Shigella spp. : diagnóstico y caracterización María Rosa Viñas Servicio Enterobacterias INEI-ANLIS “C.G.Malbrán”

Especialización en Bacteriología Clínica – UNNE 12-13 de junio 2015

.

Familia Enterobacteriaceae Género: Escherichia Escherichia coli Escherichia fergusonii Escherichia hermannii Escherichia vulneris Escherichia blattae Género: Shigella Shigella dysenteriae Shigella flexneri Shigella boydii Shigella sonnei

GÉNERO SHIGELLA * Gram negativos, anaerobios facultativos, no esporulados, no móviles de la familia ENTEROBACTERIACEAE, no produce gas a partir de carbohidratos . El género se diferencia en cuatro especies y esta separación se basa en caracteres bioquímicos y antigénicos.

Shigella dysenteriae, serogrupo A: 13 serotipos.(*) Shigella flexneri, serogrupo B: 8 serotipos. (*) Shigella boydii, serogrupo C: 20 serotipos. (*) Shigella sonnei, serogrupo D: 1 serotipo.

(*) La cantidad de serotipos por grupo cambia cuando se definen nuevos

serotipos. (*) En el marco de un grupo de trabajo a nivel internacional se está consensuado la nomenclatura de la nueva variante emergente de S. flexneri

Infección por Shigella spp.
La shigellosis está distribuída en todo el mundo, endémica en

países tropicales y de clima templado incidencia en verano.


Riesgo para viajeros que se trasladan hacia áreas endémicas .
Brotes en condiciones de hacinamiento y falta de saneamiento en cárceles, hospitales psiquiátricos, geriátricos, campamentos y a bordo de embarcaciones.
Shigella: único huésped el ser humano y a los primates.
Se transmite de persona a persona por la vía fecal-oral o por alimentos contaminados, el vector de transmisión son las moscas y/ o aguas estancadas.
Altamente infecciosa por la ruta oral, la ingestión de 10 a 100 organismos.
Shigella no es de notificación obligatoria pero a través del SNVS de Argentina, módulo laboratorio SIVILA, permite una vigilancia del mo.

La mayor parte de los casos positivos para diarreas bacterianas se debieron a Shigella (4116) con predominio de S. flexneri , seguido por Salmonella , Escherichia coli . SIVILA 2014

SHIGELLOSIS – PRESENTACION CLINICA
Diarrea acuosa asociada con vómitos y deshidratación leve a moderada.
Disentería caracterizada por pequeños volúmenes de materia fecal con sangre, mucus y dolor abdominal. Disentería: consecuencia de la invasión de la mucosa colónica, multiplicación y muerte celular, inflamación y ulceración de la mucosa con la consiguiente aparición de sangre en materia fecal.


Complicaciones posteriores a una Shigellosis :

bacteriemia, convulsiones y problemas neurológicos, artritis reactiva ( pacientes inmunocomprometidos, niños y ancianos) .


Infección por Sh. dysenteriae serotipo 1: tasa de letalidad del 20% causando las más severas disenterías debido a su potente toxina Shiga , exotoxina termolábil que afecta el intestino y el SNC, y contribuir a la gravedad extrema de la infección.

U1

INVASION POR SHIGELLA

GENE GLOBE PATHWAYS

Diapositiva 7 U1

Usuario, 28/08/2014

FLUJOGRAMA PARA EL AISLAMIENTO DE Shigella (Muestra clínica) MUESTRA (Hisopo en Cary Blair)

Observación en fresco

Coloración de Gram

Suspensión salina

MacConkey, EMB, SS, Hektoen, XLD

Colonias típicas

TSA

P. Bioquímicas

TSI

Serotipificación

LIA

• El género Shigella es un género bioquimicamente poco reactivo; presenta las propiedades indicadas en TABLA IV. Las placas de medio selectivos y diferenciales : agar McConkey y agar EMB a 37ºC, 18 a 24 horas. Las colonias características, se siembran en estría de TSA , TSI y LIA, a 37ºC , 18 a 24 hs. •TSI: -K/A, LIA: -K/A pruebas mínimas Prueba Bioquimica

Shigella spp.

SH2

-

Glucosa (gas)

-

Glucosa (ácido)

+

Movilidad

-

Citrato Simmons

-

Adonita (fermentación)

-

Malonato (utilización)

-

Voges-Proskauer

-

Arginina dehidrolasa

-

Lisina decarboxilasa

-

Ornitina decarboxilasa

-ó +

Salicina (fermentación)

-

Lactosa (fermentación)

-

Urea (hidrólisis)

-

Sacarosa (fermentación)

-

Xilosa (fermentación)

-

Fenilalanina deaminasa

-

Inosita (fermentación)

-

Rojo de metilo

+

+ 90% o más en 1-2 días; - + 90% o más en 1-2 días

(S. sonnei)

ATIPIAS 



TSI alcalino/ácido sin gas, LIA alcalino/ácido, SIM (- v -), acetato negativo, urea negativa. Serología para Shigella: pobre o negativa; estos cultivos se deben calentar a 100º C. TSI alcalino/ácido con gas, LIA alcalino/ácido, SIM (- - -), acetato negativo, urea negativa. Se debe realizar serología para Shigella, porque hay ciertos serotipos de Sh. dysenteriae, Sh flexneri y Sh. boydii que pueden producir gas a partir de glucosa.

 Shigella sonnei ONPG negativas, lactosa -

TABLA . Caracteres Bioquímicos Diferenciales entre especies de Shigella

Especie

• •

D-Manitol

ONPG

Ornitina decarboxilasa

*Sh. dysenteriae

-

-

-

**Sh. flexneri

+

-

-

***Sh. sonnei

+

+

+

Sh. boydii

+

-

-

S. dysenteriae 1 son ONPG +, ** S. flexneri fermenta manitol, excepciones: S. flexneri 4 y 6 variedades S. flexneri manitol-negativo , *** S. sonnei ONPG – Utilización de Azúcares, pruebas orientativas para la diferenciación a nivel de especie de Shigella : Dulcita, Xilosa, Ramnosa, Rafinosa y Glicerol (Tabla con % ) Ej. S. boydii utiliza xilosa ó ducitol, glicerol , S sonnei utiliza rafinosa , rhamnosa, permite diferenciar de otros subgrupos ó especies

TABLA . Caracteres Bioquímicos Diferenciales entre Shigella y E. coli. Prueba Bioquímica Indol

Shigella

Escherichia coli

-o+

+

-

+, (+), -

-o+

+, (+), -

Arginina dehidrolasa

- , +, (+)

(+), +, -

Mucato (utilización)

-

+

Acetato (utilización)

-

+ , (+)

Citrato Christensen

-

+, (+), -

Glucosa (gas)

-

+

Lactosa (fermentación)

- , (+)

+

Sacarosa (fermentación)

- , (+)

+, (+), -

Salicina (fermentación)

-

+, (+), -

Movilidad

-

+ó-

Lisina decarboxilasa Ornitina decarboxilasa

+ 90% o más en 1-2 días; (+) luego de 3 o más días; - 90% o más, + o – mayoría de cepas positiva, - o + mayoría de cepas negativa

Edwards and Ewing´s Identification of Enterobacteriaceae”, 4th. Edition

* Las pruebas del acetato y mucato tienen considerable valor para diferenciar ambos géneros: Prueba Bioquímica

*Shigella

Escherichia coli

**Escherichia coli inmóvil

Acetato (utilización)

-

+

+ ó -

Mucato (utilización)

-

+

+ ó -

Glucosa c/gas

-

+

-

-, -, -

-,+, +

- ,+, - ó -, -, -

-

- ó+

+ó -

SIM Citrato Christensen

+ : 90% o más en 1-2 días; - : 90% o más, + o – mayoría de cepas positiva, - o + mayoría de cepas negativa *S. flexneri 4: suele utilizar acetato como fuente de carbono positivo 2-7 días reacción débil (confirmar por PCR) ** biotipos E.coli no móviles anaerógenos, lactosa - en TSI : K/A similar a Shigella

FIGURA Flujograma de Serotipificación para

Shigella spp.

Cepa con características bioquímicas deShigella Estria en TSA Aglutinación con solución fisiológica Negativa

Positiva

Aglutinación con OShB Negativa

Positiva

Cepa rugosa Sh. flexneri(se prueban serotipos 1 a 6)

Aglutinación con OShD Negativa

Positiva

Sh. sonnei

Aglutinación con OShC Negativa

Positiva

Sh. boydii(se prueban serotipos indol + y- -

Aglutinación con OShA Negativa Calentar (ver pág.13)

Positiva

PCR Múltiple para S. flexneri

Sh. dysenteriae(se prueban serotipos indol + y-




Shigella spp.: primer agente de origen bacteriano por SIVILA y asociado a brotes comunitarios.


Mejorar la detección de fuente de infección con técnicas sensibles y/ó medidas oportunas .
En el marco de la RND * Uso del antisuero AA479 como screening de este nuevo subserotipo de S. flexneri cuya sero -prevalencia aumentó en el país en los últimos años.

Vigilancia desde el LRN: S. flexneri atípicas (no tipables): 1,7% en 2008 y 16% en 2009, reconocidos por 1ra vez en tres provincias (N, RN y La Pampa) y luego en el resto del país alcanzando un 30,4% en 2010. Distribución de serotipos de S. flexneri LNR, Enero 2007 a Diciembre 2010 N Aislamientos de Shigella flexneri

Serotipos de S. flexneri

400

S. flexneri atípicas

300

S. flexneri 2

200

S. flexneri 3

100

S. flexneri 1 S. flexneri 6

0 2007

2008

2009

2010

S. flexneri 4, 5, X e Y

 Caracterizar feno-genotípicamente una selección de aislamientos de S.flexneri atípicos emergentes en Argentina y estudiar el comportamiento epidemiológico de esta variante desde su reconocimiento en el país.

S. flexneri atípicas – análisis PFGE PFGE- NotI: relación genética de aislamientos de S. flexneri atípicos y cepas de serotipos variantes X, Y and tipo 4. Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

100

90

PFGE-NotI 80

70

PFGE-NotI

Isolate serotype

State

Isolate Date

NotI-PFGE pattern S. flexneri

SF461/10

Jujuy

2010-01-04

ARJZXN11.0019

Atypical

SF478/09

Neuquén

2009-07-01

ARJZXN11.0019

Atypical

SF564/09

Neuquén

2009

ARJZXN11.0019

Atypical

SF66/10

Jujuy

2009-11-20

ARJZXN11.0019

Atypical

SF1241/10 Salta

2010

ARJZXN11.0022

Atypical

SF412/09

2009

ARJZXN11.0012

Atypical

SF1460/10 Río Negro

2010-04-10

ARJZXN11.0028

Atypical

SF612/10

Río Negro

2010-02-09

ARJZXN11.0028

Atypical

SF617/10

Río Negro

2010-02-13

ARJZXN11.0028

Atypical

SF493/09

Neuquén

2009-07-01

ARJZXN11.0010

Atypical

SF479/09

Neuquén

2009

ARJZXN11.0006

Atypical

SF571/09

Neuquén

2009

ARJZXN11.0007

Atypical

SF2080/09 Neuquén

2009

ARJZXN11.0033

Atypical

Neuquén

SF730/09

Río Negro

2009-07-01

ARJZXN11.0026

SFB67X-1

ND

ND

ARJZXN11.0084

SF1004/09 Tucumán

2009-07-01

ARJZXN11.0045

Atypical

SF465/10

Jujuy

2010-05-05

ARJZXN11.0024

Atypical

SF294/09

Buenos Aires

2009

ARJZXN11.0080

Atypical

SF743/09

La Pampa

2009-07-01

ARJZXN11.0039

Atypical

SFB4a-1

ND

ND

ARJZXN11.0054

4a

SF472/09

La Pampa

SFB69Y-1

ND

ND

SF2029/09 Río Negro SFB4a-6

ND

SF1944/06 . CABA

* Shigella flexneri nomenclature updated. August, 2014

X variant X variant

ARJZXN11.0046

Y variant

ARJZXN11.0072

Y variant

ARJZXN11.0133

Y variant

ND

ARJZXN11.0044

4a

2006

ARJZXN11.0136

4a

m5 Caracterización m6

feno-genotípica de una selección de S. flexneri atípicas? Car. genotípica PCR Caracterización fenotípica Study of agglutination assay with:

S. flexneri Serotype 4a

Typing S. flexneri IV sera (INPB)

Typing S. flexneri IV sera (DS)

Grouping

+

+

+

3,4 sera (INPB & DS)

Grouping 6 sera (INPB & DS)

Grouping 7,8 sera (INPB & DS)

AA479 antisera

MASF IV-1 antisera

-

-

-

-

4a

+

+

+

-

-

-

-

4a

+

+

+

-

-

-

-

Y

-

-

+

-

-

-

-

Y

-

-

+

-

-

-

NR

Y

-

-

+

-

-

-

-

X

-

-

-

-

+

-

-

X

-

-

-

-

+

-

-

“atypical”

-

+

-

-

+

+

NR

“atypical”

-

+

-

-

+

+

+

“atypical”

-

+

-

-

+

+

NR

“atypical”

-

+

-

-

+

+

+

“atypical”

-

+

-

-

+

+

+

“atypical”

-

+

-

-

+

+

+

“atypical”

-

+

-

-

+

+

NR

“atypical”

-

+

-

-

+

+

NR

“atypical”

-

+

-

-

+

+

NR

“atypical”

-

+

-

-

+

+

NR

“atypical”

-

+

-

-

+

+

+

“atypical”

-

+

-

-

+

+

+

“atypical”

-

+

-

-

+

+

+

“atypical”

-

+

-

-

+

+

+

“atypical”

-

+

-

-

+

+

NR

“atypical”

-

+

-

-

+

+

+

“atypical”

-

+

-

-

+

+

NR

Results of PCR a ssays

Biochemical assays:

Resistant to:

Acetate / mannitol / Indol

AMP-SXT

gtrIV

gtrX

set1-B

-/+/-/+/+/-/+ -/+/-/+/-/+/-/+/-/+/-/+/-/+/-/+/+ -/+/-/+/+ -/+/+ -/+/-/+/-/+/-/+/-/+/-/+/-/+/-/+/-/+/-/+/-/+/-

S/S

+

-

-

-

S/S

+

-

-

+

R/R

+

-

-

+

S/S

-

-

+

+

S/R

-

-

+

+

S/S

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

S/S

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

R/R

-

+

R/R

+

NR: no determinado Mab MASF IV-1, Dr Kaisar Talukder, icddr,Bangladesh

sen

-

-

-

+

-

+

-

-

-

+

-

+

-

+

-

+

-

-

-

+

-

+

-

+

-

+

-

+

-

+

-

+

-

+

-

+

-

+

-

+

Diapositiva 18 m5

mpichel, 03/06/2013

m6

mpichel, 03/06/2013

Bases de la seroconversión en S. flexneri para diseño de PCR  La adición de residuos glucosil, acetil o fosfoetanolamina a los ázúcares del antígeno-O resulta en determinantes antigénicos:  de “tipo” (I, II, III, IV, V,VI) específicos de un serotipo  de “grupo” (3,4; 6; 7,8; E1037) pueden estar presentes en mas de un serotipo.

* En su conjunto definen un serotipo y subserotipo

Gwen E. Allison and Naresh K. Verma, 2000, Trends in Microbiology

Serotipificación molecular: *Validación PCR Múltiple, con grupo colaborativo de trabajo compuesto por 5 laboratorios de referencia (USA, Inglaterra, Bangladesh, China, Hong Kong y Argentina). Set de muestras ensayadas incluyó aislamientos de distintas regiones y autóctonos de cada país. PCR múltiple para la identificación de todos los serotipos descriptos al 2014, incluyendo la variante de S. flexneri X (AA479)

Ye et al, JCM, 2012

Desde el LRN: Flujograma de PCR múltiple para serotipos de Sh. flexneri ( en desarrollo y validación ) PCR 1: a) Primer MIX 1: Contentración Target gene

Amplicon size (bp) en la Mix de primers

Concentración en la Serotype specificity reacción

wzx1-5

782

2 µM

0.2 µM

Todos excepto 6

gtrI

1122

2 µM

0.2 µM

1a, 1b, 1c

gtrII

1272

2 µM

0.2 µM

2a, 2b

oac

604

2 µM

0.2 µM

1b, 3a, 3b, 4b

gtrIV

378

2 µM

0.2 µM

4a, 4av, 4b

gtrV

905

2 µM

0.2 µM

5a, 5b

PCR 2: b) Primer MIX 2: Target gene

Amplicon size (bp)

Contentración en la Mix de primers

Concentración en la reacción

Serotype specificity

gtrX

425

2 µM

0.2 µM

2b, 3a, 5b, X, Xv

gtrIC

518

2 µM

0.2 µM

1C (propuesto como serotipo 7)

lpt-O

1098

4 µM

0.4 µM

Xv,Yv,4av

 PCR como técnica alternativa al flujograma diagnóstico de Shigella flexneri

Validación intralaboratorio con cepas controles y autóctonas recibidas en el LRN

Implementación de PCR Múltiple para Shigella flexneri

PCR 1

gtrII 1272 pb oac 604 pb gtrIV 378 pb

PCR 2

gtrI 1122 pb gtrV 905 pb Wzx 1-5 782 pb

lpt-O 1098 pb gtrIC 518 pb gtrX 425 pb

M marcador de peso molecular 100 pb

Cepas control para PCR Múltiple para S. flexneri (validación interlaboratorio) PCR 1 (arriba) y PCR 2 (abajo) Calle 2

S. flexneri 1b CDC_China 45

gtrI, wzx1-5, oac

Amplicons sizes (bp) 1222, 782, 604

3

S. flexneri 2b CDC_China 46

gtrII, wzx1-5, gtrX

1272, 782, 425

4

S. flexneri 4b CDC_China 47

wzx1-5, gtrIV, oac

782, 604, 378

5

gtrV, wzx1-5, oac

905, 782, 604

lpt-O, wzx1-5, gtrX,

1098, 782, 425

8

S. flexneri 5a CDC_China 48 S. flexneri CDC_China 49 Xv S. flexneri Ic HPA, UK_1C

gtrI, wzx1-5, gtrIC

1122, 782, 518

9

S. flexneri 6

wzx6

739

7

Strain

Controles

CDC_China 50

Genes

 Estudios epidemiológicos señalan al agua como fuente de infección, vegetales crudos, frutas, mariscos , manipulador de alimentos, etc. Sobrevida en el agua es limitada (horas a días) , depende de la cantidad de contaminación, temperatura del agua (susceptible a clorinación, luz UV )

Requerimiento de Técnicas sensibles para la detección en muestras de agua

Métodos rápidos: Ensayos de PCR estandarizados para Shigella spp. para muestras Nombre de la Técnica

Blanco

Método

PCR simple Prueba de tamizaje

PCR Shigella spp. / EIEC (E. coli enteroinvasivo)

ipaH ( Antígeno plasmídico de invasión) (Hartman et al,1990)

Tipo de muestra

Requerimientos. Especificidad / Tiempo de Sensibilidad procesamiento Muestras de agua y Detección en E: Shigella spp. cepa aislada muestras de agua a /EIEC partir de caldo de enriquecimiento GN, luego de 18 h de incubación a 37°C Detección preliminar del aislamiento a partir de TSA, luego de 24 h de incubación a 37°C



PCR a partir de caldo GN el gen ipaH

* codifica una proteína involucrada en el proceso de invasión de las células epiteliales y está presente en varias copias en el plásmido de 140 MDa de Shigella spp. y a nivel cromosomal, presente en aislamientos de E. coli enteroinvasivo (EIEC)

1

2

3

4

5

6

7

8

9 10 11 12 13 14 M

ipaH 619 pb

Fig 1. Gel de electroforesis de PCR ipaH a partir de caldo de enriquecimiento de muestras de agua inoculadas experimentalmente. Calle 1: agua sin inocular, Calle 2: 1- 10UFC (fallo amplificación, pero en este punto tuvimos problemas con el filtro y perdimos muestra), Calle 3: 10-100 UFC, Calle 4: 100-1000 UFC, Calle 5: Shigella flexneri 4a (1944/06), cepa Control positivo , Calle 6: agua sin inocular , Calle 7: 1- 10UFC con tritón (fallo amplificación), Calle 8: 10-100 UFC con tritón, Calle 9: 100-1000 UFC con tritón, Calle 10: Shigella flexneri 4a (1944/06), cepa Control positivo., Calle 11: Shigella flexneri, cepa control positivo, Calle12: Shigella flexneri, cepa Control positivo, Calle13: Shigella flexneri, cepa control positivo, Calle 14: Control de reactivos

* Se notificaron al LRN 2009 al 2014:

• Brotes: 17 de Shigella sonnei y 14 de Shigella flexneri

• De los brotes estudiados se recuperó de: crema de almendras y se sospechó de agua de red, verdura entre otros.

• 2009

Se implementó un estudio prospectivo para detección temprana de brotes en colaboración con la Univ de Harvard, USA (Proyecto MIDAS) en seis provincias de la región centro-sur.

* En Desarrollo y proyectos futuros La transferencia en el marco de la RND de una PCR validada para serotipificación molecular de Shigella flexneri ( 2, 1, 3, 4, 5 y 6 ,variante X e Y ;inclusive plásmido gen lpt-O; S. flexneri AA479).



Incorporación de S. flexneri atípica en la taxonomía con una nueva nomenclatura según consenso a nivel internacional: Shigella flexneri nomenclature updated. Scheme for serotypes designation based on the use of monoclonal and polyclonal antisera and PCR. Proposals of Dr. Kaisar, Dr. Xu and Dr. Sun to be discussed by the working group Aug, 2014

Shigella flexneri Xb?  Secuenciación de nuevas variantes emergentes

 Los aislamientos presentaron un perfil fenotípico atípico para S. sonnei,

negativos para la prueba de ONPG (o-nitrofenil-β-D-galactopiranósido) Shigella sonnei, recuperados de Febrero y Marzo del 2013 en la ciudad de Trelew, provincia de Chubut. PF GE-Xb aI 1 00

90

PFGE-XbaI

Nº aislamiento

Origen

Fecha aislamiento

Sexo

Nº patrón

Tipificación

SS418/13 Stool

Hum an

2 013-03- 03

MAL E

3

AR J16 X01.0078

B gal (-)

SS419/13 Stool

Hum an

2 013-03- 04

MAL E

2

AR J16 X01.0078

B gal (-)

SS200/13 Stool

Hum an

2 013-03- 16

FEM ALE

2

AR J16 X01.0047

B gal (-)

SS202/13 Stool

Hum an

2 013-02- 13

MAL E

2

AR J16 X01.0047

B gal (-)

SS206/13 Stool

Hum an

2 013-02- 17

MAL E

4

AR J16 X01.0047

B gal (-)

SS207/13 Stool

Hum an

2 013-02- 19

MAL E

7

AR J16 X01.0047

B gal (-)

SS413/13 Stool

Hum an

2 013-02- 25

MAL E

4

AR J16 X01.0047

B gal (-)

SS414/13 Stool

Hum an

2 013-02- 27

MAL E

8

AR J16 X01.0047

B gal (-)

SS415/13 Stool

Hum an

2 013-02- 28

MAL E

5

AR J16 X01.0047

B gal (-)

SS416/13 Stool

Hum an

2 013-02- 28

MAL E

7

AR J16 X01.0047

B gal (-)

SS417/13 Stool

Hum an

2 013-03- 01

MAL E

8

AR J16 X01.0047

B gal (-)

SS424/13 Stool

Hum an

2 013-03- 12

FEM ALE

8

AR J16 X01.0047

B gal (-)

SS425/13 Stool

Hum an

2 013-03- 13

MAL E

6

AR J16 X01.0047

B gal (-)

SS426/13 Stool

Hum an

2 013-03- 16

FEM ALE

12

AR J16 X01.0047

B gal (-)

SS420/13 Stool

Hum an

2 013-03- 04

FEM ALE

5

AR J16 X01.0406

B gal (-)

SS204/13 Stool

Hum an

2 013-02- 15

FEM ALE

4

AR J16 X01.0408

B gal (-)

SS423/13 Stool

Hum an

2 013-03- 09

MAL E

11

AR J16 X01.0407

B gal (-)

Figura 1. Dendograma de relación genética de aislamientos de S. sonnei ONPG (neg) de origen humano recuperados en Trelew en febrero y marzo de 2013. Se recuadran los aislamientos con el mismo patrón de PFGE. PFGE con XbaI.  El patrón ARJ16XO1.0047,

14% de frecuencia en la BDN, subtipo genético que incluyó aisl. de distintas provincias del país y de distintos años, entre ellas Catamarca 2012; Buenos Aires 2008,2011 y 2012; Córdoba 2010 y 2012; La Pampa 2009; Neuquén 2009; Salta 2005; Jujuy 2011 y Río Negro 2009.

 S. sonnei asociados a un brote familiar:  PFGE demostró la relación genética entre los aislamientos, confirmó el estudio epidemiológico que evidenció la exposición de los pacientes a una misma fuente de infección: 

Aislamiento de la cubierta de crema de almendras (una rosca vienesa de elaboración artesanal) PP FG E-B lnI ba I FG E -X

Nº aislamiento Ciudad

Origen

F. aislamiento

Patrón XbaI

S S 1 3 92 /12

Lu ja n

H u ma n 2 01 2 -0 7 -0 9

A R J 1 6X 01 .03 7 0

S S 1 3 93 /12

Lu ja n

H u ma n 2 01 2 -0 7 -0 9

A R J 1 6X 01 .03 7 0

S S 1 3 94 /12

Lu ja n

H u ma n 2 01 2 -0 7 -1 2

A R J 1 6X 01 .03 7 0

S S 1 3 95 /12

Lu ja n

H u ma n 2 01 2 -0 7 -1 2

A R J 1 6X 01 .03 7 0

S S 1 3 96 /12

Lu ja n

H u ma n 2 01 2 -0 7 -1 2

A R J 1 6X 01 .03 7 0

S S 1 3 97 /12

Lu ja n

Fo o d

A R J 1 6X 01 .03 7 0

2 01 2 -0 7 -0 8

Figura 1. Dendograma de relación genética de aislamientos de S. sonnei recuperados en Luján en julio

de 2012 con XbaI. Todos los aislamientos mostraron 100% de similitud.

Esto fue posible por la oportunidad en la investigación del brote y en la toma de muestras

Figure . Dendrogram showing the genetic relatedness of S. sonnei SXT resistant isolates included in the Event 7.

Evento en la comunidad

Figure 3. Dendrogram showing the genetic relatedness of S. sonnei SXT resistant isolates included in the Event 7. Isolates recovered in Santa Rosa, La Pampa in January – February 2010. The rectangle highlights the 7 S. sonnei isolates with an indistinguishable PFGE pattern which had not previously been recorded in the National Data Base (NDB). The remaining 7 isolates identified statistically and epidemiologically as part of Event 7, exhibited high genetic relatedness (from 91.4 to 97.4% similarity, 1 to 3 bands of difference) to the most frequent pattern within the event, confirming the relation of the cases. http://www.plosntd.org/article/info:doi/10.1371/journal.pntd.0002521