dellʼagar (grosse bolle sostituiscono la schiuma). Raffreddare a bagnomaria a 45-50°C mantenendo regolarmente agitato il terreno. Nota 1: Se si ricercano una maggiore selettività e una maggiore specificità, aggiungere una soluzione di tellurito di potassio per ottenere una concentrazione finale di 2.5 mg/l a 48°C. Nota 2 : In caso di campioni molto contaminati da Proteus, aggiungere Cefixima per ottenere una concentrazione finale di 0.025 mg/l a 48°C. Nota 3 : In caso di campioni molto contaminati da Pseudomonas e/o Aeromonas, aggiungere Cefsulodina per ottenere una concentrazione finale di 5 mg/l a 48°C. Mescolare adagio per omogeneizzare. Versare in piastre di Petri o in provette e lasciare solidificare ed asciugare. Conservare al buio. Il terreno pronto allʼuso può essere mantenuto per un giorno a temperatura ambiente o per due settimane in frigorifero (2/8°C) se confezionato in modo tale da essere protetto dalla luce, dalla disidratazione e dai possibili inquinamenti ambientali. INOCULAZIONE Se il terreno pronto allʼuso è stato conservato in frigorifero, riportarlo a temperatura ambiente prima dellʼinoculazione. Inoculare il campione sulla superficie del terreno ed incubare a 37°C per 24 ore. INTERPRETAZIONE Microorganismo

 aspetto tipico delle colonie

E. coli O157 Coliformi, ecc. Proteus, ecc

 malva  blu acciaio  incolore a grigio

EFFICIENZA e LIMITAZIONI La sensibilitá per E. coli O157 é di 98 % (Bettelheim el al. 1998). In assenza di Tellurito di Potassio, altri batteri non E. coli O157 possono avere lo stesso colore di colonie (certe salmonella). Si suggerisce una conferma con un test latice per 0157 per le colonie sospette. La conferma decisiva come E. coli O157 richiede, oltre alla rivelazione del antigene O157 con i test sierologici, una identificazione finale come E. coli. ELIMINAZIONE DEI RESIDUI Dopo lʼuso eliminare come rifiuti sanitari potenzialmente infetti, ai sensi della normativa nazionale e regionale attualmente in vigore.

CHROMagar™ O157

CHROMagar™ O157

BIBLIOGRAPHY

Medio cromogénico para el aislamiento y diferenciación de E.coli O157.

Meio cromogênico para isolamento e diferenciação de E.coli O157.

Wallace, J.S. and K. Jones. 1996. The Use of Selective and Differential Agars in the Isolation of E.coli O157 from dairy herds. J. Appl. Bacteriol. 81: 663-668

Código EE220 : envase para 1000 ml. Código EE222 : envase para 5000 ml. Código EE223 : envase a granel.

artigo número EE220 : 1000 ml frasco artigo número EE222 : 5000 ml frasco artigo número EE223 : a granel

CONSERVACION Conservar el medio deshidratado entre 15/30°C, hasta la fecha de vencimiento indicada en el envase.

CONSERVAÇÃO: Conservar o pó entre 15/30°C até a data de validade indicada na etiqueta.

COMPOSICION en g/L Agar 15,0; Peptona y extracto de levadura 13,0; Mezcla cromogénica 1,2; pH: 6.9 +/- 0,2 (Fórmula standard ajustada y/o suplementada para satisfacer criterios de performance).

COMPOSIÇÃO em g/L Agar 15,0; Peptona e extrato de levedura 13,0; Mistura cromogênica 1,2; pH: 6.9 +/- 0,2 (Fórmula padrão ajustada e/ou suplementada para satisfazer critérios de desempenho).

PREPARACION Para una dosis prepesada de medio, añadir al medio deshidratado el volumen correspondiente de agua purificada, o pesar la cantidad de polvo necesaria en la proporción de 29,2 g/L de agua purificada. Espolvorear lentamente en la agua y dejar disolver el agar, mezclando suavemente con un movimiento de rotación. Llevar a ebullición (100°C) hasta la completa cocción del agar, con un movimiento de rotación lento y regular. En caso de utilización de autoclave, hacerlo sin presión. NO CALENTAR A MAS DE 100°C. Se puede también preparar la mezcla en horno de microondas : después de un primer hervor, sacar del horno y agitar despacio, volver a poner en el horno por cortos períodos repetidos de calentamiento hasta la fusión completa del agar (gruesas burbujas reemplazan la espuma). Enfriar a baño maría a 45-50°C. Nota 1 : Si se requieren una mayor selectividad y una mayor especificidad, añadir Telurito de Potasio para lograr una concentración final de 2,5 mg/l a 48°C. Nota 2 : En caso de muestras fuertemente contaminadas por Proteus, añadir Cefixima para conseguir una concentración final de 0,025 mg/l a 48°C. Nota 3 : En caso de muestras fuertemente contaminadas por Pseudomonas y/o Aeromonas, añadir Cefsulodina para conseguir una concentración final de 5 mg/l a 48°C.

PREPARO Para a quantidade pré-pesada, acrescentar ao pó seco o volume correspondente de água destilada ou pesar a quantidade de pó necessária na proporção de 29,2 g/l de água destilada. Dispersar o pó lentamente na água misturando com movimentos de rotação até a hidratação do agar. Levar a ebulição (100°C) até fusão completa com movimentos de rotação lentos e regulares. Se utilizar a autoclave, faça-o sem pressão. NÃO AQUECER A MAIS DE 100°C. O meio pode ser preparado em forno de microondas: depois da primeira ebulição, tirar do forno e agitar lentamente, retornando ao forno para curtos e repetidos aquecimentos até completa fusão do agar (grandes bolhas substituem a espuma). Resfriar em um banho-maria á 45-50ºC e agitar lentamente para homogeneizar sem fazer bolhas. Distribuir em placas de Petri ou tubos estéreis e deixar solidificar. Nota 1 : se for necessário um meio mais seletivo, e mais específico, acrescentar uma solução de Telurito de Potássio para obter uma concentração final de 2,5 mg/l a 48°C. Nota 2 : no caso de amostras muito contaminadas por Proteus spp, acrescentar Cefixima para conseguir uma concentração final de 0,025 mg/l a 48°C. Nota 3 : no caso de amostras muito contaminadas por Pseudomonas e/ou Aeromonas, acrescentar Cefsulodina para conseguir uma concentração final de 5 mg/l a 48°C. Agitar lentamente para homogeneizar sem fazer bolhas. Distribuir em placas de Petri ou tubos estéreis e deixar solidificar.

Agitar despacio para homogeneizar sin hacer burbujas. Verter en placas de Petri estériles, o en tubos, y dejar secar. Conservar en la oscuridad. Se puede conservar el medio preparado durante un día a temperatura ambiente, o durante dos semanas en frio (2/8°C) si está correctamente preparado y protegido de la luz y de la deshidratación. INOCULACION Poner la mezcla, si ha sido refrigerada, a temperatura ambiente antes de la inoculación. Inocular en superficie e incubar 24 horas y 37° C.

Conservar ao abrigo da luz. As placas preparadas podem ser mantidas por um dia a temperatura ambiente ou durante um mês em geladeira (2/8°C), se é corretamente preparada e protegida da luz e da desidratação. INOCULAÇÃO Se o meio foi refrigerado, deixá-lo ficar á temperatura ambiente antes da inoculação. Inocular em superfície e incubar á 37°C por 24 horas.

INTERPRETACION

Wallace, J.S. et al. 1997. Isolation of Vero cytotoxin-producing E.coli O157 from wild birds. J. Appl. Bacteriol. 82: 399-404 Bettelheim K.A.1998. Reliability of CHROMagar O157 for the Detection of Enterohaemorrhagic E.coli (EHEC) O157 but not EHEC Belonging to Other Serogroups. J. Appl. Microbiol. 85: 425428

Available from CHROMagar : CHROMagar™ Candida Differentiation of major pathogenic Candida species CHROMagar™ Orientation Differentiation of urinary tract pathogens Rambach™ Agar Detection of Salmonella spp CHROMagar™ Salmonella Detection of Salmonella including S. Typhi CHROMagar™ Salmonella Plus Detection of Salmonella according to the ISO 6579:2002 norm CHROMagar™ O157 Detection of E.coli O157 CHROMagar™ E.coli Detection and enumeration of E.coli CHROMagar™ ECC Detection and enumeration of E.coli and coliforms CHROMagar™ Liquid ECC Broth for pad technique for E.coli-coliforms CHROMagar™ Staph aureus Detection and enumeration of Staphylococcus aureus CHROMagar™ MRSA Detection of MRSA including low level MRSA CHROMagar™ Listeria Detection and enumeration of Listeria monocytogenes

INTERPRETAÇÃO Microorganismo E.coli O157 Coliformes, etc. Proteus, etc.

 Aspecto típico de las colonias  malva  azul metálico  incoloro a gris

PERFORMANCE y LIMITACIONES La sensibilidad para E.coli O157 es del 98 % (Bettelheim et al. 1998). En ausencia de Telurito de Potasio, otras bacterias E.coli no O157 pueden dar el mismo color de colonias (algunas Salmonella). Se sugiere la confirmación con un test de látex para O157 de las colonias sospechosas. La confirmación definitiva como E.coli O157 necesita, además de la caracterización del serotipo O157, una identificación completa como E.coli.

Microrganismo

 Aspecto típico das colônias

E.coli O157 coliformes Proteus

 violeta  azul metálico  incolor á cinza

DESEMPENHO e LIMITAÇÕES A sensibilidade para E.coli é de 98% (Bettelheim et al. 1998). Na ausência de Telurito de Potássio, outras bactérias não E.coli O157 podem dar a mesma cor de colônia (como algumas Salmonella). Sugere-se uma confirmação com um teste de aglutinação para O157 das colônias suspeitas. A confirmação definitiva como E.coli O157 necessita, da detecção do antígeno O157 com testes sorológicos, uma identificação bioquímica como E.coli.

ELIMINACION DE LOS RESIDUOS Después de la interpretación, hay que destruir las placas de Petri por tratamiento en autoclave a 121°C durante 20 minutos, por lo menos.

TRATAMENTO DOS RESÍDUOS: Após a utilização das placas autoclavar a 121°C por pelo menos 20 minutos.

Español. Uso in vitro. Producto de laboratorio para ser usado por personal especializado y entrenado.

Português. Somente para uso diagnóstico in vitro. Produto de Laboratório deve ser utilizado por pessoal especializado.

CHROMagar™ Vibrio Detection and enumeration of Vibrio parahaemolyticus, Vibrio vulnificus and Vibrio cholerae CHROMagar™ VRE Detection of E.faecium VRE & E.faecalis VRE CHROMagar™ and Rambach™ are trademarks of Dr. A. Rambach Visit CHROMagar on internet via http://www.chromagar.com

4, place du 18 Juin 1940 75006 Paris France Fax: (33-1) 45 48 06 06 Version 7 NT-EXT-003 22-jun-11

Italiano. Per uso diagnostico in vitro. Da utilizzarsi da parte di personale tecnico specializzato.

CHROMagar™ Orientation Terreno cromogeno indicato per lʼisolamento differenziazione dei germi patogeni urinari

e

la

CHROMagar™ Orientation

CHROMagar™ Orientation

Medio cromogénico para el aislamiento y diferenciación de patógenos del tracto urinarios.

Meio cromogênico para isolamento e diferenciação de patogênos do trato urinário.

CHROMagar™ and Rambach™ are Trademarks of Dr. A. Rambach Visit CHROMagar on internet via http://www.chromagar.com BIBLIOGRAPHY

articolo codice RT410 : confezione da 1000 ml articolo codice RT412 : confezione da 5000 ml articolo codice RT413 : alla rinfusa CONSERVAZIONE Conservare a temperatura compresa tra 15 e 30°C, al buio e in ambiente asciutto, fino alla data di scadenza indicata sullʼetichetta del contenitore. COMPOSIZIONE in g/L Agar 15,0; Peptone ed estratto di lievito 17,0; Miscela cromogena 1,0; pH : 7,0 +/- 0,2 (Formula standard adeguata e/o completata per rispondere a criteri di efficienza). PREPARAZIONE Versare una dose completa prepesata nel corrispondente volume di acqua distillata o deionizzata. In alternativa pesare 33,0 g/litro di acqua distillata o deionizzata. Sospendere la polvere nellʼacqua mediante lenti movimenti rotatori del contenitore. Sciogliere il terreno riscaldando lentamente fino a portarlo ad ebollizione (100°C). Durante questa fase mantenere agitato il terreno con un movimento di rotazione lento e regolare. Raccomandazione (opzionale): Per la crescita maggiore, aggiungere 0,5 g / L di Tween 80 al mix preparazione precedente. AUTOCLAVARE a 121°C durante 15 minuti. La miscela può essere sciolta anche utilizzando un forno a microonde: dopo la prima ebollizione, togliere il contenitore dal forno e mescolare secondo le modalità sopra descritte. Rimettere nel forno per brevi e ripetuti riscaldamenti fino ad ottenere il completo scioglimento dellʼagar (grosse bolle sostituiscono la schiuma). Raffreddare a bagnomaria a 45-50°C mantenendo regolarmente agitato il terreno. Versare in piastre di Petri o in provette e lasciare solidificare ed asciugare. Conservare al buio. Il terreno pronto allʼuso può essere mantenuto per un giorno a temperatura ambiente o per due settimane in frigorifero (2/8°C) se confezionato in modo tale da essere protetto dalla luce, dalla disidratazione e dai possibili inquinamenti ambientali.

Código RT410 : envase para 1000 ml. Código RT412 : envase para 5000 ml. Código RT413 : envase a granel.

artigo número RT410 : 1000 ml frasco artigo número RT412 : 5000 ml frasco artigo número RT413 : a granel

CONSERVACION Conservar el medio deshidratado entre 15/30°C hasta la fecha de vencimiento indicada en el envase.

CONSERVAÇÃO Conservar o pó entre 15/30°C até a data de validade indicada na etiqueta.

COMPOSICION en g/L Agar 15,0; Peptona y extracto de levadura 17,0; Mezcla cromogénica 1,0; pH: 7,0 +/- 0,2 (Fórmula standard ajustada y/o suplementada para satisfacer criterios de performance).

COMPOSIÇÃO em g/L Agar 15,0; Peptona e extratos de levedura 17,0; Mistura cromogênica 1,0; pH: 7,0 +/- 0,2 (Fórmula padrão ajustada e/ou suplementada para satisfazer critérios de desempenho).

PREPARACION Para una dosis prepesada de medio, añadir al medio deshidratado el volumen correspondiente de agua purificada, o pesar la cantidad de polvo necesaria en la proporción de 33,0 g/L de agua purificada. Espolvorear lentamente en el agua y dejar disolver el agar, mezclando suavemente con un movimiento de rotación. Llevar a ebullición (100°C) hasta la completa cocción del agar, con un movimiento de rotación lento y regular. Recomendación (opcional): Para un mayor crecimiento, añadir 0,5 g / L de Tween 80 a la mezcla de preparación. AUTOCLAVAR a 121°C durante 15 minutos. Se puede también preparar la mezcla en horno de microondas : después de un primer hervor, sacar del horno y agitar despacio, volver a poner en el horno por cortos períodos repetidos de calentamiento hasta la fusión completa del agar (gruesas burbujas reemplazan la espuma). Enfriar a baño maría a 4550°C y agitar despacio para homogeneizar sin hacer burbujas. Vertir en placas de Petri estériles, o en tubos y dejar secar.

PREPARO: Para a quantidade pré-pesada, acrescentar ao pó o volume correspondente de água destilada ou pesar a quantidade de pó necessária na proporção de 33,0 g/l de água destilada. Dispersar o pó lentamente na água misturando com movimentos de rotação até a hidratação do agar. Levar a ebulição (100°C) até fusão completa com movimentos de rotação lentos e regulares. Recomendação (opcional): Para reforçar o crescimento, adicionar 0,5 g / L de Tween 80 à mistura preparação prévia. AUTOCLAVAR a 121°C durante 15 minutos. O meio pode ser preparado em forno de microondas: depois de uma primeira ebulição, tirar do forno e agitar lentamente, retornando ao forno para curtos e repetidos aquecimentos até completa fusão do agar (grandes bolhas substituem à espuma). Resfriar em um banho-maria a 45-50°C e agitar lentamente para homogeneizar sem fazer bolhas. Distribuir em placas de Petri ou tubos estéreis e deixar solidificar.

Conservar en la oscuridad. Se puede conservar el medio preparado durante un día a temperatura ambiente, o durante dos semanas en frio (2/8°C) si está correctamente preparado y protegido de la luz y de la deshidratación. INOCULACION Poner la mezcla, si ha sido refrigerada, a temperatura ambiente antes de la inoculación. Inocular en superficie e incubar 18-24 horas y 37°C.

INTERPRETAZIONE Microorganismo

 aspetto tipico delle colonie

E. coli Enterococcus Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter Proteus Pseudomonas Staf. aureus Staf. saprophyticus

 rosa scuro al rossastro  blu turchese  blu metallico  alone bruno  crema, traslucido  dorato, opaco, piccola  roseo, opaco, piccola

EFFICIENZA e LIMITAZIONI La sensibilitá per E. coli é di 99.3 % (Merlino el al. 1996). La conferma di E. coli puó anche essere effetuatta col test Indolo e quella di Proteus col test TDA (FeCl3). Una identificazione decisiva necessita test supplementari. ELIMINAZIONE DEI RESIDUI Dopo lʼuso eliminare come rifiuti sanitari potenzialmente infetti, ai sensi della normativa nazionale e regionale attualmente in vigore. Italiano. Per uso diagnostico in vitro. Da utilizzarsi da parte di personale tecnico specializzato.

E.coli Enterococcus Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter Proteus Pseudomonas Staph. aureus Staph. saprophyticus

 azul metálico  halo pardo  crema, translúcido  dorado, opaco, pequeña  rosa, opaco, pequeña

PERFORMANCE Y LIMITACIONE La sensibilidad para E.coli es de 99,3 % (Merlino et al. 1996). Se puede confirmar E.coli con el test de Indol, y Proteus con el test TDA (FeCl3). Una identificación definitiva necesita de tests adicionales. ELIMINACION DE LOS RESIDUOS Después de la interpretación, hay que destruir las placas de Petri por tratamiento en autoclave a 121°C durante 20 minutos, por lo menos. Español. Uso in vitro. Producto de laboratorio para ser usado por personal especializado y entrenado.

TABLE ♦ RED translucent  Indole test (+) = E.coli ♦ Steel BLUE, Gram stain (-), appearance bacilli = Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Citrobacter ♦ BROWN halo or brown agar, FeCl3 if needed (+) = Proteus vulgaris (blue colony center), Morganella, Providencia (-) = Proteus mirabilis ♦ Turquoise BLUE, small colonies, Gram stain + appearance cocci  PYR test (or serological or hemolysis) PYR (+) = Enterococcus PYR (-) = Streptococcus B

INOCULAÇÃO: Se o meio foi refrigerado, deixá-lo ficar á temperatura ambiente antes da inoculação. Inocular em superfície e incubar a 37°C por 18-24 horas.

Available from CHROMagar :

Microrganismo

 Aspecto típico das colônias

E.coli Enterococcus Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter Proteus Pseudomonas Staph. aureus Staph. saprophyticus

 rosa escuro ao avermelhado  azul turquesa

 Aspecto típico de las colonias  rosa a rojo oscuro  azul turquesa

Houang, E. et al. 1999. The Use of CHROMagar Orientation as a Primary Isolation Medium with Presumptive Identification for the Routine Screening of Urine Specimens. APMIS 107: 859-862.

♦ OPAQUE, small colonies, Gram stain + appearance cocci (PINK) = Staphylococcus saprophyticus (CREAM) = Staphylococcus aureus, etc.

INTERPRETACION Microorganismo

Samra, Z. et al. 1998. Evaluation of Use of a New Chromogenic Agar in Detection of Urinary Tract pathogens. J.Clin. Microbiol. 36: 990-994

Conservar ao abrigo da luz. As placas preparadas podem ser mantidas por um dia a temperatura ambiente ou durante um mês em geladeira (2/8°C), se é corretamente preparada e protegida da luz e da desidratação.

INTERPRETAÇÃO INOCULAZIONE Se il terreno pronto allʼuso è stato conservato in frigorifero, riportarlo a temperatura ambiente prima dellʼinoculazione. Inoculare il campione sulla superficie del terreno ed incubare a 37°C per 18 e 24 ore.

Merlino, J. et al. 1996. Evaluation of CHROMagar Orientation for Differentiation and Presumptive Identification of Gram-Negative Bacilli and Enterococcus Species. J.Clin. Microbiol. 34: 1788-1793

 azul-acinzentado  halo marrom  creme, translúcido  dourado, opaco, pequena  rosa, opaco, pequena

DESEMPENHO e LIMITAÇÕES A sensibilidade para E.coli é de 99,3 % (Merlino et al. 1996). Pode-se confirmar E.coli com o teste Indol e Proteus spp com o teste de fenilalanina (FeCl3). Uma identificação definitiva necessita testes adicionais.

♦ Other aspect  classical identification

CHROMagar™ Candida Differentiation of major pathogenic Candida species CHROMagar™ Orientation Differentiation of urinary tract pathogens CHROMagar™ Salmonella Detection of Salmonella including S. Typhi CHROMagar™ O157 Detection of E.coli O157 CHROMagar™ Staph aureus Detection and enumeration of Staphylococcus aureus CHROMagar™ MRSA Detection of MRSA including low level MRSA CHROMagar™ VRE Detection of E.faecium VRE & E.faecalis VRE CHROMagar™ StrepB Detection of Streptococcus agalactiae (GBS) CHROMagar™ ESBL Detection of ESBL-producing bacteria CHROMagar™ KPC Detection of Carbapenem-resistant bacteria

TRATAMENTO DOS RESÍDUOS Após a utilização das placas autoclavar a 121°C por pelo menos 20 minutos. Português. Somente para uso diagnóstico in vitro. Produto de Laboratório deve ser utilizado por pessoal especializado.

4, place du 18 Juin 1940 75006 Paris France Fax: (33-1) 45 48 06 06 Version 10 NT-EXT-002 01-Sep-2011

CHROMOBRIT® Los cromógenos de la nueva generación Introducción L a identific ac ión bac teriana s e bas a generalmente, en una extens a batería de pruebas bioquímic as c onvenc ionales , que permiten determinar s us c arac terís tic as de des arrollo y s u metabolis mo. E s tos métodos requieren una c olonia bac teriana pura, tomada de una plac a de ais lamiento primario, s u s iembra en diferentes medios y s u pos terior lec tura e interpretac ión. E n la mayoría de los c as os , el diagnós tic o lleva tiempo y varios pas os de manipulac ión. H ac e poc os años s e ha c omenzado a utilizar s us tratos enzimátic os s intétic os , en la identific ac ión de mic roorganis mos c apac es de detec tar por medio de la formac ión de c olor, la pres enc ia de enzimas es pec ific as de es pec ie. E n general, s e dis tinguen varios grupos de c ompues tos c romogénic os que han s ido us ados en reac c iones bioquímic as para es tudiar la c inétic a de enzimas es pec ífic as , de ac uerdo al princ ipio, que el s us trato es hidrolizado por la enzima es pec ific a, liberando un c romóforo. Los s us tratos enzimáticos cromogénicos , s on en parte, compues tos fenol derivados tales como orto y para nitrofenoles , para-nitro-anilina, indolil derivados : 5 bromo-4 cloro-3 indolil, 5 bromo-6 cloro-3 indolil (magenta), 6 cloro-3 indolil (s almón). M uc hos de es tos s us tratos , s e pueden inc orporar a los medios de c ultivo para una identific ac ión rápida y prec is a. V arios inves tigadores c ombinan es tos s us tratos c on medios s elec tivos y diferenc iales . E l objetivo, es que es te tipo de s us tratos enzimátic os inc orporados en un medio s elec tivo, pueda eliminar la nec es idad del s ubc ultivo y la realizac ión de numeros as pruebas bioquímic as , ec onomizando tiempo y dinero. L as interac c iones entre los mic roorganis mos y las s us tanc ias químic as , difieren y dependen de la es truc tura de los c romógenos us ados y de las enzimas detec tadas . L a s us tanc ia generada durante la reac c ión enzimátic a, s e prec ipita s obre las c élulas mic robianas dando c arac terís tic as c romogénic as es pec ífic as a las c olonias .

Aplicación de las pruebas enzimáticas L a detec c ión y rec uento de bac terias indic adoras de c ontaminac ión, es de importanc ia primaria en el c ontrol de c alidad de aguas y alimentos . E n partic ular, c oliformes y E . c oli, s e us an c omo indic adores de poluc ión fec al. L as bac terias c oliformes y E . c oli en aguas y alimentos , generalmente s e detec tan us ando la téc nic a de filtrac ión por membrana (FM ), la téc nic a del número mas probable (N M P ), o us ando el ens ayo de la pres enc ia / aus enc ia de c oliformes (P /A ), prueba pres untiva que debe c ontinuars e c on una prueba de c onfirmac ión. E l c riterio más importante us ado durante el rec uento de bac terias c oliformes , es la fermentac ión de lac tos a. L a ruptura del dis ac árido, es c atalizada por la enzima ß- D - galac tos idas a. L as pruebas para fermentac ión de lac tos a us an las propiedades de produc c ión de gas y ác ido. E s te método requiere varios días c uando da pos itivo y s e deben realizar las pruebas de c onfirmac ión de las bac terias ais ladas .

Escherichia coli L a ß- D - gluc uronidas a (G U D ) es una enzima que c ataliza la hidrólis is de ác idos ß- D gluc opiranos idúric os en s us c orres pondientes aglic onas y ác ido gluc urónic o. L aboratorios Britania, ha aprovec hado es te princ ipio c uando des arrolló hac e años s u produc to C olibritania c on P N P G (B1 2 4 0 5 2 4 ). N umeros os autores , han demos trado que aproximadamente entre el 9 4 – 9 6 % de c epas de E . c oli y s olo unas poc as de Salmonella, Shigella y Y ers inia produc en es ta enzima. C abe ac larar que algunas c epas patógenas de E . c oli c omo E . c oli H 7O 157, no pos een G U D y otras E s c heric hia s pp no produc en es ta enzima. L a ac tividad de ß- D gluc uronidas a (G U D ) s e puede medir us ando varios s us tratos c romogénic os . E jemplos en medios líquidos y s ólidos inc luyen: p- nitrofenol ß- D gluc urónido (P N P G ) 5 bromo- 4 c loro- 3 indolil ß- D gluc urónido (X- G U D ) 5 bromo- 6 c loro- 3 indolil ß- D gluc urónido (M ag G U D ) que danel p- nitrofenol (amarillo), el azul indoxilo y magenta, res pec tivamente.

Bacterias coliformes L a ß- D galac tos idas a es la enzima utilizada c omo marc ador para c oliformes y puede s er detec tada, us ando s us tratos tales c omo O - nitrofenil ß- D galac topiranós ido (O N P G Britania B1 2 4 0 1 2 7 ), 5 bromo4 c loro- 3 indolil ß- D galac topiranós ido (X- G A L ), 5 bromo- 6 c loro- 3 indolil ß- D galac topiranós ido (M ag- G al). P or lo tanto, es pos ible preparar medios para la detec c ión s imultánea de c oliformes totales y E . c oli en aguas y alimentos . E n medio s ólido, s e obs erva que el produc to final c oloreado de la ruptura del O N P G , difunde

extens ivamente en el medio de c ultivo. P or tal motivo, X- G al o M ag- G al en medios s ólidos , s on efec tivos para detec tar la ac tividad ß- D galac tos idas a porque prec ipitan s obre las c olonias en formac ión.

CHROMOBRIT® c.c. Para la búsqueda de E. coli y coliformes en aguas y alimentos L aboratorios Britania ha des arrollado un medio s ólido que c ontiene los s us tratos c romogénic os 5 bromo- 4 c loro- 3 indolil ß- D gluc urónido (X- G U D ) y 5 bromo- 6 c loro- 3 indolil ß- D galac topiranós ido (M agenta G al) y el ac tivador I P T G (I s opropil ß- D tiogalac topiranós ido). E l c rec imiento de c oliformes , aún de las c élulas dañadas , es ta garantizado por la c ompos ic ión del medio de c ultivo que c ontiene tripteína (hidrolizado panc reátic o de c as eína), extrac to de levadura, piruvato de s odio, peptona de s oya y fos fatos . L as bac terias G ram pos itivas , s on inhibidas por la pres enc ia de lauril s ulfato de s odio. Sobre es te medio de c ultivo, las c olonias de Escherichia coli c rec en favorablemente y s on detec tadas por la aparic ión de un c olor azul o azul os c uro a violeta en el c entro de la c olonia, produc ido por la ruptura del X- gluc urónido a partir de la ß- D gluc uronidas a. L as bac terias del grupo que no pos een ß gluc uronidas a c omo la E . c oli H 7O 157 c rec en c on c entro ros ado- rojizo (ya que s í tienen pres ente la enzima G al c omo todos los c oliformes ). Los colif ormes totales (Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter), c rec en dando c olonias c on c entro ros ado- rojizo por la ruptura del s us trato magenta- G al por la ac c ión de la ß galac tos idas a. L as bac terias no fermentadoras de lac tos a (P roteus s pp, Salmonella s pp, Shigella s pp) dan c olonias blanc as . L os es tafiloc oc os y enteroc oc os es tán inhibidos . C omo el medio de c ultivo bas e, c ontiene triptofano, s e puede realizar la prueba de indol, lo que inc rementa el valor pres untivo del hallazgo de E . c oli. Instrucciones

Fórmula (en gramos por litro) T ripteína

1 0 .0

P iruvato de s odio

1 .0

P eptona de s oya

5 .0

N itrato de potas io

1 .0

L - triptofano

1 .0

L auril s ulfato de s odio

0 .2

Fos fato dipotás ic o

2 .5

E xtrac to de levadura

5 .0

A gar

1 5 .0

X- G U D

0 .1

M agenta G A L

0 .1

IPTG

Fundir los fras c os del medio s ólido en un Baño M aria a ebullic ión. D is tribuir aproximadamente 1 5 ml por plac a. E l medio de c ultivo en las plac as es ligeramente opales c ente. G uardar en heladera al abrigo de la luz.

0 .1 pH final: 7 .1 ± 0 .2

Inoculación de muestras Sembrar las mues tras en s uperfic ie o por la téc nic a del pour - plate. I nc ubar 2 4 h a 3 5 – 3 7 ºC

Resultados Microorganismo

Características de las colonias

E . c oli

C olonias azul os c uro a violeta

C oliformes

C olonias ros adas a rojizo

O tras bac terias G ram N egativas

C olonias blanc as o inc oloras

IMPORTA NTE L a detec c ión de beta triptofanas a (prueba del indol), realizada c on reac tivo para dimetil amino c inamaldehído, aumenta la s ens ibilidad del método para detec tar E . c oli. P ara la reac c ión, pas ar una c olonia a papel de filtro y agregar una gota del reac tivo. L a aparic ión de un c olor azul, dentro de los treinta s egundos , indic a la pos itividad de la prueba. Según la literatura entre el 9 4 /9 6 % de E . c oli, pos ee la enzima ß - gluc uronidas a. E s c heric hia c oli H 7O 157 es ß gluc uronidas a (- ), indol (+). CONTROL DE CA LIDA D Microorganismo

Características de las colonias ß-glucuronidasa

ßgalactosidasa

Indol

E . c oli A T C C 2 5 9 2 2

C olonias c on c entro azul os c uro a violeta.

+

+

+

E . c oli A T C C 3 5 2 1 8

C olonias c on c entro azul os c uro a violeta.

+

+

+

E . c oli H 7O 157 A T C C 7 0 0 7 2 8

C olonias c on c entro ros ado rojizo

-

+

Klebs iella pneumoniae A T C C 700603

C olonias c on c entro ros ado rojizo.

-

+

C itrobac ter freundii

C olonias c on c entro rojizo.

-

+

P roteus mirabilis A T C C 4 3 0 7 1 C olonias blanc as .

-

-

M organella morganii

C olonias blanc as .

-

-

Salmonella typhimurium A T C C 14028

C olonias blanc as .

-

-

Salmonella enteritidis

C olonias blanc as .

-

-

P s eudomonas aeruginos a A T C C C olonias blanc as . 27853

-

-

Shigella flexneri. A T C C 1 2 0 2 2

C olonias blanc as .

-

-

Staphyloc oc c us aureus A T C C 25923

I nhibido.

-

-

E nteroc oc c us faec alis A T C C 29212

I nhibido.

-

-

Observaciones L a prueba del indol c on otras bac terias , por ejemplo M organella morganii, el c olor es azul verdos o. ß gluc uronidas a + c olonias c on c entro azul os c uro a violeta. ß galac tos idas a + c olonias c on c entro ros ado rojizo.

Almacenamiento C ons ervar a 1 0 - 3 5 °C . Presentación 6 x 5 0 ml *

B0 4 - 2 1 4 - 8 4

1 2 x 1 0 0 ml *

B0 4 - 2 1 4 - 9 2

* I nc luye Reac tivo c inamaldehído

+