TEMA 3: Biofábricas Introducción Los enormes avances logrados en la investigación biológica durante las últimas décadas han posibilitado progresos transcendentales en el área productiva. La posibilidad de la manipulación genética y su introducción en muchas de las ciencias, generó especializaciones como la biomedicina, la bioingeniería, la bioinformática y la biotecnología, con una relevancia enorme por su aplicación social, industrial y comercial. Con el surgimiento de la Biotecnología que se define como el conjunto de técnicas que utilizan organismos vivos o sustancias derivadas de estos organismos para modificar un producto, mejorar plantas o animales o desarrollar microorganismos para usos específicos, comenzó a cobrar importancia encontrar soluciones a los conflictos ambientales y alcanzar producciones sustentables, minimizando la degradación del ambiente y protegiendo los recursos naturales. Además, ofrece innumerables oportunidades para diversificar y valorizar el uso de los recursos y aumentar el control y eficiencia de los procesos productivos de base biológica. El objetivo de la Biotecnología moderna es usar conocimientos científicos para el desarrollo de metodologías técnicas y económicamente competitivas, que faciliten la resolución de problemas productivos y sociales. Con la generación de lo “bio” han nacido conceptos muy específicos como biocomercio, bioindustria, biofábricas y bioempresas, los cuales muestran la necesidad de ser reconocidos y avalados por el contexto en el cual están creciendo y se están convirtiendo en fortalecidas líneas de negocios de interés nacional e internacional, público y privado. El nacimiento de empresas con aplicaciones biotecnológicas, unidas a las investigaciones de los centros de investigación universitarios o corporaciones investigativas y la tendencia de las grandes empresas multinacionales farmacéuticas y químicas dedicadas a producir productos, han dado pie a la transformación de los conceptos fábricas y empresas. Biofábricas: Es una empresa que tiene como misión apoyar el desarrollo de la producción agropecuaria, articulando el trabajo de la investigación científica con la producción, en una perspectiva de mercado, ecológica y de responsabilidad social. Debido a esto, se están consolidando alrededor del mundo las denominadas biofábricas. Una de sus funciones es la producción masiva de bienes biológicos obtenidos mediante procesos biotecnológicos. También pueden dedicarse a la comercialización, generándose toda una línea de venta de sus productos, montar locales comerciales, capacitar vendedores, ofrecer créditos de consumo, establecer varios canales de comercialización, entre otras cosas. De igual modo, adicional a la actividad industrial y comercial, pueden ofrecer servicios de asesoría para el montaje de otras Biofábricas; capacitación para agricultores, estudiantes, empresarios o a la comunidad en general; o prestar servicios de laboratorio, de investigación. Podemos decir entonces que las biofábricas se pueden dedicar a producir y entregar la comercialización de sus productos a otras entidades que se encarguen de crear canales de comercialización, cadenas de distribución, del marketing, atención de pre o postventa.

Clases de producciones de las Biofábricas La Biotecnología es “una técnica que usa organismos vivos o sustancias de estos organismos para: hacer o modificar un producto, mejorar plantas o animales o desarrollar microorganismos para usos específicos". Esta definición de biotecnología abarca herramientas y técnicas desde los procesos de biotecnología clásicos hasta las modernas técnicas de ADN recombinante y la Biotecnología clásica describe el desarrollo de la fermentación desde tiempos antiguos hasta el presente incluyendo diversos productos obtenidos como cerveza, quesos, vinos, alcoholes, ácidos, pan, etc. Las producciones a escala que se obtienen en las biofábricas pueden ser agrupadas en función del organismo o el derivado utilizado como materia prima para la obtención de un producto de aplicación directa. Así tenemos: Bacterias: sus aplicaciones van desde la investigación básica hasta la producción industrial de enzimas, proteínas terapéuticas, industria de la leche, inoculantes, agentes de control biológico (Bacillus subtilis), etc.. Plantas: producción de proteínas industriales y biofármacos, enzimas, componentes sanguíneos, factores de crecimiento, hormonas, anticuerpos, albúmina del suero, plantas transgénicas. cultivo in vitro de tejidos vegetales, etc. Hongos: producción de proteínas, fermentación (levaduras) , alimentos (panificación), hongos comestibles, micorrizas, agentes de control biológico (Trichoderma). Insectos: baculovirus, promotores de vacunas. Animales transgénicos: producción de proteínas recombinantes en animales vivos conejos, cabras, vacas y cerdos y ovejas (hemoglobina y hormonas de crecimiento) y en glándulas mamarias. Desde el punto de vista bioquímico, se denomina fermentación a un proceso que genera energía por la descomposición de sustancias orgánicas por la acción de microorganismos. Desde el punto de vista de proceso, la fermentación permite, obtener del medio de cultivo fermentado distintos productos, según el objetivo que se haya dado al mismo, que puede ser: biomasa microbiana propiamente dicha (bacterias, hongos filamentosos, levaduras, etc), inoculantes para agricultura, productos para control de plagas o biorremediación, levadura de panificación, vacunas microbianas, starters (cultivos iniciadores) para la industria láctea, etc. Biotecnología aplicada a la producción vegetal El Nitrógeno y el Fósforo, son los macronutrientes que en mayor medida limitan el rendimiento de los cultivos. Intervienen en numerosos procesos bioquímicos a nivel celular y se los considera esenciales para las plantas. El uso indiscriminado de fertilizantes sintéticos en la agricultura ocasiona graves problemas de contaminación. No todo el fertilizante que se aplica es aprovechado por la planta sino que en una cantidad importante acaba en lagos y lagunas.

Se estiman que, alrededor del 50 % de los fertilizantes nitrogenados aplicados a los cultivos es absorbido por las plantas, el otro 50 % o más es almacenado en el suelo para la nutrición de los cultivos subsiguientes; pero una gran parte es transformado por los microorganismos volviendo a la atmosfera y otra gran parte es lixiviado a capas inferiores donde contaminan las aguas subterráneas y el manto freático. Además, la producción de fertilizantes nitrogenados no solamente interviene en el agotamiento de la energía natural y el combustible fósil, sino también genera grandes cantidades de CO2 en su producción y contribuye sustancialmente al calentamiento global potencial. La actual producción agrícola depende fundamente de diversas alternativas: de la aplicación de fertilizantes químicos nitrogenados o fosforados, etc. del empleo de compost, de abonos verdes combinada con la labranza cero, de la inoculación de la semilla en la siembra con microorganismos benéficos o bien con alguna mezcla de las alternativas señaladas. El uso de microorganismos benéficos de los cultivos para la optimización y/o reducción de la aplicación de fertilizantes químicos en la producción agrícola es una alternativa antigua aplicada actualmente cada vez con mayor aceptación y consiste en aplicar al momento de la siembra en la semilla microorganismos benéficos de plantas que inducen una germinación rápida, mejoran la absorción radical e incrementan o mantienen el rendimiento del cultivo vegetal. Producción de inoculantes bacterianos. El uso de inoculantes a base de microorganismos bacterianos y los beneficios para la agricultura sostenible. En los sistemas suelo-planta existen tres grupos principales de microorganismos beneficiosos, que son fundamentales en el contexto de la sostenibilidad de los mismos. Ellos son: • Los hongos formadores de micorrizas. • Las bacteria Fijadoras de N2 atmosférico (libres y simbióticas) (Rhizobium, Bradyrhizobium, Azospirillum). • Las rizobacterias promotoras del crecimiento o PGPR que estimulan el crecimiento de las plantas, el proceso de micorrización e inhiben algunos fitopatógenos, por la producción de antibióticos y otras sustancias. (Pseudomonas, Azospirillum. La utilización de inoculantes microbianos en calidad de fertilizantes o estimuladores del crecimiento de las plantas es una práctica que permite beneficiar los cultivos sin ocasionar un gran daño al medio ambiente. Por otro lado, el costo de estos tratamientos biológicos debe ser competitivo en relación con el tratamiento tradicionalmente empleado con productos químicos. Los procesos naturales de fijación biológica del N2 (FBN) juegan un importante rol en la activación de los sistemas agrícolas sustentables por su beneficio ambiental. Este proceso depende básicamente de la acción de los microorganismos en conjunto con las plantas. Un inoculante es un producto comercial formulado a base de microorganismos (hongos y/o bacterias) específicos, que aplicado convenientemente, mejora el desarrollo del cultivo facilitando el crecimiento vegetal y aumentando o manteniendo su rendimiento, con una dosis reducida o sin fertilizante químicos. Su empleo es una práctica agronómica reconocida en el mundo por sus beneficios productivos y económicos (principalmente en gramíneas y fabáceas). Está constituido por el inoculo (microorganismo específico) y el soporte (líquido o sólido). Las bacterias se cultivan en el laboratorio y se combinan con un soporte adecuado como la

turba, compost, vermiculita, para preparar el inoculante. El proceso por el que se agrega este inoculante a la semilla se llama inoculación. Tipos de inoculantes Podemos considerar dos tipos: para aplicar a las semillas y para aplicar al suelo. 1.- Inoculantes para inoculación de semillas Los tipos de inoculantes corrientemente disponibles son: • En turba, compost, carbón, vermiculita y otros soporte sólidos finamente molidos y húmedos. • Caldos o cultivos líquidos. • Formulaciones liofilizadas o congeladas. • Caldos concentrados congelados. • Formulaciones desecadas en aceites sobre talco o vermiculita. • Rizobios incluidos en poliacrilamidas, alginatos o xantinas. 2.- Inoculantes para inoculación del suelo Los inoculantes para el suelo son los diseñados para ser aplicados directamente al suelo en lugar de a la semilla. Los diferentes tipos son: líquidos o congelados concentrados. La tecnología aplicada a la producción y desarrollo de inoculantes ponen en el mercado formulados a base de turba (sólidos), inoculantes acuosos (líquidos), inoculantes acuosos “premium” con bioinductores o moléculas señal para estimular una nodulación temprana, con micronutrientes o inoculantes combinados permitiendo una coinoculación ya que adicionan al formulado con rizobios bacterias estimuladoras del crecimiento vegetal (PGPR) como Azospirillum y/o Pseudomonas. La preinoculación de la semilla permite mediante el uso de un inoculante de calidad y aditivos, inocular con anticipación de hasta 30 días antes de la siembra; y más recientemente se desarrollo la “semilla lista para sembrar” que combina inoculante larga vida, terápicos que protegen contra hongos e insectos y un polímero de cobertura. Inoculantes con bacterias promotoras del crecimiento vegetal. El uso de inoculantes en la agricultura se comenzó a difundir y generalizar en las diversas áreas de cultivo debido al impacto que producen, a saber: • Contribuyen a preservar el medio ambiente, no contaminando aguas ni aire. • El uso de inoculantes es económico, pues permite ahorrar inversiones en equipamiento y mano de obra. Una correcta inoculación proporciona un elevado retorno por peso invertido. Los inoculantes mayormente utilizados son formulados de bacterias, tales como Rhizobium, Azospirillum y Azotobacter.

Producción de inoculantes bacterianos. En forma general, la elaboración de un inoculante tiene tres fases: la primera es la selección y prueba de cepas de las especies de rizobios; la segunda se relaciona con la elaboración

propiamente dicha, la cual incluye la producción de caldos de rizobios y la selección y preparación de excipientes; la tercera comprende los procedimientos de control del producto elaborado. Etapas: 1. Cepas: selección, identificación, conservación 2. Propagación: cultivo líquido con alto número de bacterias/ml 3. Soporte: selección, acondicionamiento e impregnación con el cultivo de bacterias obtenido 4. Control de calidad del inoculante (legislación- REDCAI) El primer paso consiste en el desarrollo de la bacteria en pequeñas escala, para posteriormente inocular el fermentador 1.Preparación del material: medio de cultivo para mantener la cepa viable. 2. Selección de cepas 3. Siembra del cultivo 4. Controlar la viabilidad y pureza 5. Siembra en el fermentador Deben elegirse cepas infectivas, especificas y efectivas además deben competir con las nativas o naturalizadas además seleccionadas para las condiciones climáticas de la zona en que desarrollaran las plantas. Para inocular un fermentador se necesita utilizar un precultivo que representa el 2% del volumen a inocular, ej. 500 ml para un fermentador de 25 L de un volumen útil. Fermentador (aparato destinado a la multiplicación de rizobios en medio liquido). Consta de una cuba de acero con capacidad con los accesorios que permiten inocular, agitar, tomar muestras. 1. El medio de cultivo se prepara directamente en la cuba antes de esterilizar. 2. Esterilización: el aparato con sus accesorios puede esterilizarse en autoclave durante 1 hora a 120ºC. 3. Puesta en uso: luego de esterilizar y enfriar se inocula con un cultivo desarrollado en 500 ml de medio de cultivo y se pone en funcionamiento. 4. Seguimiento del cultivo: se pueden extraer muestras durante la incubación con el objeto de determinar la curva de crecimiento de rizobios en base al número o densidad óptica. 5. Cosecha de rizobios: al obtener 109 células de rizobios por ml. Características del soporte turba: el soporte a utilizar debe molerse muy fino (100 µ) y no debe ser muy ácido. En general se utiliza turba tamponada de pH cercana a 6. Por ello la cantidad de cultivo inyectado en los sachets debe ser el 60%-70 % de la capacidad máxima de retención. El proceso de producción industrial de inoculantes consiste en identificar las cepas de las bacterias (rizobios) más eficientes en su función de fijar nitrógeno en la leguminosa específica, y adaptarlas a la realidad biológica de cada zona. Estas bacterias, una vez identificadas y adaptadas, son multiplicadas, mediante la tecnología de fermentaciones industriales. Este es un proceso de reproducción microbiana y, por lo tanto, de reproducción de información genética. Este producto, denominado Inoculantes para fabáceas (leguminosas), se comercializa como un insumo biológico e integra el paquete tecnológico de la soja.

Para la producción de inoculantes se utilizan bacterias, que en Argentina son recomendadas por el Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola (IMyZA), INTA-Castelar, institución oficial que entre otras actividades realiza trabajos de investigación relacionados con el aislamiento y selección de cepas de Rhizobium para su aplicación al campo. En tal aspecto, las empresas, como todas las empresas nacionales, tienen una gran dependencia de la órbita pública para la provisión de la cepa seleccionada. Gracias a la tecnología argentina para producir inoculantes de alta calidad, el país no necesita importar esos productos de Brasil o los Estados Unidos. “Hoy en día, existen limitaciones crecientes al uso de agroquímicos convencionales por sus riesgos ambientales y se vislumbra que eso hará más difícil el uso de estos productos en el futuro y los bioinsumos son la gran vía para el desarrollo de una agricultura sustentable junto con todo aquello que permita la sustitución de productos de síntesis química”. dijo Lema, quien se desempeña como secretario del Comité Asesor en Bioinsumos de Uso Agropecuario del Ministerio de Agricultura de la Nación. Luego de fabricado el inoculante, es indispensable realizar ensayos en invernáculo y en campo en las mismas condiciones en que se usara el producto. En el país existe una gran experiencia en el tema. El IMYZA (INTA Castelar) dispone de una selección de 150 cepas de B. japonicum evaluadas por su eficiencia para distintas condiciones de suelo, clima y variedad. Ellos realizan ensayos en invernáculo y las de mayor eficiencia se prueban en campo. La selección se hace para distintas regiones, considerando los parámetros de nodulación, rendimiento en grano (kg/ha), proteína en grano, proteína total y N en los restos de cosecha. De estos ensayos surge las recomendaciones de cepas altamente eficientes para ser empleadas por los fabricantes de inoculantes nacionales e incluso de otros países. Mecanismos de acción. Las principales ventajas de la inoculación de los cultivos extensivos o intensivos son: Rizobios  Asegura una temprana formación de nódulos que garantizan un adecuado abastecimiento de nitrógeno para el cultivo durante todo su ciclo de crecimiento.  Aporte a la leguminosa más del 70 % del nitrógeno necesario; el resto lo proporcionan el suelo y el fertilizante complementario.  Aumento de los rendimientos.  Mejora la calidad de la cosecha.  A través de la Fijación Biológica del Nitrógeno, enriquece el suelo en nitrógeno que queda en raíces y restos de cosecha, que se incorpora en el laboreo para su descomposición.  Asegura un excelente abono orgánico que aumenta la fertilidad del suelo y los rendimientos de los cultivos siguientes. Azospirillum.  productor de fitohormonas y sideróforos,  mayor masa radical y por ello mayor volumen de suelo explorado que deriva en la posibilidad de captación de agua, cationes, nutrientes en general,

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capacidad de FBN protección contra patógenos mejor nutrición mineral mejor aprovechamiento del fertilizante asociación con otros microorganismos de la rizosfera y efecto sinérgico benéfico.

Micorrizas  mineralización. de la materia orgánica en formas que pueden ser asimiladas por las plantas,  Degradan moléculas complejas como la celulosa, hemicelulosa, pectina, lignina.  Constituyen un depósito de nutrientes ya que forman la mayor parte de la biomasa microbiana.  contribuyen a la formación de agregados estables para mantener la estructura y la calidad del suelo.  En las plantas se produce: incremento en el tamaño, modificaciones anatómicas y morfológicas, cambios en la relación raíz/parte aérea, variación de la estructura de los tejidos radicales y aumenta la longevidad de raíces cortas  Aumenta la absorción y la disponibilidad de nutrientes, especialmente fósforo. nitrógeno y potasio  Mejora la capacidad de la planta para resistir la sequía al facilitar la absorción de agua.  Controla los patógenos y elementos tóxicos para la planta que estén presentes en el suelo; así interaccionan con diversos microorganismos de la micorrizosfera estableciendo provechosas cooperaciones con unos y compitiendo con otros generalmente de tipo patógeno, e incluso interactuando con la microfauna de la rizosfera  En medios ácidos aumenta la resistencia de la planta;  Aumenta considerablemente el radio de la rizosfera.  producen una precocidad en la floración, y fructificación, número de semillas y en la supervivencia.  en fitorremediación de suelo contaminados con metales pesados, se ha comprobado que las plantas micorrizadas tienen un efecto beneficioso,  Xenobióticos y pesticidas: Ciertos hongos degradan herbicidas, como la atrazina y el ácido 2-4 dicloro fenoxiacético.  En suelos deficientes en fósforo, son potencialmente importantes para el funcionamiento adecuado de la fijación simbiótica de nitrógeno por Rhizobium sp, Pseudomonas  Solubilización de fosfatos en el suelo poniéndolo a disponibilidad de la planta.  promueven el crecimiento vegetal, mediante la supresión de microorganismos patógenos más o menos importantes. agente de biocontrol  efectos promotores del crecimiento indirectos, estimulando la acción beneficiosa de otros microorganismos asociados a las raíces, como las micorrizas.

Comercialización de productos a base de microorganismos Resolución 310/1994 SENASA La inscripción de las firmas elaboradoras, fraccionadoras, importadoras o distribuidoras de fertilizantes biológicos y los productos que comercializan serán presentados ante el Área Registros del Instituto Argentino de Sanidad y Calidad Vegetal. Establece los controles que se realizarán a los inoculantes: 1. Marbete; 2. pH del producto; 3. Recuento del número de bacterias viables típicas de la especie a la fecha indicada en el mismo. 1. Marbete. Se consignan los datos del mismo, completos. Los mismos incluyen marca, Firma elaboradora, Número de registro, Fecha de elaboración, Fecha de Vencimiento, otros. 2. pH. De acuerdo a lo estipulado debe tener un valor de 7+/- 0.5. 3. Recuento del NMP(Numero más Probable) de bacterias viables típicas. La Resolución 28/98 del grupo Mercado Común (GMC) establece las condiciones del comercio de los inoculantes entre los países integrantes del MercoSur. Cualidades de un inoculante efectivo • El inoculante deberá contener solo rizobios capaces de producir nódulos y fijar grandes cantidades de nitrógeno con los diferentes hospedantes. Los inoculantes efectivos pueden integrarse con una sola cepa de rizobios (monocepa), o pueden contener varias (multicepa). Los inoculantes monocepas son buenos donde las pruebas de campo han demostrado que una determinada cepa de rizobio se comporta mejor en un hospedante específico o genotipo, en las condiciones del suelo y clima predominantes y cuando los productores siembran generalmente esa determinada variedad o genotipo de leguminosa. Los inoculantes multicepa se prefieren en zonas donde se cultivan muchas variedades o cultivares de leguminosas y donde pueden existir grandes variaciones de suelo o clima. Los inoculantes multicepa deben ser específicos para todos los hospedantes considerados. Si no fuera así, tales cepas pueden impedir la nodulación de rizobios efectivos. • Los inoculantes deben proveer grandes cantidades de rizobios, viables, por lo menos 10.000 a 1x106 por semilla. • El soporte o base del inoculante debe proteger al rizobio en el paquete y sobre la semilla. Debe ser fácil de aplicar y debe adherirse bien a la semilla. • El inoculante debe estar libre de otras bacterias que puedan ser perjudiciales al rizobio o a la planta. • El inoculante debe estar envasado para proteger a los rizobios hasta que sea usado por el productor. El paquete debe permitir el intercambio de gases y la retención de la humedad. • El paquete debe proveer instrucciones claras y una lista de especies de leguminosas que nodula efectivamente. (ver grupos de inoculación cruzada) • El nombre y dirección del fabricante deben estar impresos en el paquete. Requerimientos de identificación La información requerida debe constar en el envase, esta incluye: • Nombre del cultivo para el que el inoculante es efectivo (nombre común y científico).

• Nombre científico de las especies de rizobios que contiene el inoculante. • Número de rizobios viables por gramo de soporte o número de rizobios viables por semilla que el producto provee cuando se usa según las directivas especificadas, al momento del vencimiento. • Fecha de vencimiento, luego del cual, no puede considerarse seguro. • Número de lote para el control de calidad. • Instrucciones de uso. • Peso neto del inoculante. • Marca comercial, fabricante y dirección. • Condiciones de almacenamiento requeridas, recordar que es un producto perecedero. Los inoculantes para leguminosas son perecederos y pueden perder efectividad al ser expuestos a temperaturas de 40ºC o mayores por unas pocas horas. Los inoculantes de alta calidad deberían retener su efectividad durante 6 meses o más cuando se almacenan a 20ºC aproximadamente. Este período puede extenderse si el inoculante es refrigerado a 4ºC aproximadamente. Debería alertarse sobre el efecto perjudicial de las altas temperaturas en los inoculantes. También es perjudicial el congelamiento pues puede dañar las membranas de las células de rizobios. Cualidades de un inoculante efectivo Ejemplo: Condiciones de un buen inoculante líquido acuoso para soja Un buen inoculante líquido acuoso para soja debe cumplir con los siguientes requisitos: Debe aportar aproximadamente de 10.000 a 1x106 bacterias vivas por semilla en el 9

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momento de inocular. La concentración estándar exigida es de 10 bacterias/cm en 8

el envasado y de 10 a la fecha de vencimiento. En la medida de lo posible, debe estar libre de contaminantes. Debe ser de aplicación sencilla. El soporte o base del inoculante debe proteger al rizobio en el paquete y sobre la semilla. Debe ser fácil de aplicar y debe adherirse bien a la semilla. El inoculante debe estar libre de otras bacterias que puedan ser perjudiciales al rizobio o a la planta. El inoculante debe estar envasado para proteger a los rizobios hasta que sea usado por el productor. El paquete debe permitir el intercambio de gases y la retención de la humedad. Envase La mayoría de los fabricantes de inoculantes para leguminosas utilizan un envase de material flexible tal como el polietileno, que retiene la humedad y permite el intercambio de gases. Los materiales que no permiten la difusión del oxígeno y el anhídrido carbónico no son apropiados. El espesor del material puede variar entre 0.027 y 0.076 milímetros, para proveer adecuada resistencia y soportar las condiciones de embarque. Si la contaminación no es un problema y se practican poros de respiración, puede utilizarse polietileno de alta densidad. Inoculación de sachets Para inocular se usa el cultivo proveniente de los fermentadores, este cultivo debe contener de 5x108 a 20x108 microorganismos/ml.

Recordar que el tiempo de generación de Rhizobium de crecimiento rápido es de 3 horas y de Bradyrhizobium (crecimiento lento) es de 10 horas. La inoculación se efectúa en condiciones de esterilidad, se agrega con una jeringa estéril. Luego de la inoculación cerrar el orificio, por donde se inoculó, con cinta adhesiva. Homogeneizar el conjunto turba mas inóculo. Identificar el sachet: con la fecha de fabricación, el nombre de la cepa, su especificidad y el peso del inóculo. Maduración, finalizada la inoculación se puede mantener a temperatura ambiente durante una semana para permitir la maduración del inóculo. En este momento es importante determinar las condiciones de sobrevivencia de los rizobios para determinar la fecha de vencimiento. Posteriormente almacenar a 5ºC. Control de inoculantes (REDCAI) La calidad de inoculantes refiere a la totalidad de parámetros que debe reunir un producto o un servicio para cumplir con el fin para el que fue fabricado o desarrollado. El SENASA es el ente nacional que establece la normativa y los parámetros a los que deben ajustarse los inoculantes para su comercialización; la Resolución N° 0264/2011 sostiene que la concentración mínima de rizobios viables por gramo o mililitro de inoculante al vencimiento debe ser de 1x108 UFC/ml o gr y el porcentaje mínimo de nodulación igual al 80%. La calidad de un inoculante se puede evaluar mediante: 1) el recuento en placa en medio de cultivo selectivo de rizobios por unidad de producto; 2) el recuento de rizobios sobre semilla inoculada, recuperando en medio de cultivo el aporte de microorganismos a la semilla durante la inoculación; 3) evaluar la capacidad de formar nódulos mediante el método de “porcentaje de plantas noduladas” (Test de Burton).

Control de la calidad de inoculantes sobre soporte estéril Objetivos de los métodos de control 1. Comprobar que la semilla tiene un número suficiente de rizobios efectivos. 2. Comprobar la sobrevivencia de la bacteria en el soporte. La cantidad de microorganismos contenidos en el inoculante es fundamental y ello es uno de los factores que condiciona el éxito de la inoculación. Un inoculante debe proveer a la semilla un número máximo de células viables de una cepa seleccionada y específica de rizobios. El inoculante de alta calidad debe estar libre de contaminantes y poseer un alto número de rizobios capaces de nodular rápidamente en el cultivo inoculado además de permitir que el 100% de las plantas nodulen antes de los primeros 10 días de emergencia en el caso de las plántulas de soja. A través de la Resolución 310/94 se designa como ente fiscalizador al Servicio Nacional de Sanidad Agropecuaria (SENASA) y se establecieron las características que deben reunir los fertilizantes biológicos, incluyendo los inoculantes para leguminosas. Todos los productores de inoculantes deben inscribirse en el SENASA debiendo constar el número de inscripción en el marbete del producto. Esta institución tiene poder legal, incluso, para suspender la venta de productos no autorizados. Estableció los siguientes límites: Dosis de inoculación

• Semilla grande 200 gr de inoculante, deben mezclarse con 25 kg de semilla. • Semilla pequeña 200 gr de inoculante, deben mezclarse con 50 kg de semilla. La concentración estándar exigida debe alcanzar en el recuento en semillas sobre soporte sólido estéril o semilla preinoculada al vencimiento: • Un mínimo de 200 rizobios por semilla pequeña • Un mínimo de 80x103 rizobios por semilla grande El recuento en semillas sobre soporte líquido debe llegar a: • 103 rizobios /semilla pequeña • 105 rizobios /semilla grande Recuento en soporte turba para semilla grande y pequeña, soporte no estéril. • Para soporte recién inoculado al momento de la elaboración debe contener 109 bacterias específicas por gr de soporte. • Al momento del vencimiento debe contener 108 bacterias específicas por gr de soporte. La tecnología de inoculantes es una temática en estudio permanente y producto del avance en el conocimiento. Este conocimiento es el resultado de la acción de organismos públicos de investigación y de empresas privadas que han estado, por estos años, abocados a la temática e interactuando con los productores. Si bien los inoculantes dominan el mercado local, impulsados por la revolución sojera a partir de la década del 70, también existen otros productos de origen biológico que cada vez ganan más terreno dentro de un nicho en expansión, destacados por sus beneficios productivos, ambientales y mayor efectividad. Para la agricultura, el uso de bioinsumos se volvió una prioridad, ya que son productos con un gran potencial para aumentar la industrialización, el agregado de valor en origen y el cuidado del medio ambiente La cátedra de Microbiología Agrícola a través del laboratorio LABOCOIN (Laboratorio de Control de Calidad de Inoculantes) realiza tareas de investigación y servicio poniendo a disposición de todos los actores del sector agropecuario vinculados con la temática, la metodología de referencia para el control de calidad de todos los productos mencionados. Integrando la Comisión Coordinadora y la red de laboratorios de la REDCAI (Red Argentina de Calidad de Inoculantes), desde la Asociación Argentina de Microbiología trabajamos desde 2005 para la estandarización y validación de protocolos de referencia como herramientas para un control de calidad cada vez más eficiente. Los miembros investigadores del equipo, sito en el Campo Experimental de la Facultad de Agronomía y Zootecnia en Finca El Manantial (FEM), son profesionales en el área de Microbiología Agrícola, con proyectos de investigación básica, aplicada y de transferencia subsidiados; por lo que se atiende en un área de vacancia del NOA la calidad y competitividad de los productos (inoculantes biológicos) o servicios que las empresas e industrias brindan al mercado nacional e internacional destinados a una agricultura sustentable, ecológica y no contaminante. Las partes involucradas en los sistemas de producción, comercialización, fiscalización y uso de inoculantes requieren de elementos de comparación y /o evaluación técnica confiable y reproducible que permitan determinar y evaluar la calidad de un producto aplicando los protocolos establecidos por la red de calidad de inoculantes en la República Argentina (REDCAI), red a la que pertenecen los miembros del LABOCOIN.

El LABOCOIN está actualmente trabajando para cumplir gradualmente con los requisitos generales que hacen a la competencia de los laboratorios de ensayo y de calibración de acuerdo a la NORMA ISO 17025 y acreditar, los análisis referentes a inoculantes de leguminosas, bacterias solubilizadoras de fosfatos e inoculantes a base de micorrizas arbusculares. Se ajusta en un todo a los protocolos elaborados y en elaboración por la REDCAI – INTERLAB (dependiente de la Asociación Argentina de Microbiología Agrícola, Subdivisión Ambiental y de Suelo) los que son monitoreados en forma permanente a fin de homologar los métodos con los otros laboratorios de la red en el país y expresar los resultados en forma normatizada. Esta labor es pionera en la Universidad Nacional de Tucumán y una de las políticas del laboratorio es establecerse como un Centro de Referencia para analizar la calidad de los inoculantes provistos por diversas empresas del medio, a los productores agropecuarios. Procedimientos y determinaciones que se realizan en el LABOCOIN: -

Determinación del pH de los inoculantes Determinación de presencia de contaminantes en inoculantes Recuento en placa de UFC de inoculantes a base de rizobios para leguminosas Recuento en placa de UFC de inoculantes a base de Azospirillum Recuento en placa de UFC de inoculantes a base de Pseudomonas Test de Burton modificado para verificación de nodulación según criterios INTA y SENASA

Bibliografía Albanesi, A S.; Benitente S; Cassàn F; Perticari, A . 2012 . Manual de procedimientos microbiológicos para la evaluación de inoculantes. REDCAI. Argentina - ISBN 978-98726716-4-8 García Arango, G. A. 2009. Las biofábricas desde el derecho comercial colombiano. En.: Jurídicas, Vol. 6, Núm. 1pp. 97-116. Universidad de Caldas. Colombia. Somasegaran, P.; Hoben, H. J. 1994. Handbook for Rhizobia . Methods in LegumeRhizobium Technology. NIFTAL. Hawai. USA. Toresani S. y Rossi Alejandro. 2012. Anexo I- Legislación. En: Manual de procedimientos microbiológicos para la evaluación de inoculantes. REDCAI. Argentina.

Las el derecho comercial colombiano