Vibrio cholerae : diagnóstico y caracterización
María Rosa Viñas
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas - ANLIS “Carlos G. Malbrán” Servicio Enterobacterias INEI – ANLIS “Carlos G. Malbrán” setiembre 2014, Buenos Aires Especialización en Bacteriología Clínica – UNNE 11-12 de Junio 2015
Flia. Vibrionaceae (gen. Aeromonas ,Plesiomonas y Vibrio )
Características del género Vibrio
Bacilos Gram-negativos, 0,5 a 0,8 x 1,4 a 2,6 µm
Anaerobios facultativos
Móviles
Oxidasa positivos, excepto V. metschnikovii
Su crecimiento es estimulado por ClNa
(V. cholerae crece en ausencia de NaCl)
Su metabolismo es fermentativo, pueden fermentar glucosa entre otros sustratos
Vibrio cholerae es el agente causal del cólera, enfermedad infecciosa conocida desde la antigüedad, asociados a los serogrupos O1 y O139
El Reglamento Sanitario Internacional exige la declaración
de los casos de cólera a la OMS. Las cifras se publican en el Weekly Epidemiological Record ( mortalidad 2,5% ) http://www.who.int/topics/cholera/surveillance/es/
Vibrio cholerae Clasificación por serogrupos Vibrio cholerae O1 • Serotipos: Ogawa, Inaba , raramente, Hikojima o Biotipos: Clásico y El Tor
asociado a cólera epidémico (toxina de cólera)
Vibrio choleare O139 Vibrio cholerae no-O1 no-O139; asociado a gastroenteritis, diarrea moderada hasta cuadros severos ó con sangre, sepsis en inmunocomprometidos y asociado a patología hepática.
Manifestaciones Clínicas V. cholerae O1 y O139 • La infección puede ser asintomática ó presentar distinta gravedad, hasta la forma más severa, cólera: diarrea acuosa (deposiciones como “agua de arroz”), vómitos y deshidratación con perdida de electrolitos. • Aproximadamente 1 / 20 personas infectadas puede tener la enfermedad grave. • La pérdida rápida de líquidos corporales lleva a la deshidratación y a la postración. Sin tratamiento adecuado, puede ocurrir la muerte en horas • Dosis infectiva: 103 a 106 microorganismos • Período de incubación: 1 a 3 días
Manifestaciones Clínicas V. cholerae nono-O1, no no--O139
Habitualmente se aísla de casos esporádicos de diarrea y de infecciones extra-intestinales (j contacto con el ambiente acuático): infección de heridas, oídos, celulitis, apendicitis) Menos frecuente contagio de persona a persona
Se han descripto casos de bacteriemia especialmente en pacientes con patología hepática (cirrosis) y/ó inmunosuprimidos (HIV, leucemia, desnutridos)
Las infecciones por V. cholerae no-O1, no-O139 se presentan a lo largo de todo el año, aunque son más frecuentes en los meses más cálidos.
Se han reportado brotes de diarrea causados por este microorganismo en diferentes regiones del mundo, incluyendo Argentina
Epidemiología V. cholerae • V. cholerae es un habitante autóctono de ecosistemas acuáticos • Sensible a las temperaturas y nutrientes • Patrón cíclico de brotes: florecimiento de copépodos-plancton • Las personas pueden infectarse por la ingesta de agua o alimentos contaminados: mariscos, ostras, mejillones crudos ó tratamiento calor mínimo, concentran hasta 300 veces / 24 hs las bacterias. • Durante una epidemia de cólera, la enfermedad puede diseminarse rápidamente en áreas con tratamientos inadecuados de agua potable y pobres condiciones sanitarias..
Vigilancia de V. cholerae de origen ambiental de plataforma bonaerense y ríos de Tucumán Río Salí Canal Norte San Miguel Banda de Tucumán del Río
V. cholerae no O1 y V. cholerae O1 (CT -)
Salí Océano Atlantico Sur
Río Lules
A Uruguay A
B C
Figure 1. Mapa de Argentina y los sitios de muestreo: Estación marina , agua de la costa del Atlántico y del area Estuarial del Río de la Plata y agua fresca de los ríos de Tucumán. (SG Fraga, 2007)
Argentina Estación marina
Río de La Plata
Factores de virulencia asociados al cólera V. cholerae O1 y O139
Toxina de cólera (cholera toxin, CT)
Factor de colonización (toxin-coregulated pilus, TCP)
Toxina de cólera – mecanismo de acción
Toxina de cólera – codificación genética
Los genes que codifican la toxina CT (ctxAB) se encuentran dentro del genoma de un bacteriófago lisogénico filamentoso conocido como CTXΦ.
Este fago se encuentra integrado en el genoma de V. cholerae en uno (El Tor) o dos loci (Clásico)
Aplicación de PCR en el Flujograma de aislamiento de V. cholerae a partir de materia fecal Diagnóstico presuntivo
Muestra de materia fecal en Cary Blair
Tamizaje por PCR APA: 6 - 8 hs 37º C
Extracción de ADN, 10´100ºC
Agar TCBS / TSA: 18hs 37ºC bioq. mínimas
PCR V. cholerae/ctxA/tcpA El Tor 24-48 hs
Kligler-LIA-Indol de Triptofano-Estría TSA + 4hs Oxidasa, Pruebas bioquímicas complementarias Serotipificación O1 y O139 48-72 hs
Diagnóstico confirmado
V. cholerae O1, O139 ó no-O1 no-O139 ctxA, tcpA El Tor (PCR) Subtipificación molecular PFGE, MLST, ATB, Secuenciación genómica
PCR O1 y O139
PCR stn/tcpI ctxA (+) y/ó tcpI (+) PCR tcpA clásico PCR ctxB, PCR-MAMA
PCR Múltiple V. cholerae/ cholerae/ctxA/ ctxA/tcpA Identifica
si en la muestra hay V. cholerae
Identifica
si hay aislamientos que poseen ctxA, gen de la toxina de coléra (CT)
Identifica
si hay aislamientos que codifican para la proteína estructural de la fimbria TCP codificada por tcpA. Solamente reconoce el alelo El Tor
PCR Múltiple O1/O139 Detecta
los serogrupos O1 y O139 que son los que están asociados, por lo gral, a las cepas causales de cólera (productores de CT)
Permite
asignar el serogrupo a los aislamientos autoaglutinables
Atención:
hay cepas O1 y O139 que no son productoras de CT, y pueden aparecer cepas de otros serogrupos que si lo son.
Caracterización de aislamientos por PCR Detección de factores de virulencia * Hay diferentes factores de virulencia que pueden explicar la
patogenicidad de cepas CT negativas de V. cholerae .
ToxR HlyA/VCC
Ampliamente distribuídos en V. cholerae
RTX Neuraminidasa Sistema de secreción de tipo III (vcs) NAG-ST (codificada por el gen stn/sto) tcpI (regulador del factor de colonización TCP)
Rol patogénico aún no establecido?
Colonias características de Vibrio cholerae en agar TCBS
Caracteres bioquímicos de Vibrio cholerae Oxidasa Kligler TSI Glucosa (prod. de ácido) Sacarosa (prod. de ácido)
100 % K/A, no gas, no SH2 A/A, no gas, no SH2 100 % 100 %
Lisina Arginina Ornitina
99% 0% 99 %
Crec. en caldo al 0% NaCI Crec. en caldo al 1% NaCl Crec. en caldo al 6% NaCl Crec. en caldo al 8% NaCl Crec. en caldo al 10% NaCl
100 % 100 % 53 % 1% 0%
Roja de Metilo (1% Na CI) Voges-Proskauer (1% Na CI)
99 % 75 %
Caracteres bioquímicos de miembros de la FamiliaVibrionaceae Familia Vibrionaceae y géneros relacionados, relacionados, patógenos para el hombre V. cholerae
V. Alginoly ticus
V. fluvialis
V. furnisii
V. hollisae
V. Metschni kovii
V. mimicus
V.parahaemolyticus
V. vulnificus
Aeromonas hydrophila
Plesiomonas shigelloides
Col.amar.
Col.amar
Col.amar
Col.amar
No crece
Col.amar
Col.verde
Col.verde
Col.verde
Col.amar
Col.verde
Oxidasa
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
Arginina dehidrolasa (1%NaCl)
-
-
+
+
-
+
-
-
-
+
+
Ornitina decarboxilasa (1%NaCl)
+
+
-
-
-
-
+
+
55%
-
+
Lisina decarboxilasa (1%NaCl)
+
50%
-
-
-
35%
+
+
+
+
+
0%
+
-
-
-
-
-
+
-
-
+
+
1%
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
6%
53%
+
+
+
83%
78%
49%
+
55%
+
-
8%
-
+
71%
78%
-
44%
-
80%
-
-
-
10%
-
+
-
-
-
-
-
-
-
-
-
sacarosa
+
+
+
+
-
+
-
-
-
+
-
Celobiosa
-
-
39%
-
-
-
-
-
+
-
-
Lactosa
-
-
-
-
-
50%
-
-
85%
-
-
Arabinosa
-
-
+
+
+
-
-
+
-
84%
-
Manosa
78%
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
Manitol
+
+
+
+
-
+
+
+
45%
+
-
75%
+
-
-
-
+
-
-
-
+
-
Agar TCBS
Crecimiento en:
Acidificac. a partir de:
VogesProskauer
Col. amar.: colonia amarilla / Col. Verde: colonia verde. TCBS: agar Tiosulfato Citrato sales Biliares Sacarosa
Diferenciación entre Vibrio cholerae y otros géneros Gram Gram--negativos, oxidasa positivos Pruebas bioquímicas
V. cholerae
Aeromonas
Plesiomonas
Sacarosa
+
+
-
Inosita
-
+
+
Manita
+
+
-
Arginina dehidrolasa
-
+ (excep. A.veronii biovar
+
Lisina decarboxilasa
+
+ (excep. A.caviae (-)
+
Ornitina decarboxilasa
+
- (excep. A.veronii biovar veronii (+)
+
veronii (-)
V. cholerae O1 Epidemiología en América Latina Epidemia (séptima pandemia) causada por
Vibrio cholerae O1 biotipo El Tor, los aislamientos fueron CT+ (ctxA, tcpA El Tor ) Los casos de cólera se presentan asociados a brotes epidémicos y no se considera a la región . endémica para esta enfermedad.
En los últimos años sólo se han reportado casos de cólera asociados a:
Brote epidémico Paraguay 2009;
Brote epidémico Haití 2010; República Dominicana; Cuba; México. Reporte OPSOMS, 2014.
1991.Creación de Red de Laboratorios de Diarreas y Patógenos Bacterianos de Transmisión Alimentaria. LRN: caracterización fenogenotípica de aisl de V. cholerae derivados en el marco de la RND: Pruebas bioquímicas, ELISA para detección de CT PCR ctxA tcpA alelo El Tor, PCR O1/O139 Subtipificación molecular: RAPD, PFGE: creación BDN de V. cholerae en el marco de la Red PulseNet de AL y C.
Desde 1991, programa activo de vigilancia: V. cholerae O1 CT asociados a casos de cólera V. cholerae O1 VNC del ambiente (ríos , estuarios) V. cholerae no-O1no-O139 asociados a casos de gastroenteritis, sepsis en pacientes con patología hepática y/ó oncológica, infecciones de heridas y reservorios ambientales.
Subtipificación de V. cholerae O1 por Electroforesis en Campo Pulsado (PFGE) Dice (Opt :1.50% ) (T ol 1. 5%-1.5% ) (H> 0.0% S>0. 0%) [0.0% -100.0% ]
100
95
90
PFGE-SfiI
85
80
75
PFG E-SfiI
58H/93 ST29161 CH1502 CH2507 J18/W ST10568
Clon epidémico V. cholerae 90´(1992-1998)
O1 CT+
T227/W SF336 CH2283/05 F99H
Chaco 2005
SF1902 SF366 RB-1 SJ179/W T717 T12550 T13074 T2220 T522 T5957 T610 T612/W T777 T1437
V. cholerae Variante Tucumán O1 CT90’ (1994-1998)
SITUACION A NIVEL REGIONAL Cólera en Haití Fuente: CDC, USA
• 2010, Haití, brote de cólera; al 2014: 55.736 casos, 431 muertes relacionada con var V. ch El Tor O1 de Asia ( Ali; 2011 ). • * Vibrio cholerae O1 Ogawa, híbrido: • Biotipo El Tor, CT alelo Clásico, perfil de R: S a tetraciclina, ciprofloxacina y kanamicina, R a trimetoprimasulfametoxazol, furazolidona, ácido nalidíxico, sulfisoxazol y estreptomicina * 2010-2014 Diseminación a Rep. Dominicana,
México
Florida en USA, Venezuela, Cuba y (OPS, 2014)
El ecosistema de la Región de América C y El Caribe reservorios de genes diferentes a los de cólera epidémico de los 90´; CT biotipo Clásico, elementos genéticos integrativos STX. *Incorporar MAMA -PCR en el flujograma diagnóstico; Morita et al.,2008.
Cólera en Haití: comparación con aislamientos de América Latina (brotes epidémicos 19931993-1998) Sfi SfiII-PFGE en marco PulseNet Internacional Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-SfiI
PFGE-SfiI
País
100
90
80
Nº Aislamiento
Fecha de aislamiento
SF336
Argentina
.1999-12-17
ST29161
Argentina
.1993-02-02
CH1502
Argentina
.1994-02-15
CH2507
Argentina
.1997-07-25
ST10568
Argentina
.1995-03-08
Paraguay
.2009-03-10
CH2283
Argentina
.2005-10-01
SF1902
Argentina
.1998-02-23
SF366
Argentina
.1999-12-17
T12550
Argentina
.1995-01-03
T13074
Argentina
.1994-12-30
T2220
Argentina
.1994-02-25
T522
Argentina
.1998-01-20
T5957
Argentina
.1993-12-03
T610
Argentina
.1994-01-22
T777
Argentina
.1994-01-28
T1437
Argentina
.1997-02-10
T717
Argentina
.1998-01-30
CDC__2010EL-1788 450
.
.
V. cholerae O1 Epidemiología en América Latina Paraguay 2009 2009: brote de cólera en Paraguay, afectó integrantes de comunidad indígena en zona de Chaco Paraguayo .
Fuente: Dra. Natalie Weiler Gustafson. Laboratorio Central de Salud Pública de Paraguay
V. cholerae O1 Brote de cólera en Paraguay 2009 (ISP)
Las comunidades indígenas carecen de agua potable, la fuente de abastecimiento de agua es a través de un reservorio ( tajamar) y se distribuye a través de drenajes subterráneos a otros reservorios mas pequeños (pozo o aljibes).
No cuentan con desagües ni letrinas en las comunidades
Fuente: Dra. Natalie Weiler Gustafson. Laboratorio Central de Salud Pública de Paraguay
V. cholerae O1 Brote de cólera en Paraguay 2009
V. cholerae O1 Ogawa de un paciente y de agua de tajamar. Se compararon entre sí y con aislamientos Vc no-O1, no-O139 de agua de tajamar
Los dos aislamientos de Vibrio cholerae O1 (caso índice y de agua) mostraron perfiles similares, con dos bandas claras de diferencia con la primera enzima SfiI.
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-SfiI
Cepa Nº País
Estado
Ciudad
Origen
Muestra
Fecha
Patrón de PFGE
100
80
PFGE-SfiI
789
Paraguay
Estancia Loma Plata
Environment Water
2009-04-20
PYKZGS12.0003
861
Paraguay
Loma Plata
Environment Water
2009-04-30
PYKZGS12.0004
797
Paraguay Filadelfia Parque de los recuerd Environment Water
2009-04-21
PYKZGS12.0005
869
Paraguay Filadelfia Tagua
Environment Water
2009-05-03
PYKZGS12.0006
870
Paraguay Filadelfia Parque de los recuerd Environment Water
2009-05-03
PYKZGS12.0006
868
Paraguay
Environment Water
2009-05-02
PYKZGS12.0008
450
Paraguay Filadelfia
Human
2009-03-10
PYKZGS12.0001
862
Paraguay
Estancia San Ramón
Environment Water
2009-04-30
PYKZGS12.0002
796
Paraguay
Ebetogue
Environment Water
2009-04-21
PYKZGS12.0009
867
Paraguay Filadelfia Loma plata
Environment Water
2009-05-02
PYKZGS12.0010
920
Paraguay
Environment Water
2009-05-10
PYKZGS12.0011
Cuadro Rojo: Aislamientos de Vibrio cholerae O1
Dos lagunas
Caraya de los Ayoreo
Normativa para la Notificación a través del Sistema Nacional de Vigilancia de la Salud (SNVS), Módulo SIVILA, Diarreas bacterianas En qué casos investigar Vibrio cholerae? 1. Todo caso clínicamente 2. Uno de cada 5 coprocultivo sospechoso de cólera. (nodo de SIVILA)
NOTIFICACION INMEDIATA EN FICHA INDIVIDUAL DE CÓLERA AL SNVS- SIVILA
Notificación en Evento Diarreas Bacterianas
Derivación al LNR, Flujograma para identificación y caracterización de V. cholerae, análisis y notificación de resultados
En el año 2014 el porcentaje acumulado de muestras
estudiadas para cólera fue del 30,72% , requisito de estudiar para V. cholerae 1 cada 5 coprocultivos . ( Plan de abordaje integral de la enfermedad diarreica aguda y plan de contingencia de cólera por V. cholerae) .
Sin embargo, si bien se cumple con la meta a nivel nacional, a nivel provincial solamente siete provincias cumplen con el requisito de estudiar 1 cada 5 diarreas. ( el resto lo cumple de manera deficiente o no lo cumple).
SIVILA, 2014
VIGILANCIA LABORATORIAL DE INFECCIÓN POR Vibrio Cholerae DESDE EL LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL ( JAM, 2014 ) Tabla 1. Distribución de genotipos en aislamientos de V. cholerae ( 2003 – 2014 ) Genes de identificación V.cholerae O1/O139 V. cholerae no O1 no O139 V. cholerae no O1 no O139 V. cholerae no O1 no O139 V. cholerae no O1 no O139 V. cholerae O1 V. cholerae O1 V. cholerae O1 V. cholerae O139 N Total 1 H: human; 2A: Ambiental
Genes de virulencia ctxA + + -
tcpA + -
tcpI + + + + -
No.aislamientos (n; %) stn + -
465; 97,6 3; 0,63 1; 0,21 2; 0,42 1; 0,21 2; 0,42 1; 0,21 1; 0,21 476; 100
Origen (n) H1 A2 125 0 1 2 1 2 1 1 133
340 3 0 0 0 0 0 0 343
La mayoría de los aislamientos fueron confirmados
fenogenotípicamente como Vc no-O1 no-O139 negativos para CT y TCP alelo El Tor excepto 1 Vch O1 CT TCP alelo El Tor de un caso de cólera, 2005 (H) 2 Vch no-O1 no-O139 TCP, un Vc no-O1 no-O139 CT TCP (H) 3 Vch O1 CT negativo (H) 1 Vch O139 CT negativo (H) 3 Vch no-O1 no-O139 STN (A)
2014 V. ch O1 y O139, O139, notificados por el laboratorio en el marco de la vigilancia de diarreas
SE 1 y 5, 2014
Dos casos V. ch O1 de Tucumán un caso V. ch O139 de Tucumán un caso V. ch O1 de Jujuy
Casos de diarrea sanguinolenta (2),
diarrea prolongada (1) y diarrea acuosa (1).
Sensibles a atb. Los perfiles genéticos: V. cholerae O1 ctxA (-), tcpA El Tor (-) , tcpI ( + ) dos casos V. cholerae O1 ctxA (-), tcpA El Tor (-) , tcpI ( - ) un caso V. cholerae O139 ctxA (-),tcpA El Tor (-), tcpI (-) un caso
Antecedentes epidemiológicos de viaje a un balneario del río, barrio con condiciones deficientes sanitarias, asistencia a una pileta de natación días previos
Dendograma de relación genética de una selección de aislamientos de Vibrio cholerae de Argentina, analizados con la enzima SfiI, con el coef. Dice. BDN: 237 aislamientos de V. cholerae SfiI: 218 patrones, NotI: 124 patrones
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
100
PFGE-SfiI
90
80
70
PFGE-SfiI
CH1502
Chaco
Human 1994-02-15
ARKZGS12.0017
O1
CH2507
Chaco
Human 1997-07-25
ARKZGS12.0017
O1
J18/W
Jujuy
Enviro. 1992-04-07
ARKZGS12.0017
O1
ST10568
Salta
Human 1995-03-08
ARKZGS12.0017
O1
ST29161
Santa Fe
Human 1993-02-02
ARKZGS12.0017
O1
CH2283
Chaco
Human 2005-10-01
ARKZGS12.0018
O1
VC182/14
Tucumán
Human 2014-01-26
ARKZGS12.0110
O1
VC188/14
Tucumán
Human 2014-01-27
ARKZGS12.0111
O1
VC920/09
Chaco
Enviro. 2008-12-10
ARKZGS12.0116
Non-O1, O139,.
VC923/09
Chaco
Enviro. 2009-03-17
ARKZGS12.0116
Non-O1, O139,.
Me11844
Mendoza
Human 1996
ARKZGS12.0025
Non-O1, O139
Me160
Mendoza
Human 1995
ARKZGS12.0025
Non-O1, O139
SO149
Salta
Human 2000
ARKZGS12.0027
O49
Vc4
Córdoba
Human 1994
ARKZGS12.0049
Non- O1, O139
Vc44
Córdoba
Human 1994
ARKZGS12.0049
Non- O1, O139
BA312
Buenos Aires Human 1994
ARKZGS12.0050
Non- O1, O139
Vc602/08
Santa Fe
Human 2008-04-04
ARKZGS12.0062
Non- O1, O139
Vc603/08
Santa Fe
Human 2008-04-04
ARKZGS12.0062
Non- O1, O139
CF17170
Buenos Aires Human 2002
ARKZGS12.0010
O36
VC465/11
Buenos Aires Human 2011-02-21
ARKZGS12.0102
Non-O1, O139,.
VC181/14
Tucumán
Human 2014-01-23
ARKZGS12.0114
O139
VC704/14
Chaco
Enviro. 2012-01-01
ARKZGS12.0131
Non-O1, O139
VC707/14
Chaco
Enviro. 2012
ARKZGS12.0132
Non-O1, O139
SO47/W
Salta
Enviro. 2000
ARKZGS12.0015
O37
Me3
Mendoza
Human 1995
ARKZGS12.0044
Non-O1, O139
SO28W
Salta
Enviro. 2000
ARKZGS12.0028
O14
T12550
Tucumán
Human 1995-01-03
ARKZGS12.0041
O1
T13074
Tucumán
Human 1994-12-30
ARKZGS12.0041
O1
T2220
Tucumán
Human 1994-02-25
ARKZGS12.0041
O1
T612/W
Tucumán
Enviro. 1994-03-14
ARKZGS12.0041
O1
VC591/14
Jujuy
Human 2014
ARKZGS12.0124
O1
Vc2037/07
Tucumán
Human 2007
ARKZGS12.0009
Non-O1, O139
BA115018
Buenos Aires Human 2002
ARKZGS12.0071
O111
VC575/13
Buenos Aires Human 2013-04-14
ARKZGS12.0117
Non-O1, O139,.
SO34
Salta
Human 2000
ARKZGS12.0070
Non- O1, O139
Pilcomayo
Formosa
Enviro. 1992
ARKZGS12.0053
Non- O1, O139
VC849/07
Tucumán
Human 2007
ARKZGS12.0012
Non- O1, O139
J31/W
Jujuy
Enviro. 2000
ARKZGS12.0091
Non- O1, O139
VC183/14
Tucumán
Human 2014-01-24
ARKZGS12.0113
Non-O1, O139
ST2761
Salta
Human 1993
ARKZGS12.0094
O139
VC491/14
Buenos Aires Human 2014-02-26
ARKZGS12.0121
Non-O1, O139
VC308/11
Buenos Aires Human 2011-02-02
ARKZGS12.0090
Non-O1, O139
V ch O1 epidémico V ch O1 2005 y 2014
Similitud: 85,7% (SfiI) con cepa O1 epidémica Similitud: 61,5% (SfiI) con la “Var Tucumán”
Vch O1 var Tucumán Vch O1 Jujuy 2014
MLST: Ch 2283 mismo grupo clonal que Vc O1 epidémicas no así la Variante
Tucumán. S.G. Fraga, 2008
Tabla. Aislamientos de V. cholerae no-O1 de origen ambiental del Chaco 2018-2014 Cepas (n) Fecha derivación lugar de procedencia Origen Tipo de muestra Caracterización fenogenotípica ( pruebas bioquímicas-PCR) 8 2008 - 2009 Resistencia, Chaco ambiental agua de laguna, río Negro V. cholerae no-O1 no-O139 ctx- tcpA El Tor - stn - (8) 3 oct-13 Resistencia, Chaco ambiental agua de laguna V. cholerae no-O1 no-O139 ctx - tcpA El Tor - stn - (3) 6 abr-14 Resistencia, Chaco ambiental agua de laguna, río Negro V. cholerae no-O1 no-O139 ctx - tcpA El Tor - stn - (4) V. cholerae no-O1 no-O139 ctx- tcpA El Tor - stn + (2) N= 17 Figura 1- Dendograma con el coeficiente de Dice con la enzima SfiI de los
aislamientos ambientales de Vibrio cholerae no-O1 no-O139 de Chaco. Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-SfiI
100
80
PFGE-SfiI
VC708/14
Chaco
Resistencia
Environment
Lagoon
ARKZGS12.0130
2014-04-21
VC709/14
Chaco
Resistencia
Environment
2009-10-01
Lagoon
ARKZGS12.0136
2014-04-21
VC704/14
Chaco
Resistencia
Environment
2012-01-01
River water
ARKZGS12.0131
2014-04-21
VC707/14
Chaco
Resistencia
Environment
River water
ARKZGS12.0132
2014-04-21
VC1047/13
Chaco
Resistencia
Environment
2010-05-05
Lagoon
ARKZGS12.0129
2013-10-24
VC1049/13
Chaco
Resistencia
Environment
2013-03-12
Lagoon
ARKZGS12.0126
2013-10-24
VC706/14
Chaco
Resistencia
Environment
2012-01-09
Lagoon
ARKZGS12.0129
2014-04-21
VC1048/13
Chaco
Resistencia
Environment
2012-11-19
Lagoon
ARKZGS12.0128
2013-10-24
VC919/09
Chaco
Resistencia
Environment
2008-09-30
River water
ARKZGS12.0122
2008-08-11
VC922/09
Chaco
Resistencia
Environment
2009-03-05
Lagoon
ARKZGS12.0119
2009-05-04
VC920/09
Chaco
Resistencia
Environment
2008-12-10
Lagoon
ARKZGS12.0116
2009-05-04
VC923/09
Chaco
Resistencia
Environment
2009-03-17
Lagoon
ARKZGS12.0116
2009-05-04
VC924/09
Chaco
Resistencia
Environment
2009-04-20
Lagoon
ARKZGS12.0116
2009-05-04
VC921/09
Chaco
Resistencia
Environment
2009-02-23
Lagoon
ARKZGS12.0123
2009-05-04
VC1379/08.
Chaco
Resistencia
Environment
2008-05-30
River water
ARKZGS12.0093
2008-07-17
VC705/14
Chaco
Resistencia
Environment
2012-01-09
Lagoon
ARKZGS12.0135
2014-04-21
Aislamientos de V. cholerae no-O1 de agua de diferentes lagunas 2008-2009 Aislamientos de V. cholerae no-O1 stn+ de agua del río Negro 2014 No fueron identificados anteriormente en la BDN de V. cholerae
Debido a que la resistencia a los antimicrobianos ha ido en aumento en muchas partes del mundo, es importante determinar la sensibilidad
a los
antimicrobianos de Vibrio cholerae O1, al inicio de la epidemia y monitorearla periódicamente.
Los puntos de corte para interpretar las zonas de inhibición para V. cholerae O1 fueron establecidos por la CLSI
Condiciones del test: Medio: Agar Mueller-Hinton Inóculo: Método de crecimiento previo o suspensión de colonia directa, equivalente al estándar 0.5 de Mc Farland. Preparar el inóculo en 0.85% NaCl Incubación: 35 ± 2 ºC, aire, 16-18 horas. Servicio ANTIMICROBIANOS Control de Calidad: E.coli ATCC 25922
INEI – ANLIS Dr Carlos G. Malbran
Esquema de colocación de discos para la determinación de la sensibilidad a los antimicrobianos por el método de difusión en V. cholerae.
TMS
CIP AMP NAL
TET
CMP
NIT
TMS:
trimetoprima/sulfametoxazol,
NIT:
nitrofurantoína/furazolidona,
AMP:
ampicilina, CIP: ciprofloxacina; TET: tetraciclina; CMP: cloranfenicol, NAL: ácido nalidíxico.
Servicio ANTIMICROBIANOS INEI – ANLIS Dr Carlos G. Malbran
Es importante mantener la vigilancia de V. cholerae
Para detectar tempranamente la aparición de casos de cólera asociados a V. cholerae O1 u O139 toxigénicos.
Para identificar V. cholerae no-O1, no-O139 asociado a casos y brotes de diarrea.
Para monitorear la emergencia de nuevas cepas con potencial patogénico y epidémico
La incorporación de técnicas moleculares de diagnóstico y subtipificación aportan sensibilidad y especificidad para la vigilancia de este patógeno.
Desafios futuros Transferir
PCR para caracterización completa de V. cholerae inclusive para detección de la variante (LRN). Desde LRN secuenciación genómica para análisis de cepas emergentes con características nuevas de virulencia
Agradecimientos
Servicio Enterobacterias
Servicio Fisiopatogenia, Antimicrobianos.
Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero (INIDEP). Dra. Costagliola
Universidad Nacional de Tucumán Hospital del Niño Jesús de Tucumán UNNE, Chaco
Red Nacional de Laboratorios de Diarrea y Patógenos Bacterianos de Transmisión Alimentaria
