“ Especialización en Bacteriología Clínica”

Metodologías para la detección de Campylobacter spp spp..

Maria Rosa Viñas Departamento Bacteriología INEI-ANLIS “C.G.Malbrán”

CARACTERISTICAS GENERALES género Campylobacter familia Campylobacteriaceae • • • • •

Bacilos Gram negativos. Tamaño: 0,2-0,5 mµ Curvos, espirilados o en forma de S. Flagelo único en uno o en ambos extremos. En cultivos de varios días, degeneran a formas cocoides.

Campylobacter jejuni Formas cocoides

Campylobacter jejuni

ESPECIES TERMOFILAS Crecen a 42 - 43°C; no crecen a 25°C • *Campylobacter jejuni (subesp. jejuni y doylei). Agente causal de diarrea (más virulento, resistente a la fagocitosis) • *Campylobacter coli. Produce diarrea más benigna. (*)Comensales de intestino de: vacas, ovejas, cerdos, cabras, perros, roedores domésticos y silvestres y aves. • Campylobacter lari. Aislado de intestino de gaviotas. No está definido el rol patógeno para el hombre. Indoxil acetato (-) y R al ac. Nalidíxico. • Campylobacter upsaliensis. Raro aislarlo de diarreas. Produce bacteriemias en HIC. No está definida la fuente de infección. Relacionado con animales, especialmente perros y gatos, alimentos como leche no pasteurizada y derivados

ESPECIES NO TERMOFILAS Crecen a 25°C y 37°C • Campylobacter fetus (subespecie fetus y venerealis): importancia en medicina veterinaria por producir aborto esporádico en el ganado ovino y bovino e infertilidad en bovinos. • C. fetus subesp. fetus: patógeno oportunista para el hombre (infecciones sistémicas en pacientes inmunodeprimidos). Diferencia entre ambas subespecies: glicina al 1% • C. fetus subesp. venerealis: aparato genital de vacas causando infertilidad. • C. hyointestinalis: hisopados rectales en pacientes con proctititis, ileítis en cerdos. Pude crecer a 42°C y produce SH2 en TSI.

FISIOPATOGENIA • Microorganismo ingresa por vía digestiva de alimentos contaminados ó contacto con animales. • Periodo de incubación: 1 a 7 días. • Cepas con distinto grado de patogenicidad en diferentes países.

Dosis infectiva : 500 a 106 microorganismos. Casos asociados a SGB. En pacientes HIV e IMC :artritis, peritonitis,endocarditis aborto y sepsis neonatal.

MECANISMOS DE VIRULENCIA • Invasión de células epiteliales con abscesos en las criptas e infiltrados inflamatorios en la lámina propia (sim. Shigella) Diarreas inflamatorias y disentéricas. • Atraviesan mucosa intestinal y proliferan a lámina propia y ganglios. Infecciones extraintestinales (sim. Salmonella) • Pueden producir toxinas termolábiles provocando una diarrea secretora (simil a E. coli y V. cholerae) • Puede observarse acción citotóxica sobre células Hela y Vero , “cytoletal distending toxin”, distensión y muerte celular.

Síndrome de Guillain-Barré Carácteristicas de la enfermedad: Poliradiculopatia aguda desmielinizante que se asocia a infección previa 10 días o 3 semanas por Campylobacter (1 de cada 2000 infecciones).
Cuadro autoinmune por producción de IgG-AntiGM-1, Ac con especificidad dirigida al LPS de serotipos de Campylobacter jejuni, (Ac reaccionan en forma cruzada con gangliósidos de la vaina de mielina que recubre el axón de la célula neuronal). Para asociar Síndrome con infección previa se aconseja realizar: Cultivo: • Coprocultivo seriado (3 muestras): con un aislamiento es suficiente Pruebas serológicas (ELISA): • IgG e IgM post infección por Campylobacter generalmente permanecen elevadas 3 o 4 semanas. • Confirmar aumento de dos o más títulos en serología seriada.

PRINCIPALES DIFICULTADES IDENTIFICADAS EN EL PROCESO DE IDENTIFICACIÓN 1- Toma y remisión de muestras 2 - Obtención de una atmósfera adecuada 3- Suplemento antibióticos-Medios selectivos 4- Conservación de cepas

2- Atmosfera de incubación •Reemplazo de una atmósfera normal por una mezcla de gases apropiados 85% de N2, 10% de CO2 y 5% de O2 •Sobres generadores de gases especiales para Campylobacter BBL, Oxoid, Bio-Merieux 5-10% de O2 y 5-12% de CO2 •Sobres generadores de hidrógeno y oxígeno para anaerobiosis : precaucón por el hidrógeno •Jarra con vela 17-19% de O2 y de 2-4% de CO2 (usar suplemento FBP) •Generadores caseros a.Una pastilla de boranato de sodio ( 0,8 gr para una jarra de 3 litros) Una pastilla de Alka Seltzer o Yastá 10 ml de agua destilada. b.Lana de acero Solución ácida de sulfato cúprico: SO4Cu2 5gr, H2O 100 ml, H2SO4 0,33ml y Tween80 0,2 ml

Jarras y generadores de microaerofilia

Sistema de cambio de gases en jarra Bomba de vacío Jarra con manómetro Tubo con mezcla de gases 85% de N2, 10% de CO2 y 5% de O2

Preparación para incubar con atmósfera adecuada-Alimentos Erlenmayer con caldo de enriquecimiento

Conexión a tubuladuras para Proporcionar atmósferaColocación en Baño a 44ºC

Sistema completo de burbujeo

Para procesar alimentos

3- Suplementos antibióticos • Suplemento Caldo Bolton: Cefoperazona,vancomicina, trimethoprim,cicloheximide • Suplemento Agar Skirrow Vancomicina, trimethoprim, polimixina B • Suplemento Agar CCDA Cefoperazona, Amphotericina B PREPARACION ARTESANAL DE SUPLEMENTOS ANTIBIOTICOS

Epidemiología de Campylobacter  Las especies de Campylobacter que causan infección entérica se

encuentran habitualmente como comensales del tracto gastrointestinal de una gran variedad de maníferos y aves, domésticos y de vida libre.  Principales fuentes de infección han sido asociadas al contacto con animales, agua o alimentos principalmente de origen aviar contaminados.  En países industrializados Campylobacter es el primer agente de diarrea por consumo de carne mal cocida ó contaminación cruzada al preparar los alimentos.  En países en vías de desarrollo Campylobacter es el segundo agente de diarrea, según el lugar geográfico, principalmente en niños

Aislamiento de Campylobacter spp. a partir de materia fecal Muestra de material fecal

Examen microscópico directo en: - Contraste de fase, campo oscuro u óptico - Tinción de Gram

Aislamiento directo

Aislamiento indirecto (optativo)

Placas de medio selectivo Skirrow-Mccda

Enriquecimiento Caldo Bolton (24 h a 42 - 43 ºC)

Incubación 24 - 48 h a 42 - 43 ºC En condiciones de microaerofilia

Identificación presuntiva: -examen microscópico directo (contraste de fase) (tinción de Gram) - prueba de oxidasa - prueba de catalasa

Pruebas bioquímicas: - Hidrólisis del hipurato - Hidrólisis del indoxil acetato - Sensibilidad a NAL y CEF

Identificación final

PCR

METODO DE FILTRACION PARA LA DETECCION DE Campylobacter EN HECES (*)

• El método se basa en la separación de Campylobacter del resto de la flora microbiana presente en las heces, retenidos en la superficie de una membrana de celulosa de 0,45 o 0,66 µm; los bacilos que logran penetrar la membrana van a depositarse sobre una placa de agar sangre. • De esta manera se obtiene un cultivo selectivo, situación que reemplaza a la adición de antibióticos. • Este método se recomienda para el aislamiento de las especies emergentes: Campylobacter upsaliensis.

Métodos rápidos comerciales para Campylobacter spp.

Nombre comercial

Blanco

Método

Tipo de muestra

Requerimientos (tiempo de procesamiento)

Sensibilidad / Especificidad

Remel ProSpecT* Campylobacter Microplate Assay

C. jejuni y C. coli

ELISA directo

Materia fecal fresca o en medio Cary Blair.

3h

S: 89,1% E: 97,7%.

SafePath™ Campylobacter assay

Campylobacter spp. termofílicos

ELISA

Alimentos

medio de enriquecimiento (24 h / 42ºC) 36 h

Inmunoensayos visuales 3M™ Tecra™ para detección de Campylobacter

Campylobacter spp. termofílicos

ELISA

Alimentos. Hisopados ambientales

medio de enriquecimiento (24 h / 42ºC) 36 h

RIDASCREEN® Campylobacter

C. jejuni, C. coli y C. lari

ELISA directo

Materia Fecal fresca o congelada a -20ºC.

3h

S: 100 % E: 99,6 %

Ensayos de PCR estandarizados para Campylobacter spp. PCR Campylobacter Termotolerantes

Limite de detección en alimentos 104 UFC / 25 g alimento

Especificidad 100%

PS Lubeck, P Wolffs, SLW On , P Ahrens,P Rädstrom and J Hoorfar.Toward an international Standard for PCR-based detection of food-borne thermotolerant Campylobacter: assay development and analytical validation.Applied and Environmental Microbiology. 69(9): 5664-69.2003.

Especificidad 100%

A global Salmonella surveillance and laboratory support project of the World Health Organization. Multiplex PCR for differentiation of C. coli and C. jejuni. Laboratory Protocols, Training Course, Feb 2003.

Presentó reacción cruzada con Arcobacter en aislamientos.

D Linton, RJ Owen and J Stanley. Rapid identification by PCR of the genus Campylobacter and of five Campylobacter species enteropathogenic for man and animals. Res Microbiol 147:707-18, 1996.

Aislamientos. Alimentos

PCR Múltiple C. jejuni / coli

PCR Género

Campylobacter

PCR Campylobacter

Limite de detección en alimentos 105 UFC / 25 g alimento Aislamientos Alimentos Aislamientos Alimentos

lari

Aislamientos

PCR Campylobacter

Aislamientos

fetus

Especificidad 100%

Especificidad 100%

FLUJOGRAMA DE TRABAJO PARA LA IDENTIFICACIÓN DE Campylobacter spp. A PARTIR DE ALIMENTO ( según ISO/FDIS 10272: 2006) Lavado de la Muestra 25gr carne en 225 ml SF según ISO

Pre-Enriquecimiento 9 x ml de Caldo Bolton con suplemento antibiótico (dil1/10) Incubación del caldo 4 -6 h a 37 ºC±1 ºC

TAMIZAJE

1 ml extracción de ADN por hervido,Chelex

Enriquecimiento PCR -16S rDNA Campylobacter spp.

Incubación por 24 – 44 h ±4h a 41,5 C ± 1ºC en microaerofilia

Aislamiento en medios selectivos ( mCCD agar , Skirrow ó agar base con sangre, etc)

Incubación por 18 h ±3h 37 ºC ±1 ºC

Continuación del Flujograma de aislamiento

Resultado positivo

Resultado negativo

a

Identificación presuntiva y Subcultivo en medio Agar sangre Incubación por 18 h ±2h 41,5 ºC ±1 ºC en microaerofilia

a

Confirmación bioquímica

EXPRESION DE RESULTADOS

-SF: Solución fisiológica estéril. -mCCD: modified Campylobacter Charcoal differential Agar -Medio Skirrow ó agar base (Caldo nutritivo) -Sangre estéril ( 5-7% en agar base)

 Puesta a punto de PCR para Campylobacter spp. a partir de cepa (Linton y col., 1996) · Revisión taxonómica en los últimos años Campylobacter cryaerophilus como Arcobacter cryaerophilus - Ensayo de inclusividad y exclusividad 1

2

3

4

5

6

7

8

9

10 M

Campylobacter spp.

800 pb

Fig 4. .Electroforesis en gel de agarosa de productos amplificados por PCR de Campylobacter spp.: Calle 1: Aislamiento Campylobacter fetus, calle 2: cepa de Refencia WHO 7.1 Campylobacter lari, calle 3: Aislamiento Campylobacter coli, calle 4: cepa de Referencia WHO 6.1 Campylobacter jejuni, calle 5:cepa de Referencia WHO 6.2 Campylobacter coli, calle 6: Cepa de Referencia CDC P/08 Campylobacter jejuni, calle 7: Aislamiento Salmonella serov Typhimurium, calle 7: Aislamiento Enterobacter sakasakii, calle 8: cepa de Refencia RC Vibrio cholerae no-O1, calle 10: control de reacción (mezcla de reacción sin ADN) calle M: Marcador de peso molecular 100 bp .

Foto de PCR de Campylobacter spp. 1 2

3 4

5 6 7

8 9 10 11 12 13 14 M

816 pb 500 pb

Fig 1. Electroforesis en gel de agarosa de los productos amplificados por PCR- género a partir de ADN de muestra de alimento inoculadas con 1 a a 10000 UFC de Campylobacter jejuni/coli en presencia del IAC Calles 1, 2, 3 y 4: ADN de muestra de alimento con 1, 10, 100 y 1000 UFC de Campylobacter jejuni , Calles 5, 6, 7 y 8: ADN de muestra de alimento con 10, 100 ,1000 y 10000 UFC de Campylobacter coli; calle 9 : IAC 10 -6 (, calle 10: control del sistema, calle 11: Control positivo Campylobacter jejuni , calles 12 y 13 : IAC 10-7 y 10-8. Calle 15: Marcador de peso molecular 100 bp.

 PCR para Campylobacter spp . (con BSA ) a partir de muestras de ciego de pollo inoculadas experimentalmente con Campylobacter jejuni pre-enriquecidas en caldo Bolton M 2 3

4

5

sin Chelex

6 7

8

9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 M

con Chelex

800 pb 10 102 104 108 0 10 102 104 108

Fig. 5 . Electroforesis en gel de agarosa de los productos amplificados por PCR- género a partir de muestras de ciegos inoculadas experimentalmente con Campylobacter jejuni Calle M: marcador de peso molecular DNA 100 pb, Calles2 – 5: Muestras de ciego (1 g) inoculadas con 1-10, 100, 104, y 108 UFC/ ml de la cepa de referencia WHO 6.1 Campylobacter jejuni;, Calles 6 - 9 extracción de ADN con Chelex: calle 6: Muestra de ciego sin inocular, calles 7-10: Muestra de ciego inoculada con 1-10 , 100, 104 y 108 UFC/ ml de la cepa de referencia WHO 6.1 Campylobacter jejuni , Calle 10 y 13 : Cepa de referencia WHO 6.1 Campylobacter jejuni, calle 11: C. coli, calle 12: C. lari,, calle 14: C. fetus, calle 15::control del sistema (mezcla de reacción sin templado), calles 16, 17 y 18 cepa referencia WHO 6.2 Campylobacter coli, calle 19: cepa Referencia Salmonella Enteritidis.

IDENTIFICACIÓN PRESUNTIVA DE Campylobacter spp Colonias Colonias sospechosas sospechosas

Morfología típica Movimiento en espiral (en contraste de fase o campo oscuro)

Gram (bacilo gram (-) curvo)

Colonias típicas en Agar Karmali

Oxidasa (+) Catalasa (+)

PROBABLE CAMPYLOBACTER Confirmar con pruebas bioquímicas

Colonias típicas en Agar Skirrow

IDENTIFICACION FINAL • Crecimiento a 42-43°C y a 25°C • Sensibilidad al ácido nalidíxico y cefalotina • Hidrólisis del hipurato • Hidrólisis del indoxil acetato • Producción de ácido sulfhídrico (Medio de Lior)

Hidrólisis del hipurato – Hidrólisis del indoxil acetato

Hidrólisis del hipurato

Hidrólisis del indoxil acetato

Produccion de sulfhidrico (Medio de Lior) Sensibilidad a Acido Nalidixico y Cefalotina MEDIO DE LIOR

CEFALOTINA Resistente

ACIDO NADÍLIXICO Sensibilidad variable

Temperaturas de Desarrollo de las Diferentes Especies de Campylobacter 25°C

37°C

42°C

C. jejuni subsp. jejuni

-

+

+

C. jejuni subsp. doylei

-

+

-

C. coli

-

+

+

C. fetus subsp. fetus

+

+

d

C. fetus subsp. venerealis

+

+

-

C. lari

-

+

+

C. upsaliensis

-

+

+

C. hyointestinalis

d

+

d

C. sputorum subsp. sputorum

-

+

+

C. sputorum subsp. bubulus

d

+

-

C. curvus

-

+

+

C. rectus

-

+

d

C. showae

-

-

+

Características Bioquímicas de Especies de Campylobacter Termotolerantes C. jejuni C. coli C. lari C. upsaliensis jejuni Doyle Hidrólisis del hipurato Oxidasa Producción de catalasa Reducción de nitratos Producción de SH2 R. Ac. Nalidíxico R. cefalotina Indoxil acetato TTC Glycina 1%

+

+

-

-

-

+ +

+ +

+ +

+ +

+ -/d

+

-

+

+

+

S R + S/d +

S V +

-/d S R + S +

+ R R S +

S S +

+

V

S: sensible R: resistente d: débil V: variable TTC: cloruro trifenil tretazolium

PRUEBAS BIOQUIMICAS

PCR

 Bajo espectro de pruebas bioquímicas para caracterización fenotípica a nivel de las especies más frecuentemente implicadas como agentes de transmisión alimentaria: Campylobacter jejuni/coli  Dificultad en la definición de especie por la prueba del hipurato. i- Existencia de cepas de C. jejuni hipurato negativo (2%) ii- Cepas de C. jejuni con baja producción de la enzima hipuricasa. iii- Presencia de contaminantes capaces de reaccionar con el revelador (falsos positivos)

PCR COMO HERRAMIENTA MOLECULAR PARA CONFIMAR LA IDENTIFICACION A NIVEL DE ESPECIE, A PARTIR DEL AISLAMIENTO.

Fig.1: Electroforesis en gel de agarosa de la reacción de PCR- Simple y PCR- Multiplex específica de especie Campylobacter jejuni /coli.

Test de Exclusividad M

1

2

3

4

5

6

7

8

9 10

773 pb C. jejuni 364 pb C. coli Calle M: marcador de peso molecular DNA 100 pb , calle: 1 : aislamiento de Salmonella spp.; calle 2: aislamiento de Pseudomona aeruginosa, calle 3 : aislamiento de Enterococo spp., calle 4 : aislamiento de Escherichia coli, calle 5 : aislamiento de Klebsiella spp., calle 6: aislamiento de Staphylococcus spp, calle 7: cepa control Campylobacter jejuni, calle 8: cepa control Campylobacter coli, calle 9: cepas controles Campylobacter jejuni / coli, calle 10: mezcla de reacción sin templado.

Fig 2. Electroforesis en gel de agarosa de productos de amplificación obtenidos por PCR- Multiplex de aislamientos de C. jejuni/coli de Argentina Test de Inclusividad 1

2

3

4

5

6

7

8

9

10 11 12

13 14

M

C.jejuni 773 pb C.coli 364 pb

PCR-Multiplex para C. jejuni/coli. Calles 1, 2, 3, 5, 6, 8 y 9: aislamientos de C.jejuni; calles 4, 7 y 10: aislamientos de C.coli ; calle 11: cepa control negativo Salmonella Enteritidis 2041/06; calle 12: control de reactivos (sin templado); calle 13: cepa control positivo C.coli del WHO-Global Salm Surv-EQAS; calle 14: cepa control positivo de C.jejuni del WHO-Global Salm Surv-EQAS; marcador de peso molecular 100 bp ladder (Invitrogen

4- Métodos de conservación Suspender una ansa de cultivo puro en: • Medio con glicerol: en 0.5 ml de caldo triptosa -fosfato con 5 % de suero equino estéril y 17 % de glicerol, llevar a -70 ºC antes de los 20 minutos. • 85 ml de caldo Brucella + 15 ml de glicerol. Llevar a -70 ºC (3 años) o -20 ºC (1 año). • Medio Wang: Caldo Brucella con 0.5 % de agar y 10 % de sangre, inocular por punción e incubar 24 hs 42 ºC en microaerofilia. Guardar a -20ºC hasta 4 meses.

Aislamientos analizados en LNR 2010 – 2011 (Sivila) Campylobacter spp. jejuni Totales: 555 coli fetus

476 74 1


Estudio de Campylobacter spp.: Se evaluó la

relación genética de aislamientos de Campylobacter spp. de origen humano, de mascotas y aves de corral por PFGE. Se detectaron patrones relacionados


Se detectaron patrones de PFGE de C. jejuni y C. coli en diferentes provincias indicando circulación en el país de aislamientos con potencial de diseminación.

Resistencia a antimicrobianos – Red WHONET WHONET--ARG (2007--2010) (2007 % de NS en Campylob acter spp. Grupo Campylob acter -Arg Años 2007-2010 (N=834) 100 2007 (n=247)

80

2008 (n=199)

60

%

2009 (n=142)

40

2010 (n=246)

20 0 TET

ERI

CIP

CHL

NIT

AZI

Antibiótico

Campylobacter spp. (2007-2010): 834 aislamientos, alto % de R a CIP (65.7%) y a tetraciclina (TET) (34.2%) y muy bajo % de R a eritromicina (ERI) (4.2%).

Campylobacter spp: spp: porcentaje de resistencia, 2011

Puntos de corte: 1Tabla 4.M45-A2 CLSI 2010. 2 Extraídos de la literatura internacional

spp: Método de Difusión por disco Campylobacter spp:

Drogas a ensayar para cepas provenientes de diarreas: CIPROFLOXACINA Y ERITROMICINA. Adicionales: nitrofurantoinas nitrofurantoinas,, cloranfenicol y tetraciclina

Condiciones del test: Medio: MH enriq. con 5% de sgre. de carnero desfibr. Inóculo: suspención directa de la colonia. 0.5 de McFarland Incubación: a 42°C por 24 horas o a 36-37°C por 48 hs. en microaerofília (10 % CO2, 5% O2 y 85% N2).

Interpretacion:: Los ATB que no presentan zonas de inhibición Interpretacion correlacionan bien con CIMs de resistencia, por lo que deben interpretarse como R. Servicio ANTIMICROBIANOS INEI – ANLIS Dr Carlos G. Malbran

Campylobacter spp.: prevalencia y caracterización feno-genotípica de aislamientos de pacientes con diarrea y de sus mascotas en la provincia de La Pampa, Argentina. ISSN 0325-7541 Revista Argentina de Microbiologia (2012) 44: 266-271

Campylobacter jejuni en humanos y mascotas

Dice (Op t:1 .5 0%) (Tol 1 .5% -1.5% ) (H >0 .0% S>0.0%) [0.0% -100 .0 %]

PFGE-SmaI

PFGE- SmaI Fecha aisl.

Especie

Cj145/11 La Pampa

201 1-05-11

C. jeju ni

A RDBRS16.0022 ave

S

S

Cj376/10 La Pampa

201 0-11-10

C. jeju ni

A RDBRS16.0022 canino

S

S

Cj379/10 La Pampa

201 0-11-10

C. jeju ni

A RDBRS16.0022 hu ma no

S

S

Cj49/11

201 1-02-01

C. jeju ni

A RDBRS16.0104 hu ma no

R

S

Cj375/10 La Pampa

201 0-10- 07

C. jeju ni

A RDBRS16.0130 canino

R

S

Cj324/10 La Pampa

201 0-10-04

C. jeju ni

A RDBRS16.0132 hu ma no

R

S

Cj129/11 La Pampa

201 1-04-25

C. jeju ni

A RDBRS16.0128 hu ma no

R

R

Cj130/11 La Pampa

201 1-04-25

C. jeju ni

A RDBRS16.0128 canino

R

R

Cj111/11 La Pampa

201 1-04-14

C. jeju ni

A RDBRS16.0080 ave

R

R

Cj112/11 La Pampa

201 1-04-14

C. jeju ni

A RDBRS16.0080 ave

R

R

Cj116/11 La Pampa

201 1-04-11

C. jeju ni

A RDBRS16.0080 hu ma no

R

R

Cj144/11 La Pampa

201 1-05-11

C. jeju ni

A RDBRS16.0080 felino

R

R

Cj332/10 La Pampa

201 0-10-07

C. jeju ni

A RDBRS16.0101 hu ma no

R

S

100

80

60

Aislamiento Provincia

La Pampa

Nº patrón

Origen Perfil de Resistencia CIP TET

Campylobacter coli en humanos y mascotas

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-SmaI

PFGE-SmaI Provincia

Fecha aisl.

Especie

Nº patrón

Origen

10 0

80

60

Aislamiento

Perfil de Resistencia CIP TET

Cc143/11 La Pampa 2011-05-11 C. coli ARDBBS16.0018 humano R

R

Cc51/11 La Pampa 2011-02-02 C. coli ARDBBS16.0029 canino

S

S

Aislamientos de Campylobacter spp. origen humano – 2010 (GFN) Distribución de Campylobacter spp.

121

4

jejuni coli fetus

1115

Na: Número total de aislamientos: 1.354 (100%) Nc: Número total de aislamientos caracterizados: 1.242 (91.7%)

Países que reportaron datos: Argentina, Brasil, Chile, Colombia, Paraguay y Perú

CAMPYLOBACTER spp spp.: .: PRIMEROS ESTUDIOS DE SUBTIPIFICACIÓN DE AISLAMIENTOS CIRCULANTES EN ARGENTINA Y PARAGUAY (COMIC,2009) (BDR Pulse Net) Dendrograma de relación genética entre los aislamientos de C. jejuni de Paraguay y Argentina Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-SmaI 100

50

PFGE-SmaI

Origen

año aisl.

especie

Cj 82/08

Cepa

Argentina

Pais

Resistencia

Ciudad

Human

2008-08-07

C. jejuni

ALDBRS16.0001

Cj12/09

Argentina

Neuquen

Human

2009-01-27

C. jejuni

ALDBRS16.0002

Cj121/08

Argentina

Rosario

Animal

2008

C. jejuni

ALDBRS16.0003

Cj21/08

Argentina

Rosario

Human

2008-05-20

C. jejuni

ALDBRS16.0004

Cj132/09

Paraguay

Asuncion

Human

2008-12-23

C. jejuni

ALDBRS16.0005

Cj 35/08

Argentina

Neuquen

Human

2008-06-01

C. jejuni

ALDBRS16.0006

Cj23/08

Argentina

Rosario

Human

2008-05-24

C. jejuni

ALDBRS16.0007

Cj51/06

Argentina

Santa Fe

Human

2005-12-01

C. jejuni

ALDBRS16.0008

Cj121/09

Paraguay

Asuncion

Human

2008-11-19

C. jejuni

ALDBRS16.0009

Cj122/09

Paraguay

Asuncion

Human

2008-11-19

C. jejuni

ALDBRS16.0009

Cj 38/08

Argentina

Neuquen

Human

2008-07-01

C. jejuni

ALDBRS16.0010

Cj120/09

Paraguay

Asuncion

Human

2008-11-19

C. jejuni

ALDBRS16.0011

Cj73/06

Argentina

Mar del Plata

Human

2006

C. jejuni

ALDBRS16.0011

Cj85/06

Argentina

Santa Fe

Human

2006-01-25

C. jejuni

ALDBRS16.0011

CjP25/07

Paraguay

San Lorenzo

Human

2007-03-03

C. jejuni

ALDBRS16.0011

Cj209/08

Argentina

Cordoba

Human

2008-11-05

C. jejuni

ALDBRS16.0012

Cj102/09

Paraguay

Asuncion

Human

2008-07-14

C. jejuni

ALDBRS16.0013

CjP27/07

Paraguay

Asunción

Human

2007-03-07

C. jejuni

ALDBRS16.0014

CjP43/07

Paraguay

San Lorenzo

Human

2007-05-18

C. jejuni

ALDBRS16.0015

Cj115/06

Argentina

Santa Fe

Human

2006-04-04

C. jejuni

ALDBRS16.0016

Cj115/09

Paraguay

Asuncion

Human

2008-11-07

C. jejuni

ALDBRS16.0017

Cj123/06

Argentina

Santa Fe

Human

2006

C. jejuni

ALDBRS16.0018

Cj26/09

Argentina

Bariloche

Human

2009-01-06

C. jejuni

ALDBRS16.0019

Cj120/08

Argentina

Rosario

Human

2008

C. jejuni

ALDBRS16.0020

Cj38/06

Argentina

Cordoba

Human

2005-09-20

C. jejuni

ALDBRS16.0020

Cj9/07

Argentina

Santa Fe

Human

2007

C. jejuni

ALDBRS16.0020

CjP18/07

Paraguay

Asunción

Human

2007-02-05

C. jejuni

ALDBRS16.0020

Cj81/08

Argentina

Resistencia

Human

2008-08-06

C. jejuni

ALDBRS16.0021

Cj1/09

Argentina

Neuquen

Human

2009-01-05

C. jejuni

ALDBRS16.0022

Cj122/06

Argentina

Neuquen

Human

2006-05-22

C. jejuni

ALDBRS16.0022

Cj3/09

Argentina

Rosario

Human

2009-01-06

C. jejuni

ALDBRS16.0022

Cj39/06

Argentina

Cordoba

Human

2006-09-20

C. jejuni

ALDBRS16.0022

Cj56/08

Argentina

Capital Federal

Human

2008-07-08

C. jejuni

ALDBRS16.0022

Cj72/08

Argentina

Junin

Human

2008-07-29

C. jejuni

ALDBRS16.0022

Cj79/08

Argentina

Resistencia

Human

2008-07-04

C. jejuni

ALDBRS16.0022

CjP32/07

Paraguay

Asunción

Human

2007-03-26

C. jejuni

ALDBRS16.0022

Cj 87/08

Argentina

Lanus

Human

2008-08-21

C. jejuni

ALDBRS16.0023

Cj150/08

Argentina

Gral Pico

Human

2008

C. jejuni

ALDBRS16.0024

CjP31/07

Paraguay

Asunción

Human

2007-03-21

C. jejuni

ALDBRS16.0025

Cj4/07

Argentina

Santa Fe

Human

2007-04-24

C. jejuni

ALDBRS16.0026

Cj53/07

Argentina

Cordoba

Human

2007

C. jejuni

ALDBRS16.0027

Cj109/09

Paraguay

Asuncion

Human

2008-10-01

C. jejuni

ALDBRS16.0028

Cj65/07

Argentina

Santa Fe

Human

2007-12-13

C. jejuni

ALDBRS16.0028

Cj35/06

Argentina

Cordoba

Human

2005-09-05

C. jejuni

ALDBRS16.0029

CjP28/07

Paraguay

Asunción

Human

2007-03-09

C. jejuni

ALDBRS16.0030

Cj40/06

Argentina

Cordoba

Human

2005-09-21

C. jejuni

ALDBRS16.0031

Cj16/06

Argentina

Neuquen

Human

2005-07-21

C. jejuni

ALDBRS16.0031

Cj82/06

Argentina

Santa Fe

Human

2006-01-04

C. jejuni

ALDBRS16.0031

Cj4/09

Argentina

Rosario

Human

2009-01-08

C. jejuni

ALDBRS16.0032

Cj 111/08

Argentina

Cordoba

Human

2008-08-09

C. jejuni

ALDBRS16.0033

Cj25/09

Argentina

Bariloche

Human

2008-12-29

C. jejuni

ALDBRS16.0034

Cj98/09

Paraguay

Asuncion

Human

2008-05-13

C. jejuni

ALDBRS16.0035

C 73/08

Argentina

Neuquen

Human

2008-04-01

C. jejuni

ALDBRS16.0036

-Clusters compartidos entre Argentina y Paraguay, indicados con círculos rojos y las letras Paraguay y con círculo azul el “cluster” F Argentina. ** Perfil electroforético de un aislamiento de C. jejuni recuperado de un caso de SGB

NºPatrón Regional

*

Cluster A

Cluster B

*

Cluster C

*

**

Cluster D

* *

Cluster E

Cluster F

B, C, D y E, círculo verde el “cluster” A de

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES La implementación de la reacción de PCR en el laboratorio para la identificación de Campylobacter spp. y a nivel de especie representa una herramienta diagnóstica y de caracterización genotípica, como ensayo complementario y factible de ser transferible a otros laboratorios. 

 Los niveles de R observados nos alerta sobre el uso de antimicrobianos tanto en humanos como en animales destinados al consumo y nos impulsa a continuar con la vigilancia de la R. Fortalecer e intensificar la investigación de Campylobacter spp en inmunocomprometidos para un tratamiento adecuado. Promover la vigilancia de laboratorio a nivel nacional y regional