La colonización es mas frecuente y persistente en niños (20-40%) que en adultos (10%).

La colonización de mucosa de vía aérea superior es asintomática. La enfermedad neumocócica comienza con el establecimiento del estado de portador. La transmisión persona-persona ocurre a través del contacto directo con las secreciones de un paciente colonizado.










Incidencia enfermedad invasiva por S. pneumoniae es mayor en los extremos de la vida Mayor riesgo: esplenectomizados, déficit de complemento, tratamiento inmunosupresor, diabetes, malnutrición y alcoholismo. Mortalidad meningitis neumococica 20% con elevado riesgo de secuelas neurológicas.

La colonización induce respuesta inmune de bajo nivel. Capsula

Previene la adherencia al mucus nasal, permitiendo la llegada a la superficie epitelial. Previene la opsonofagocitosis.

Adhesinas

CbpA, PavA, Eno

.

Neuraminidasas escinde el acido siálico Neuraminidasas: terminal de los glicanos de superficie. Esto cambia los patrones de glicosilación del huésped, expone mas la superficie de las células del huésped, revela receptores de superficie favoreciendo la adhesión adhesión.

Nature 2008 Vol 4; 288-301

Autolisina: Autolisina Se encuentra en la pared celular. Degrada peptidoglicanos de pared celular bacteriana produciendo la lisis bacteriana. bacteriana Interviene en el crecimiento de la pared celular bacteriana. Produce la liberación de componentes de la pared (altamente inflamatorios). Libera proteínas citoplasmáticas incluyendo factores de virulencia como neumolisina.

Neumolisina: Neumolisina Proteína citoplasmática Principal exotoxina Efecto citotóxico a través de formación poros en la membrana de la célula blanco. Inhibe el movimiento ciliar de células cilíndricas ciliadas, aumenta adherencia Inducción de síntesis de citoquinas. Activación y quimiotaxis de células CD4. Rompe la continuidad de los capilares pulmonares. Nature 2008 Vol 4; 288-301 MMBR 2001 Vol 65 Nº2 187-207

BHE regula el pasaje de moléculas dentro y fuera del cerebro y lo preserva de la entrada de micoorganismos. S. peumoniae atraviesa la BHE sin dejar evidencia de disrupción de las unión intercelulares

Alcanza el espacio subaracnoideo, se replica Aumenta la permeabildad de BHE Edema cerebral e hipertensión endocraneana

Apoptosis neuronal, procesos isquémicos, lesión cerebral, muerte

Desencadena respuesta inflamatoria en el huésped. Se liberan citoquinas y gran numero de mediadores de inflamación.

Arq Neuropsiquiatr 2012; 70(5):366-372

Colonia α hemolítica

Sensibilidad a optoquina (5µg - 6mm)

≥ 14mm

≤ 8 mm

13-9 mm Solubilidad en bilis

Aislamiento soluble

Aislamiento No soluble

S. pneumoniae

No S. pneumoniae Manual de Laboratorio para la Identificación y Prueba de Susceptibilidad a los Antimicrobianos. WHO 2004








Discos comerciales 5 µ (clorhidrato de etilhidrocupreina) Agar sangre de carnero Incubacion 35 C 5% CO2. Zona de inhibición ≥ 14mm S. pneumoniae Control de calidad S. pneumoniae ATCC 40619 E. faecalis ATCC 29212

Todos los S. penumoniae son S a optoquina?

1375 aislamientos sitios estériles niños Argentina periodo 1995-2004 8 aislamientos Opto R Mutaciones puntuales en los genes atpAC que codifican subunidades a y c de la ATP asa Mutaciones puntuales que no producen alteraciones fisiológicas, mantienen la virulencia y no son seleccionadas por tratamiento antibiótico

Método en tubo Suspension 1 Mc Farland en Sol Fisiol del microorganismo Fraccionar en dos tubos de hemólisis (0,5 ml por tubo) Tubo control con igual volumen de sol fisiol. Igual volumen de desoxicolato de Na en el tubo prueba Incubar 3 horas a 35 C. controlar cada hora Prueba +: Acalaramiento de la solución que contiene bilis Prueba no valida: aclaramiento de ambos tubos. Contaminación con EDTA u otro agente activador de la autolisina Falso -: a pH ácido puede precipitar desoxicolato de Na

Método en placa

Placa de 24 hs con colonias del microorganismo a ensayar Solución al 10% de desoxicolato de Na pH 7 Incubar 15 minutos a 35 C No agitar la placa y mantener a nivel Prueba +: Achatamiento o desaparición de la colonia




Union del polisacárido capsular con el antisuero específico produce un cambio en el índice de refracción que hace mas visible la cápsula. Produce el efecto visual de hinchamiento capsular. Procedimiento •1 gota (cultivo, suspensión, líquido biológico) •1 ansada de antisuero. Mezclar •1 ansada de solución acuosa de azul de metileno, mezclar •Colocar cubreobjetos •Esperar 10 minutos •Examinar con objetivo de inmersión (100x)

Manual of Clinical Microbiology 5th ed.

Serotipos mas frecuentes en Argentina 14, 5,1, 6A/6B, 7F, 9V, 19A, 19F, 18C,23F

0 – 5 años

> 5 años

Informe Regional SIREVA II 2011, OPS

NT

Otros

23A

17F

15A

12F

11A

10A

9N

9A

8

6C

33F

22F

23F

19F

19A

18C

14

9V

7F

6B

6A

5

4

3

1

Serotipos S. pneumoniae SIREVA 2011

90

80

70

60

50

40

30

20

10

0

1286 aislamientos de S. pneumoniae en niños < 6 años, 2008-2011

Fossati S y col. SADEBAC 2012











Binax NOW inmunocromatografía que detecta Polisacárido capsular C (común a todos los serotipos de S. pneumoniae, S. mitis y S. oralis.). Utiliza Ac marcados con Ag coloidal. Se visualiza a través de una reacción colorimétrica. Los antígenos microbianos están mas concentrados en orina que en otros líquidos biológicos LCR.

LCR Sensibilidad 97% Especificidad 99%.

Resultado positivo: línea muestra y control son detectadas visualmente. Resultado negativo: solo se detecta la línea control.

LCR Conservación: 24 hs a TA •1 semana 2-8˚C or - 20˚C

Informe Regional SIREVA II 2011, OPS

Informe Regional SIREVA II 2011, OPS

Resistencia a penicilina PBP de baja afinidad 1a, 2x, 2b Resistencia a cefalosporinas de tercera generación Alteración de PBP 1a y 2x PBP 1a es fundamental para el alto nivel de resistencia a penicilina

Test de difusion : disco de Oxacilina 1ug.

CIM CIM: Gold Standard para caracterizar el nivel de resistencia a penicilina.

Excelente predictor de Sensibilidad a PEN OXA ≥ 20 mm CIM PEN ≤ 0,06 µg/ml


Es muy sensible para la detección de PEN I-R, pero no puede categorizar el nivel de R. OXA ≤ 19 mm No diferencia entre I o R PEN ni los S con punto de corte de no meningitis. Por lo tanto: tiene baja especificidad. Falsa resistencia 1-9%


Disco de oxacilina 1 µ

Halo de inhibición ≥ 20 mm

Halo de inhibición ≤ 19mm

Sensible a Penicilina

Realizar CIM a Penicilina y Ceftriaxona







Difusión: Agar MH 5% sangre de carnero Inoculo suspensión 0.5 Mc Farland Condiciones de incubación: 35 2 C 5% CO2 20-24hs Control de calidad S. pneumoniae ATCC 49619

Método patrón: microdilución en caldo. E-test: es simple y los resultados obtenidos son confiables

Antibiotico

S

Penicilina parenteral

≤0,06

CTX/CRO

≤0,5

I

R ≥0,12

1

≥2

Manual de Laboratorio para la Identificación y Prueba de Susceptibilidad a los Antimicrobianos de Patógenos Bacterianos de Importancia para la Salud Pública en el Mundo en Desarrollo. OMS-CDC