HEMOGRAMA MANUAL Bqco. Gonzalo A Ojeda Cátedra Hematología Clínica Fa.C.E.N.A-U.N.N.E 2012

Definición ES EL ESTUDIO CUALI Y CUANTITATIVO DE LOS ELEMENTOS CORPUSCULARES DE LA SANGRE CUANTITATIVO : Recuento de GR, GB Dosaje de Hb Índices Hematimétricos ( VCM, HCM, CHCM ) Fórmula Leucocitaria CUALITATIVO : Fórmula Leucocitaria Estudio Morfológico de la Serie Roja, Serie Blanca y Pq

Determinaciones Adicionales RECUENTO DE Pq

Reticulocitos VSG

ETAPA Pre-ANALÍTICA 

Condiciones del Paciente



Tipo y Toma de Muestra

Condiciones del Paciente NO NECESITA ESTAR ESTRICTAMENTE EN AYUNAS (se sugiere al menos 2 h).  NO HABER REALIZADO ACTIVIDAD FÍSICA INTENSA  PERMANECER PREFERENTEMENTE SENTADO DURANTE LA EXTRACCION 

DATOS A TENER EN CUENTA

EDAD DX. PRESUNTIVO  SEXO 

REFERENTE A LA MUESTRA TIPO DE MUESTRA -VENOSA 

-CAPILAR -ARTERIAL??

PUNCION VENOSA

VENTAJAS -Técnica rápida y segura -Permite obtener volúmenes adecuados para las demás determinaciones. -Permite repetir el análisis en caso de dudas. -Reduce los posibles errores de la punción capilar.

DESVENTAJAS -Resultados erróneos por hemoconcentración (torniquete prolongado) -Hematomas y dolor (extracción dificultosa) -No se recomienda en neonatos o pacientes quemados. -Paciente Oncológicos

PUNCION CAPILAR

VENTAJAS -Resulta sencillo para neonatos y niños -Se puede realizar más de una vez en pacientes especiales (quemados, oncológicos, etc) -Útil en pacientes con patologías Hemorrágicas.

DESVENTAJAS -Recuentos erróneos por hemoconcentración o hemodilución -Dificultad para obtener flujo continuo. -Recuentos de Pq disminuidos, coagulación. -Errores por contaminación -Paciente Oncológicos

ANTICOAGULANTES 

SALES DE EDTA :(Na2 o K3) Forman complejos con el Ca++, efectivo en pequeñas cc, no necesita ser evaporado (Posible error por dilución a tener en cuenta) 0.01mL (10 µL) sirven para anticoagular hasta 2,5 mL de sangre LA RELACION NORMALMENTE USADA ES 10 µL más 1 mL de sangre (1:100) PERMITE CONSERVAR EN HELADERA LAS MUESTRAS HASTA 48h SIN ALTERAR LOS VALORES



MEZCLAS DE OXALATOS DE AMONIO Y POTASIO ( MEZCLA DE WINTROBE) Actúa precipitando el Ca²+ Proporción 1/10 (0.5 mL ACG EVAPORADO a 37 + 5 mL sangre)



HEPARINA: Actúa neutralizando la trombina. Proporción 10-50 UI/mL sangre. (COLORACIÓN)

Obtenida la muestra 

HOMOGENEIZAR !!!!! LENTA Y REPETIDAS VECES



ANTES DE PROCESAR : HOMOGENEIZAR LENTA Y REPETIDAS VECES!!!

ETAPA ANALÍTICA RECUENTOS DE GB , GR y Plq  Hematocrito  Dosaje de Hb  Fórmula Leucocitaria 

RECUENTO DE GB DILUYENTE: LIQUIDO DE TURK -Acido acético glacial (20 mL) -Cristal Violeta 1% (10 mL) -Levar a 1000 mL con agua destilada  Dilución : 1/20 380 µL + 20 µL muestra 

Muestra Secar con papel el dispositivo de cargado

Homogeneizar Por agitación

RECUENTO DE GB CAMARA DE NEUBAUER

PIPETAS

CAMARA DE NEUBAUER Se trata de un portaobjetos con una

depresión en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre dos líneas consecutivas de 0.25 mm. Así pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 mm². La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1 mm, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 mm³.

Aumento 10X

Aumento 10x

Consideraciones prácticas 



  

PARA CARGAR LA CAMARA : SE COLOCA EL CUBRE OBJETO Y ACERCANDO LA PUNTA DE LA PIPETA O EL CAPILAR SE LLENA POR CAPILARIDAD EL LLENADO DEBE HACERCE DE UNA SOLA VEZ SIN QUE QUEDEN BURBUJAS, NI LÍQUIDOS EXEDENTES ALREDEDOR DEL CAMPO NO BALANCEARLA AL ACERCAR AL MO PARA DISTINGUIR DE BASURAS MOVER EL TORNILLO MICROMETRICO. NO DEMORARSE









Elementos contados 4 mm² X 1mm² X N/4 Dado que el espesor de la cámara es 0.1 mm, para expresar el número de elementos por mm³ deberemos multiplicar el valor X por 10. X= (N/4) X 10 Como se ha efectuado una dilución de 1/20, debemos multiplicar por la dilución, es decir: X= Nx10x20= N x 50= Nº de GB/mm³ 4 Según el ICSH, debe expresarse este resultado en Nº de GB. 10x9/l

Cálculos

Valores de Referencia ADULTOS : 5000 a 10.000 GB / mm³  NIÑOS - RN : 12.000 a 25.000 GB / mm³ - Hasta 1 año : 6000 a 18.000 GB / mm³ - 3 a 6 años : 5000 a 15.000 GB / mm³ - 6 a 12 años: 4500 a 13.500 GB / mm³ 

CAUSAS DE ERROR              

DEL MATERIAL CUBREOBJETOS MAL COLOCADO SUCIEDAD ,LEVADURAS EN EL LIQUDO DE DILUCION RESTOS DE G.R. APELOTAMIENTO DE LEUCOCITOS DESGASTE DE TECNICA EXTRACCION DE SANGRE DILUCION (PIPETA MAL ENRASADA) LLENADO DE CAMARA EN FORMA DESIGUAL AUTOAGLUTINACION DEL OPERADOR DIFERENCIAS DE UN INDIVIDUO A OTRO FATIGA OCULAR

LEUCOCITOSIS  -

FISIOLÓGICAS Embarazo, Lactancia, Puerperio, Período menstrual Ejercicio violento, Stress.

LEUCOCITOSIS PATOLOGICAS CAUSAS INFECCIOSAS -Bacterias piógenas : Strepto, Staphylo , Meningo y gonococo. -Tos convulsa (Bordetella) Leucocitosis con Linfocitosis -Sarampión (Inc) -Cuadros septicos : Peritonitis, Neumonía

CAUSAS NO INFECCIOSAS -Cuadros inflamatorios -Post hemorragias -Vómitos, convulsiones, crisis eclámpsicas, epilepsia, taquicardias -Hipertemias no infecciosas -Quemaduras extensas -Sock traumático -IMC, necrosis de tejido tumoral, pancreatitis. -Leucemias -Enfermedades metabólicas : DBT, Coma diabético, Acidosis -IRC -Endócrinopatias : Cushing - Corticoterapia

Leucopenias -Constitucional

(Rara) tener presente resultados previos -Digestiva (post prandial) -Infecciosa: fiebre tifoidea y paratifoidea -Sepsis de mala evolución -Casi todas las virosis (Sarampión, Varicela, Gripe, Neumonía ) -Intoxicación por benzoles o sulfas -Hemopatías: Leucemias leucopénicas, aplasia medular, etc -Afecciones hepatoesplénicas -Cirrosis hepática, trombosis de la vena porta o esplénica -Leucopenias alérgicas, shock anafiláctico -Afecciones reumáticas -Quimioterapia -Leucopenias carenciales -Colagenopatías: LES, Esclerodermia -AINES

DOSAJE DE Hb Método de la Cianmetahemoglobina  Fue recomendado por el Comité Internacional para la Estandarización de Hematología (ICSH) en 1966, modificado en 1977 y sigue siendo hasta hoy el más recomendado. 

REACTIVO DE DRABKIN      

Fe(CN)6K3---------------200 mg KCN---------------------------- 50 mg K3HPO3--------------------140 mg Sterox Se o Triton X-100-------1 mL Llevar a 1L con agua destilada y ajustar el pH a 7,2 con H3PO4 0.1 N o con KOH 0.1N. Guardar en frasco color caramelo, a T amb, estable 6 meses.

Fundamento del Método Hb ( Fe II ) Fe(CN)6K3 Meta Hb ( Fe III)

KCN

CIANMETAHEMOGLOBINA

MAXIMO DE ABS A 540 nm

Técnica 5 mL Rvo Drabkin + 20 µL sangre entera anticoagulada

5 minutos

Leer a 540 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro con filtro verde

Curva de calibración Se realiza cada vez que se prepara o adquiere reactivo.  Kits comerciales : 3 niveles ( bajo, normal, alto )  Muestra testigo de cc conocida (trabajo con dilución al ½ y con el doble ) 

Curva de Calibración Abs A=Ɛ.b.C y=ax+b

g/dL

VENTAJAS DE LOS METODOS KIT COMERCIAL

-Controla la linealidad del equipo -Estado del rvo

MUESTRA TESTIGO -Controla la linealidad del equipo -Controla la manipulación del material de medición volumétrico (en forma indirecta) pues el patrón se procesa como si fuese una muestra -Posible deterioro del reactivo -Variaciones de tensión, Int de la -Lampara,etc.

Para tener en cuenta La determinación de un patrón diario nos permite: -Controlar que el reactivo no ha sufrido deterioro -Controlar el factor humano -Cambios en la tensión eléctrica o funcionamiento del equipo de lectura. 

VALORES DE REFERENCIA Bibliografía

Laboratorio

Mujeres

11,5 - 14 g%

12 – 15 g%

Varones

13,5 – 17 g%

13 – 17 g%

HEMATOCRITO O VOLUMEN GLOBULAR

Definición  ES

EL VOLUMEN DE MASA GLOBULAR EXPRESADO COMO UN % EN EL VOLUMEN DE SANGRE TOTAL

Técnica 1-SE CARGAN TUBOS CAPILARES:  Sangre venosa : Sin heparina  Punción digital: Con heparina 2-LLENAR HASTA 2/3 EL CAPILAR Y CERRAR EN UN EXTREMO CON PLASTILINA 3-CENTRIFUGAR EN CENTRIFUGA ESPECIAL: 15000 rpm 5 a 6 min 4-LEER EN ABACO ESPECIAL

MICROCENTRÍFUGA

VENTAJAS    

RÁPIDO < VOLÚMEN DE SANGRE TUBOS CAPILARES DESCARTABLES MAS EXACTO YA QUE AL CENTRIFUGAR LA SANGRE A MAYOR VELOCIDAD EL VOLUMEN DE PLASMA ATRAPADO POR LOS G.R. EN DICHA CAPA ES