CITOQUÍMICA II Trabajo Práctico Nº 8

2013

APLICACIÓN

• Síndromes Mieloproliferativos Crónicos

• Síndromes Linfoproliferativos Crónicos • Síndromes mielodisplásicos

LEUCEMIA MIELOIDE CRÓNICA

Cromosoma “Filadelfia”: Traslocación recíproca t(9;22) Gen de fusión BCR-ABL

Fosfatasa Alcalina Granulocítica  Muestra:

frotis de sangre conservado en heladera

periférica

reciente

o

 Procesar, SIEMPRE, en paralelo un frotis control

conservado en idénticas condiciones. Fijador frio. Fundamento: α naftil fosfato ácido de sodio (veronal sódico pH 9)

FAG

α naftilo + fostato Fast Blue RR precipitado negro Contracolor-verde de metilo

FOSFATASA ALCALINA GRANULOCÍTICA

Grado 1

Grado 0

Grado 3

Grado 2

Grado 4

FOSFATASA ALCALINA GRANULOCÍTICA ¿ Cómo se determina el score de una muestra ?

Observar 100 neutrófilos y establecer la intensidad de reacción de cada uno. Multiplicar el n° de neutrófilos por su grado de intensidad Sumar el resultado V. de Ref = 95 +/- 20 Grado

Neutrófilos observados

0

30

X

0

0

I

25

X

1

25

II

30

X

2

60

III

10

X

3

30

IV

5

X

4

20

TOTAL: 100

Intensidad de reacción

135

= SCORE

FOSFATASA ALCALINA GRANULOCITICA: UTILIDAD

FAL control

Score disminuido o nulo en la LMC Score aumentado en reacciones neutrofílicas secundarias.

Otras causas de score aumentado y disminuido

POLICITEMIA VERA SANGRE PERIFÉRICA

Hemoglobina aumentada

Leucocitosis (neutrofilia-ocasional aumento de mielocitos y metamielocitos)

Basófilos

Descartar poliglobulias secundarias

FROTIS DE UN PACIENTE CON POLICITEMIA VERA

MUTACIÓN JaK 2 V617F

TROMBOCITEMIA ESENCIAL

Trombocitosis marcada Plaquetas dismórficas y macroplaquetas Leucocitosis

MIELOFIBROSIS PRIMARIA

Punción aspiración de MO es dificultosa, DRY TAP por fibrosis Hiperplasia granulocítica y megacariocítica, las células eritroides están normales o aumentadas Aumento de fibras reticulínicas y colágeno

PRESENCIA DE LEUCOERITROBLASTOSIS

SÍNDROME LINFOPROLIFERATIVOS CRÓNICOS

LEUCEMIA DE CÉLULAS VELLOSAS(TRICOLEUCEMIA)

FOSFATASA ÁCIDA LEUCOCITARIA 



Fosfomonoesterasa con actividad a pH 4,7 - 5,0

Presente en los lisosomas de: mielocitos, neutrófilos, linfocitos, células plasmáticas, megacariocitos, plaquetas, monoblastos, promonocitos, monocitos y macrófagos.

FOSFATASA ÁCIDA LEUCOCITARIA Método de LoeffLer modificado Fundamento α naftil fosfato ácido de sodio (citrato a pH 4,9)

FAL

α naftilo + fosfato

Fast Garnett (granate fijo)

Gránulos rojo-parduzcos citoplasmáticos

FOSFATASA ÁCIDA LEUCOCITARIA Aplicación diagnóstica Diferenciar población linfocítica: LT (++++) de LB (+ débil/-)

Excepción: Tricoleucemia (++++) tartrato Resistente

TRICOLEUCOCITOS: FOSFATASA ACIDA LEUCOCITARIA TARTRATO RESISTENTE

Con acido tartárico

β-GLUCURONIDASA Enzima lisosómica presente en los leucocitos y en la serie roja excepto los hematies. Fundamento Naftol AS-BI β-D glucurónido β-glucuronidasa

Pararosanilina hexazotizada

Naftol AS-BI-HPR (complejo cromogénico insoluble Rojo)

β-GLUCURONIDASA Resultados Se observa: patrón focal o granular difuso de color rojo. Reacción Positiva: timocitos maduros, LT circulantes y LB inmaduros Reacción Negativa: monocitos y granulocitos

Corre en paralelo con la fosfatasa ácida, excepto en los tricoleucocitos (F.acida aumentada y β-glucuronidasa disminuída)

LEUCEMIA LINFÁTICA CRÓNICA(LLC)

Sombras de Gumprecht

LLC-INMUNOFENOTIPO

MICOSIS FUNGOIDE/SÍNDROME DE SEZARY

LEUCEMIA/ LINFOMA T DEL ADULTO

LINFOMAS NO HODGKIN B LEUCEMIZADOS

SÍNDROME MIELODISPLÁSICOS

Son un grupo de enfermedades clonales que se caracterizan por una hematopoyesis inefectiva y displásica

Delección de la peroxidasa

Síndromes mielodisplásicos Displasia de la serie granulocítica

Displasia en la serie eritroide

Displasia en la serie Megacariocítica

Reacción de Perls – Sideroblastos en anillo

CASO CLÍNICO INTEGRADOR

MIELOPEROXIDASA

REACCIÓN DE PAS

FOSFATASA ACIDA LEUCOCITARIA

LEUCEMIA LINFOBLÁSTICA AGUDA LINAJE T