PREPARACIÓN DE REATIVOS/LAB. BIOQUÍMICA 12 de agosto de 2015 1. Azul de bromotimol (100mg/L) 2. Rojo congo (100mg/L) 3. Permanganato de potasio (100mg/L) 4. Acido acético 5% 5. Amortiguador de fósfato 0.2M pH 7.5 6. Acido tricloroacético al 5% 7. Cloruro de sodio al 10% 8. Cloruro de sodio 0.15 M 9. Reactivo de orcinol 10. Sulfato de cobre 0.1M 11. Hidróxido de sodio 10 M 12. Amortiguador salino 13. Nitrito de sodio 10g/L 14. Nihidrina 0.2% en etanol o acetona 15. Nihidrina 1% en etanol o acetona 16. Alanina 0.1% 17. Leucina 0.1% 18. Fenilalanina 0.1% 19. Tirosina 0.1% 20. Cisteina 0.1% 21. Acido aspártico 0.1% 22. Metionina 0.1% 23. Prolina 0.1% 24. Glicina 0.1% 25. Triptófano 0.1% 26. Fenol 0.1% 27. Asparagina 0.1% 28. Solvente de cromatografía 29. Nitroprusiato de sodio 2% 30. Mezcla de aminoácidos (Ala, Leu y Asp) 31. HCl 9N 32. Cloruro de sodio 20% 33. Acido tricloroacético 50% 34. Hidróxido de sodio 5M 35. Ácido nítrico 20% Grupo 1: Prepara los reactivos 1, 7, 13, 19, 25 y 31 Grupo 2: Prepara los reactivos 2, 8, 14, 26 y 32 Grupo 3: Prepara los reactivos 3, 9, 15, 21, 27 y 33 Grupo 4: Prepara los reactivos 4, 10, 16, 22, 28 y 34 Grupo 5: Prepara los reactivos 5, 11, 17, 23, 29 y 35 Grupo 6: Prepara los reactivos 6, 12, 18, 24, 30
Preparar 200 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 200 ml Preparar 300 ml Preparar 500 ml Preparar 200 ml Preparar 200 ml Preparar 200 ml Preparar 200 ml Preparar 300 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 400 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 200 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml Preparar 100 ml
Reactivo de Orcinol: Se disuelven 0.1 g de FeCl3 en 100 ml de HCl y se mezclan con 3.5 ml de etanol que llevan disueltos 0.3 g de Orcinol. Amortiguador salino: Se mezclan citrato de sodio 0.015 M y NaCl 0.15 M en volúmenes iguales. Lugol: Para 500 ml, pesar 0.83 g de KI y disolver en agua. Agregar 1.3 g de Yodo metálico. Agitar fuertemente. Ninhidrina 0.2%: Ninhidrina 0.6 g y disolver en 300 ml, de acetona. La acetona puede reemplazarse por etanol, etanol o isopropanol. Solvente para la cromatografía: Para 800 ml, se mezclan 640 ml de etanol, 80 ml de agua destilada y 80 ml de amoniaco. Mezcla de aminoácidos: (Alanina, leucina y ácido aspártico 0.1 g de cada aminoácido y llevar a 100 mL en un matraz aforado.
PREPARACIÓN DE SOLUCION BUFFER FÓSFATO EN DIFERENTES PH Solución stock A: (0.2 M NaH2PO4) Disolver 27.6 g NaH2PO4 llevar a 1 L con agua destilada. Solución stock B: (Na2HPO4) Disolver 28.4g de Na2HPO4 y llevar a 1 L con agua destilada. PH
%A
%B
PH
%A
%B
5.8 5.9 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8
92.0 90.0 87.7 85.0 81.5 77.5 73.5 68.5 62.5 56.5 51.0
8.0 10.0 12.3 15.0 19.5 22.5 26.5 31.5 37.5 43.5 49.0
6.9 7.0 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8
45.0 39.0 33.0 28.0 23.0 19.0 16.0 13.0 10.5 8.5
55.0 61.0 67.0 72.0 77.0 81.0 84.0 87.0 89.5 91.5
NOTA: Pedir con anticipación todos los materiales que necesiten, incluyendo en cada laboratorio un frasco lavador. Los reactivos siempre los pide el profesor.
