TEÓRICO PRÁCTICO PRUEBAS BÁSICAS Y ESPECIALES PARA EL ESTUDIO DEL SISTEMA DE COAGULACION Determinación Interpretación Valores de Referencia

BIOQUÍMICA CLÍNICA I. INSTITUTO DE BIOQUÍMICA APLICADA. FACULTAD DE BIOQUÍMICA, QUÍMICA Y FARMACIA. UNT.

SISTEMA HEMOSTÁTICO

• Pared Vascular • Plaquetas • Sistema de coagulación • Sistema fibrinolítico

Pruebas globales Plaquetas: Tiempo de sangría, Retracción del coágulo Sistema de Coagulación: -Vía extrínseca: Tiempo de Protrombina -Vía intrínseca: Tromboplastina Parcial Activada -Vía final común: Tiempo de Stypven -Pasaje de Fibrinógeno a Fibrina: Tiempo de trombina, Tiempo de Reptilasa. Sistema Fibrinolítico: Lisis de euglobulinas Lisis de sangre entera Endotelio vascular: Prueba de oclusión venosa

Pruebas Globales de Coagulación TTPA XII

XI

TP VII

IX

Factor tisular

VIII

Fosf. Ca++

X

Ca++

V II

IIa (Trombina)

Fibrinógeno

Fibrina soluble

XIII

IIa

Ca++

XIIIa

Fibrina estable

TT

Evaluación de la Hemostasia

• ANAMNESIS Antecedentes familiares Antecedentes personales Fármacos, hábitos dietéticos, etc • CLÍNICA Hemorrágica

Trombótica

Pruebas de laboratorio Variables a tener en cuenta

• Pre-analíticas • Analíticas

• Pos-analíticas: Interpretación de los resultados

Variables preanalíticas • Ayuno

• Condiciones del paciente

• Horario de extracción • Reposo • Anamnesis • Tubos de plástico limpios • Anticoagulante (Citrato de Sodio 3,2 %)

• Elección de material

Proporción 1:10 (1 parte de anticoagulante + 9 partes de sangre) • Proporción Hto/anticoagulante

Volumen de citrato Respetar la proporción de sangre anticoagulante

1,0

Citrato de sodio

1,0 1,7

5,5

Plasma 7,3

3,5

sangre = 9 x citrato de sodio (ml) x entera (ml)

0,55 (1,00 - Hto. del paciente)

Volumen de citrato variable Hto. (%) 10 20

Vol. Total (ml) 5 5

Citrato (ml) 0,75 0,70

25-50 55 65

5 5 5

0,50 0,40 0,35

75

5

0,25

Debe corregirse la proporción de citrato para hematocritos < de 25 % y > de 50 % Se debe rechazar toda muestra mal enrasada

Variables preanalíticas

• Técnica de punción

• Obtención de plasma pobre en plaquetas

• Almacenamiento de la muestra

Temp: 4ºC o baño de hielo Tiempo: 4 hs Condición: tapado Llevar a Temperatura ambiente previo al procesamiento

TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPA)

PPP +

Cefalina o Inositina

+

Caolín o Celite

+

Calcio

Tiempo (segundos)

coágulo

¿ Qué es el reactivo de TTPA?

Extractos de fosfolípidos Cerebro humano Cerebro de conejo Vegetales Granos de soja

Activadores -Particulados: - caolín - celite - sílica micronizada -No particulado: - ácido elágico

¿Qué debemos exigir del TTPA?

• Que sea sensible a déficit moderado y leve, hereditario o adquirido de la vía intrínseca (VIII; IX; XI y XII). • Que sea sensible a inhibidores específicos de factores y a inhibidores de interferencia (tipo lúpico).

• Que sea sensible a la presencia de heparina no fraccionada en dosis terapéuticas.

TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADO (TTPA)

Trabajar en baño termostatizado a 37°C

Técnica:

Disparar cronómetro

3 min 37ºC -100 µl Reactivo de TTPA -100 µl PPP

100 µl calcio

Realizar la prueba por duplicado

Formación de coágulo

¿Cómo informo un TTPA?

1. Tiempo (Segundos) depende del reactivo, el método utilizado y del lote. VR: 35-45 segundos Rango de referencia normal del TTPA -Media ± 2 DS de individuos normales saludables (incluye el 95% de los valores de la población normal). -Se deben utilizar entre 50-100 normales para establecer el rango de referencia normal. TTPA paciente normal la TTPA terapéutica con heparina

Razón =

2. Razón: control de

Alteraciones del TTPA

XII

XI

IX VIII

X Deficiencia cualicuantitativa

Ca++

V II Fibrinógeno

IIa (Trombina) Fibrina soluble

¿Qué hacer ante un TTPA prolongado? Pruebas de corrección del TTPA con plasma normal Se realiza TTPA a: • PPP paciente • PPP normal • Mezcla: 1 vol plasma paciente + 1 vol plasma normal Índice de Rossner

=

TTPA (mezcla) - TTPA (Normal) TTPA (Paciente)

“No corrige” > 0,1

Presencia de Inhibidores o Heparina

“Corrige” < 0,1

Déficit de factores

TIEMPO DE QUICK O TIEMPO DE PROTROMBINA (TP)

PPP

+

Tromboplastina

+ Calcio

Tiempo (segundos)

coágulo

Tromboplastina REACTIVO BASE

Extracto de tromboplastina (Fact. Tis.: apoproteína + fosfolípidos)

EXTRACTOS DE FT

Cerebro de conejo Cerebro humano Cerebro bovino Cerebro de mono Pulmón de conejo Placenta humana

FT RECOMBINANTES

FT humano recombinante combinado con fosfolípidos sintéticos o purificados.

CÁLCICAS / NO CÁLCICAS

¿Qué debemos exigir del TP?

• Que sea sensible al déficit moderado y leve de factores de la vía extrínseca: es más sensible al déficit de X, VII y V que al déficit de factor II. • Que sea sensible a la presencia de PIVKA (proteínas inducidas en ausencia o antagonistas de la vitamina K) para pacientes con anticoagulantes orales. • Que sea sensible a inhibidores de la vía extrínseca.

TIEMPO DE QUICK O TIEMPO DE PROTROMBINA (TP)

Trabajar en baño termostatizado a 37°C

Técnica:

1 min 37ºC 100 µl PPP

Disparar cronómetro 200 µl Tromboplastina cálcica

Realizar la prueba por duplicado

Formación de coágulo

¿Cómo se informa el TIEMPO DE PROTROMBINA?

1. Tiempo (Segundos): Valores de referencia entre 11-14 segundos. 2. Razón TP paciente/TP Normal: Valores de referencia