Carrera de Especialización en Bacteriología Clínica UNNE. Junio 12-13

Salmonella spp. Características microbiológicas María Rosa Viñas Enterobacterias INEI-ANLIS “C.G.Malbrán”


Nomenclatura y Taxonomía, ordenamiento en conjuntos y subconjuntos que resultan del estudio de caracteres morfológicos, bioquímicos, antigénicos y genéticos comparados con las propiedades de la cepa tipo

Familia Enterobacteriaceae

14 Géneros ( de relevancia)

Escherichia Shigella Salmonella Edwarsiella Citrobacter Klebsiella Enterobacter Serratia Hafnia Proteus Morganella Providencia Yersinia Erwinia

Familia Enterobacteriaceae

GENERO: Salmonella













La salmonelosis es considerada enfermedad zoonótica zoonótica,, en el ciclo de infección interviene tanto el hombre como animales domésticos y salvajes. Salmonella con variaciones en serovariedades influenciada por factores: clima, densidad poblacional, prácticas agroganaderas agroganaderas,, técnicas de elaboración de los alimentos y hábitos de consumo. La tasa de incidencia de la infección es mayor en los lactantes y niños de corta edad . Epidemiológimente el 60 % - 80% de los casos son esporádicos , y asociados a grandes brotes comunitarios por consumo de alimentos principalmente de origen animal.




Las infecciones hospitalarias (IH) son causa frecuente de morbimortalidad entre pacientes hospitalizados hospitalizados..




Como parte de la vigilancia desde el laboratorio, laboratorio, se analiza los datos del LRN en cuanto la prevalencia de Salmonella spp. que es importante para el monitoreo de la zoonosis

En la Vigilancia basada en Laboratorio, las Redes vinculadas a diarreas y ETA son: *Red Nacional de Diarreas y Patógenos Bacterianos de Transmisión Alimentaria: 48 referentes jurisdiccionales de diarreas y 17 de alimentos. Se remiten para caracterización un porcentaje de aisl. humanos de Shigella spp. (20%), Campylobacter spp. , Salmonella spp. (20%) y todos los aislamientos de brotes. *Red para la Vigilancia de la Resistencia a los Antimicrobianos (WHONET- ARG): 90 laboratorios distribuidos por todo el país, realizan pruebas de sensibilidad antimicrobiana a bacterias de origen clínico. - Campylobacter spp. se realiza vigilancia activa por el método de dilución en agar de los 5 primeros aislamientos de cada mes que los laboratorios envían al LRN. - Salmonella sp. y Shigella spp. con fenotipos poco habituales que se estudian para establecer los mecanismos de resistencia.

S. ser. Enteritidis, S. ser. Typhimurium, Typhimurium, S. ser. Newport y S. ser. Infantis en Argentina (1986 (1986--2012 2012)) LRN 600

Nº de aislamientos

500 400 300 200 100 0

Años S.Enteritidis

S. Typhimurium

S. Infantis

S. Newport

* En el período 07-12 S. Typhimurium fue la serovariedad que se aisló con mayor frecuencia en humanos, duplicando a S. Enteritidis.

TAXONOMIA DEL GENERO Salmonella El Género Salmonella comprende 2 especies: Salmonella enterica que se divide en 6 subespecies: Salmonella enterica subespecie enterica (I) Salmonella enterica subespecie salamae (II) Salmonella enterica subespecie arizonae (IIIa) Salmonella enterica subespecie diarizonae (IIIb) Salmonella enterica subespecie houtenae (IV) Salmonella enterica subespecie indica (VI) Salmonella bongori (V)


Las subespecies de Salmonella enterica y especie de S. bongori se subdividen en más de 2400 serovariedades: asociaciones de factores antigénicos somáticos O y flagelares H.  Las serovariedades de Salmonella enterica subespecie enterica (99,5%) se designan con un nombre, relacionado con el lugar geográfico donde se aisló la 1ra cepa de la nueva serovariedad (se escribe con letras romanas, no en itálica y la primer letra con mayúscula. Ej. Salmonella ser. Typhimurium ó Salmonella Typhimurium; Salmonella ser. Orán).

 Las serovariedades de las otras subespecies de: Salmonella enterica y las de Salmonella bongori (muy escasas en patología humana y veterinaria) se designan con su fórmula antigénica. Ej. Salmonella IV 50 : b : - ;Salmonella IV 44 : a : -.


Los miembros del género Salmonella se pueden clasificar en tres grupos:  Los que no tienen preferencia por algún huésped, por lo que infectan tanto al hombre como los animales. Ej: mayoría de las serovariedades asociadas a salmonelosis.

 Los que infectan sólo al hombre, ej: Salmonella Typhi, Salmonella Paratyphi A y Salmonella Paratyphi C.

 Los que están adaptados a un huésped animal. Ej: Salmonella Gallinarum, a las aves ( tifus aviar); Salmonella Abortusovis a los ovinos, S. Abortusequi a los equinos, etc

Salmonelosis: Manifestaciones Clínicas La enfermedad en el hombre Gastroenteritis Septicemia, localizaciones extraintestinales (orina, bilis, abcesos abcesos)) y fiebre entérica ( sangre), en pacientes inmunocomprometidos inmunocomprometidos.. Dosis infectiva: a partir de 103 microorganismos Período de incubación: 6 a 72 hs, hs, la gastroenteritis persiste de 24 a 72 hs.

La enfermedad en los animales Puede manifestarse clínicamente ó no Forma subclínica subclínica:: el animal puede tener una infección latente: patógeno en sus ganglios ó ser portador y eliminar en forma transitoria, intermitente o persistente Entidades clínicas en animales domésticos: debidas a serov. serov. adaptadas a especies, por ej. : Salmonella Gallinarum Gallinarum,, Salmonella Abortusequi

ESQUEMA DEL MECANISMO DE PATOGENESIS


La capacidad de Salmonella de( “ruffling “ membrana, reorganización del citoesqueleto, interferencia de señales de transducción, replicación intracelular ,apoptosis del macrófago, respuesta inflamatoria y secreción de fluídos) a través de proteínas que forman parte del sistema de secreción tipo III codificadas en una isla patogenicidad SPI-1e interaccionar y entrar a la celula huésped

Factores de virulencia de Salmonella Sistema de Secreción de tipo III - El gen inv A se encuentra dentro de la isla de patogenicidad 1 (SPI (SPI--1), segmento de 40 kb presente en el cromosoma de Salmonella spp spp., ., y codifica para un factor de invasividad (SsIII) SsIII)

Marlovits T.C., Kubori, T., Tejero, M.-L., Thomas, D ., Unger V.M., and Galan, J.E. (2006). Assembly of the inner Rod determines Needle Length in the Type III Secretion Injectisome. Nature 441, 637-640.

Salmonella: Vías de transmisión ALIMENTOS p/ANIMALES CONTAMINADOS

HOMBRE

Recontaminación de constituyentes Alimenticios (harina de hueso)

Mamíferos Aves Peces Reptiles Insectos

ANIMALES INFECTADOS

HOMBRE AGUA CONTAMINADA (RIO, RIEGO, ETC.)

VEGETALES Desechos contaminados

Mataderos contaminados

ALIMENTOS DE ORIGEN ANIMAL Y VEGETAL HOMBRE

HOMBRE

ALIMENTOS MANUFACTURADOS

ANIMALES



Epidemiológicamente las infecciones por Salmonella asociados a brotes en hospitales, jardines maternales, geriátricos, restaurantes principalmente de origen alimentario, puede ocurrir transmisión persona a persona.



El estudio epidemiológico de los brotes señalan que los alimentos más frecuentemente involucrados son: carne y sus derivados, huevos y alimentos lácteos.



Entre otros alimentos asociados a infección por Salmonella : ensaladas crudas, frutas, mayonesa, fiambres, confituras (chocolate, tortas), hierbas y especias, harina de hueso como alimento para animales, aguas contaminadas,entre otras.

Salmonella spp. Salmonella spp. es un patógeno de transmisión alimentaria (PTA) ampliamente reconocido. Incorporado su búsqueda, en el área Clínica como en Bromatología y Veterinaria, el aislamiento e identificación. 

 Es necesario fortalecer la vigilancia integrada de este PTA desde el Laboratorio en las distintas áreas, en conjunto con los componentes de Clínica y Epidemiología

“Reglas de Oro" de la OMS para la preparación higiénica de los alimentos. * La

OMS estima que las enfermedades causadas por alimentos contaminados constituyen uno de los problemas sanitarios más difundidos en el mundo de hoy. 

1. Elegir los alimentos tratados con fines higiénicos

2. Cocinar bien los alimentos  3. Consumir inmediatamente los alimentos cocinados  4. Guardar cuidadosamente los alimentos cocinados  5. Recalentar bien los alimentos cocinados  6. Evitar el contacto entre los alimentos crudos y los cocinados  7. Lavarse las manos a menudo  8. Mantener escrupulosamente limpias todas las superficies de la cocina  9. Mantener los alimentos fuera del alcance de insectos, roedores y otros animales  10. Utilizar agua pura. Aplicándo reglas sencillas, reducirá considerablemente el riesgo de las enfermedades de origen alimentario. 

Diagnóstico y caracterización de enteropatógenos bacterianos desde el LRN Muestra (origen humano, alimento, animal) Servicio Enterobacterias

Aislamiento

Tamizaje o “Screening”

Diagnóstico preliminar

 Identificación  Tipificación fenotípica y genotípica (serotipificación, R a ATB, factores de virulencia)

Diagnóstico confirmado

 Subtipificación fenotípica y genotípica

Monitoreo, investigación de brotes

Análisis y comunicación de resultados Vigilancia de Enteropatógenos asociados a ETA Prevención y control de brotes

FIGURA 1.- FLUJOGRAMA DE AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA DE SALMONELLA spp. A PARTIR HECES Camino II

MATERIA FECAL (HISOPO)

Camino I Suspensión en solución fisiológica

1er. día

Aislamiento en medios selectivos y diferenciales (2)

Caldo de enriquecimiento (1) 18-24 hs, 37ºC Aislamiento en medios selectivos y diferenciales (2)

Colonias típicas (3)

2do. día TSI

LIA

Estría

18-24 hs, 37ºC

3er. día

PCR Múltiple para Ag somáticos y flagelares

Colonias típicas (3)

TSI

LIA

Serotip. O (6)

Lectura (4)

P. bioq. (5)

Estría

Caldo Flagelar

18-24 hs, 37ºC

Lectura (4)

Serotip. O (6)

Lectura

Serotip. H

4to. día P. bioq. (5) •1- Caldo selenito •2- Agar MacConkey y agar SS, o agar Hektoen, o agar xilosa lisina desoxicolato, o agar verde brillante. .3- Se seleccionan de 2 a 3 colonias. •4- Si TSI y LIA dan resultados compatibles con Salmonella, se siembran Pruebas bioquímicas complementarias (P.bioq.) y se realiza la serotipificación O (Serotip. O) •5- Pruebas bioquímicas complementarias: RM-VP, decarboxilasas, dulcita, malonato. •6- Serotipificación. Si la serotipificación somática O de las colonias, la serotipificación flagelar H debe hacerse en una sola de ellas.

Características bioquímicas de Salmonella spp. para la identificación 

Bacilos Gram negativos, no fermentadores de lactosa.

 Son móviles por medio de flagelos perítricos con excepción de Salmonella Pullorum y Salmonella Gallinarum.  Fermentan glucosa con producción de ácido y gas (exc . S. Typhi). También fermentan L-arabinosa, maltosa, D-manitol, D-manosa, L-ramnosa, D-sorbitol, trehalosa, D-xilosa y D-dulcita.  Son oxidasa negativo, catalasa positivo, indol y VogesProskauer (VP) negativo y Lisina decarboxilasa, Rojo de Metilo (RM), citrato de Simmons positivo, urea negativo y producen SH2.

Pruebas bioquímicas de Salmonella enterica subesp.. enterica (I) (a partir de Medios selectivos y diferenciales : subesp agar XLD, agar SS, colonias típicas en TSA, TSI :K/A c /SH2 e LIA: K/K) Pruebas bioquímicas

Salmonella enterica subesp. enterica (I)

Fermentación de lactosa *** ONPG Producción de SH2 Fermentación de glucosa *** Fermentación de dulcita *** Fermentación de adonita *** Decarboxilación de lisina ** Decarboxilación de ornitina ** Hidrólisis de arginina ** Hidrólisis de urea ** Producción de indol Hidrólisis de gelatina **** Reacción de rojo de metilo * Reacción de Voges Proskauer * Citrato de Simmons ** Utilización de malonato *

+ +/con gas + + + + + + -

*Lectura a los 2 días; ** Lectura hasta los 4 días; *** Lectura hasta los 7 días; **** Lectura hasta los 30 días

Propiedades bioquímicas diferenciales de las subespecies de Salmonella spp spp.. S. enterica Pruebas subesp. bioquímicas Enterica (I) Dulcita + ONPG Malonato Gelatina Sorbita + KCN L(+) tartrato + Mucato + Salicina Lactosa Habitat de Animales las cepas de sangre caliente

S. enterica subesp. salamae (II) + + + + + -

S. enterica subesp. arizonae (IIIa) + + + + + - (75%)

S. enterica subesp. diarizonae (IIIb) + + + + - (70%) + (75%)

S. S. enterica enterica S. subesp. subesp. bongori houtenae indica (V) (IV) (VI) d + d + + + + + + + + + + d -

Animales de sangre fría y medio ambiente

+ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos; d: diferentes reacciones

Caracteres bioquímicos diferenciales entre S. Typhi, S. Paratyphi A y Salmonella spp. P. bioquimicas

S. Typhi

S. Paratyphi A

Salmonella spp.

SH2 (TSI)

Trazas

-

+

Lisina decarboxilasa

+

-

+

Ornitina decarboxilasa

-

+

+

Arginina dehidrolasa

-

-

+

Gas de glucosa

-

+

+

Citrato Simmons

-

-

+

+ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos

Caracteres bioquímicos diferenciales entre Salmonella enterica subesp. enterica (I) y Proteus mirabilis (TSI: K/A con SH ; LIA:desaminado) 2

Pruebas bioquímicas SH2 (TSI) Hidrolisis deurea Fenilalaninadeaminasa Lisinadecarboxilasa Ornitinadecarboxilasa Lactosa Dulcita ONPG

Salmonellaentericasubesp. enterica(I) + + + + -

Proteus mirabilis + + + + -

+90%ómás delos resultados positivos; - 90%ómás delos resultados negativos

Caracteres bioquímicos diferenciales entre Salmonella enterica subesp. enterica (I) y Citrobacter freundii (TSI: A/A con SH ; LIA: K/A) 2

Pruebasbioquímicas SH2 (TSI) Hidrólisisdeurea Lisinadecarboxilasa Ornitinadecarboxilasa Lactosa Sacarosa Dulcita Malonato ONPG

Salmonellaentericasubesp. enterica(I) +

Citrobacter freundii

+ + + -

D d d d d d +

+

+ 90%ó más de los resultados positivos; - 90%ó más de los resultados negativos; d: diferentes reacciones

Caracteres bioquímicos diferenciales entre Salmonella enterica subesp. IIIa y IIIb y Citrobacter freundii (TSI c/SH2 y ONPG +) Pruebas bioquímicas Lisina decarboxilasa Ornitina decarboxilasa Glicerol Malonato Hidrólisis de gelatina

Salmonella subesp. enterica IIIa y IIIb + + + + (lenta)

Citrobacter freundii - (con excepciones) + -

+ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos

Caracteres bioquímicos diferenciales entre Salmonella enterica subesp. enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 + P. bioquímicas Indol Citrato Simmons Lisina decarbox. Arginina dehidrol. Manita Dulcita Ramnosa Xilosa ONPG

S. enterica subesp. enterica (I) + + + + + + + -

E. tarda

E. coli SH2 +

+ + -

+ + -/+ + +/+ + +

+ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos

ANTIGENOS DEL GENERO Salmonella  El estudio de la estructura antigénica del género Salmonella permite tipificar las bacterias que lo componen en serovariedades  Desde epidemiología permite determinar la prevalencia de una serovariedad en distintas zonas geográficas. Es de utilidad en el estudio de brotes

* La serotipificación completa se basa en la determinación de los antígenos somáticos O, los antígenos flagelares H y el antígeno capsular Vi (si está presente). “Esquema de Kauffmann-White – Le Minor ”

(Popoff, M.Y., 8ª Ed, WHO

Centre for Referente and Research on Salmonella, Instituto Pasteur, París, Francia, 2001).

Localización de los antígenos de Salmonella spp. spp. Citoplasma

Pilus

Flagelo bacteriano

Cápsula

Ag flagelar H

Ag Vi

Ribosomas

ADN

Membrana plasmática

Pared celular

Ag somático O

Flujograma de Serotipificacion de Salmonella spp. Aislamiento con identificación bioquímicas de Salmonella spp.

Serotipificación somática (aglutinación en lámina)

Estría en TSA

Serotipificación flagelar (aglutinación en tubo)

Aglutinación con solución fisiológica

Negativa

Positiva

Aglutinación c/ antisueros poliv. somáticos (1) Negativa (3)

Caldo flagelar

Aglutinación c/ antisueros poliv. flagelares H (4)

Cepa Rugosa (2)

Positiva

Aglutinación c/ antisueros de grupo O

Negativa (5)

Positiva

Aglutinación c/ antisueros de fases H / factores H (6) Inversión de Fase (Si es necesario) Formula antigénica H

Positiva Aglutinación c/ antisueros de factores O Formula antigénica O

Formula Antigénica Esquema de White-Kauffmann-Le Minor RESULTADO FINAL

1 - Antisueros polivalentes somáticos: OS-A y OS-B 2.-Para revertir una cepa de la forma rugosa a lisa, se realizan subcultivos en agar sangre o Mueller Hinton. 3.- Ver Consideraciones a tener en cuenta en "Serotipificación somática" 4.-Antisueros polivalentes flagelares: HS-1; HS-A; HSB; HS-C 5.-Ver Consideraciones a tener en cuenta en "Serotipificación flagelar”. 6. Si la serovariedad de Salmonella es difásica y sólo expresa una fase, realizar "Método de inversión de fases"

I.I.- Antígeno somático O EXPRESIÓN DEL ANTIGENO O

La estructura somática se denomina con la letra O seguida de : “dos puntos” y luego de números arábigos separados por comas Por ejemplo: S. Typhimurium O:1 O:1,4,[5],12 S. Enteritidis O:1 O:1,9,12 Los símbolos para los factores somáticos determinados por conversión fágica están subrayados (por ej. 1,9,12) [ ] = los factores O entre corchetes, no subrayados, pueden estar presentes o ausentes sin relación con la conversión fágica. fágica. Por ej. factor [5] del grupo O:4 (B).

Estructura antigénica O + Estructura antigénica H Fórmula antigénica (Esquema de KauffmannKauffmann-White)

II.II.- ANTÍGENO FLAGELAR H EXPRESIÓN DEL ANTÍGENO H Unas pocas serovariedades de Salmonella spp. poseen una sola fase flagelar, esos aislamientos se denominan monofásicos Ejemplo: Salmonella Enteritidis ( 9,12:g,m:- ) Salmonella Typhi ( 9,12 [Vi]:d:- )

La gran mayoría de las serovariedades tienen dos especificidades o dos fases en su antígeno flagelar o sea son aislamientos difásicos. En el Esquema de White- Kauffmann – Le Minor , ambas fases separadas por : “dos puntos” Ejemplo: Salmonella Typhimurium ( 4,5,12:i:1, 2) Salmonella Newport ( 6,8:e,h:1,2 ) 1.- La fase 1 (identificada en los ej. por las fases: i ó e,h se denominan con letras separadas por comas) 2.- La fase 2 (identificada en los ej. por las fases: 1,2 se denominan con números arábigos o letras separados por comas ). [ ] = Cuando los factores H están entre corchetes se encuentran excepcionalmente en cepas salvajes.

Estructura antigénica O + Estructura antigénica H Fórmula antigénica (Esquema de Kauffmann-White)

VARIACIONES FLAGELARES VARIACION DE FASE Es la variación reversible de los antígenos H. Ocurre en el género Salmonella (Fase 1 y Fase 2) La gran mayoría de las serovariedades son difásicas: pueden

expresar

alternativamente

flagelares de dos especificidades.

antígenos

Flujograma de Inversión de Fase Serotipificación somática O (O: 4,5,12) Serotipificación flagelar H

Si la población está balanceada Fase 1 (H:i) y Fase 2 (H:1,2)

Si la población expresa flagelos de fase 1 (H:i)

Inversión de fase con antisuero H:i

Se inmoviliza la Fase 1 y se expresa fase 2

Si la población expresa flagelos de fase 2 (H:1,2)

Inversión de fase con antisuero H:1,2 Se inmoviliza la Fase 2 y se expresa fase 1

Fórmula antigénica: O:4,5,12 H:i:1,2 (Esquema de Kauffmann-White- Le Minor ) Salmonella Typhimurium

Método de Inversión en Placa de Agar Movilidad (Swarm (Swarm Agar Agar)) Siembra del inóculo

Recolección del desarrollo

Agar movilidad (Swarm Agar) + 2 gotas de Antisuero para Inversión de Fase

Método de Inversión en Tubo de Craigie

Siembra del Inóculo

Recolección del desarrollo

Agar movilidad Craigie + 2 gotas de Antisuero para Inversión de Fase

Antisueros para el diagnóstico de Enterobacterias distribuídos por la ANLIS a las Redes de Diarreas Bacterianas Salmonella Antisueros Somáticos Polivalentes OSA-OSB

Factores

Antisueros Flagelares Polivalentes

Factores

Inversión de fase

O4,5-O9-O7 HSA-HSB-HSC-HS1 Hm-Hi-Hr-H2-H5

Hi-Hr-H1


Carga de los aislamientos de Salmonella en Red Whonet a nivel de grupo según el esquema de KAUFFMANN-WHITE-LE MINOR (códigos asignados ) y serotipificación completa: grb: Salmonella Grupo B (O:4). Ej: S. Typhimurium (sam) gc1: Salmonella Grupo C1 (O:7). Ej: S. Infantis (inf) gc3: Salmonella Grupo C3 (O:8). Ej: S. Newport (sne) gd1: Salmonella Grupo D1 (O:9) Ej: S. Enteritidis (sen)

FLUJOGRAMA DE ANTISUEROS Aglutinación antígenos somáticos OSA (+)

O4,5 (+)

Grupo O4

Compatible con S. Typhimurium, evaluar antígenos flagelares

(-)

PCR m: B  O:4 C1  O:7 C2  O:8 D  O:9 E  O:3,10

(-) O9 (+)

OSB (+)

O7 (+)

PCR m flagelares : H:i H:r H:l,v H:e,h H:z10 H:b Complejo G:

Grupo O7

Compatible con S. Enteritidis, evaluar antígenos flagelares Compatible con S. Infantis, evaluar antígenos flagelares

(-) O8 (+)

Aglutinación antígenos flagelares Antisueros polivalentes = HSA, HSB, HSC, HS1. Antisueros factores = H:i, H:h, H:m, H:r, H:2, H:5 Antisueros para Inversión de fase: H:i, H:e,h, H:r , H:1

Grupo O9

Polivalente

Factor

HSA (+)

H:i (+)

HSB (+)

H:h (+)

Grupo O8

Compatible con S. Newport, evaluar antígenos flagelares

Inversión de fase (si corresponde) inversión de fase con antisueros de inversión H:i

repetir esquema ag. flagelares

inversión de fase con antisueros de inversión H:e,h

repetir esquema ag. flagelares

H:m (+) HSC (+)

H:r (+)

inversión de fase con antisueros de inversión H:r

repetir esquema ag. flagelares

HS1 (+)

H:2 (+)

inversión de fase con antisueros de inversión H:1

repetir esquema ag. flagelares

H:5 (+)

inversión de fase con antisueros de inversión H:1

repetir esquema ag. flagelares

Primera parte: Implementación PCR grupo “O “O”” ( CDCCDC- Inst Salud Carlos III ) *Testeo de los grupos: grupos: dirigida a los genes wzx encontrada en todos los genes O de las Salmonellas testeadas testeadas,, se diferencian entre ellas por algunos pares de nucleótidos

B O:4 (F (F--wzxB, wzxB, R R--wzxB) wzxB)  C1 C1 O:7 (F (F--wzxC1, RR-wzxC1)  C2 C2  O:8 (F (F--wzxC2, RR-wzxC2)  D O:9 (F (F--tyvD, tyvD, R R--tyvD) tyvD)  E O:3,10 (F (F--wzxE1, RR-wzxE1) 

Primer parte: PCR para antígenos somáticos 

1.

2.

Se divide en dos: PCR “Multiplex” grupos:: O:4; O:9; O:8 grupos y O:3,10

Ciclado de la reacción Paso 1

94ºC

2min

Paso 2 Paso 3 Paso 4 Paso 5 Paso 6

95ºC 58ºC 72ºC 72ºC

1min 1min 2min 7min ---

4ºC

“Singleplex” Singleplex” grupo O:7 CT(-)

30 ciclos

Selección de controles Se seleccionaron de cada grupo 3 a 4 controles positivos y 2 controles negativos, negativos, pertenecientes al EQAS y de la colección de cultivo del Servicio de ETB ETB.. 

CONTROLES PCR Salmonella 1er parte: Rótulo

GRUPO (B) O:4

GRUPO (C1) O:7

GRUPO (C2) O:8

Aislamiento

GRUPO € O:3,10

CT20 SANA

S. Anatum 332/14

CT19 SWES T

S. Westhampton 521/14

CT3 STM

S. Typhimurium EQAS 2014

CT9 SDER

S. Derby 3.2 EQAS 2002

CT21 SGIV

S. Give Who 5.1 EQAS 2004

CT1SAGN

S.Agona 291/14

CT10 SE

S. Enteritidis EQAS 2014

CT13SSAN D

S. Sandiego 1261/14

CT11 SPAN

S. Panama EQAS 2003

CT15 SINF

S. Infantis EQAS 2001

CT14 SDUB

S.Dublin EQAS 2001

CT2 SGALL

S. Gallinarum 421/14

CT18 SCER

S. Cerro Who4.5 EQAS 2003

CT16 SMBA N

S. Mbandaka Who 5,7 EQAS 2004

SBRA ND

S. Braenderup CDC H9812

CT7

CT5 SOHI

S. Ohio EQAS 2014

CT12 SNEW

S. Newport EQAS 2001

CT4 SHAD

S. Hadar EQAS 2014

CT6 SKEN

S. Kentucky EQAS 2014

CT17 SCOR

S. Corvalis Who 5.6 EQAS 2004

Grupo (D) 0:9

CT -

CT8 SWOR T

S. Worthington 867/14

Segunda Parte: Implementación PCR fase flagelar I Dirigidos a los genes fliC que codifican las flagelinas de la fase I.  Primers Reverse: Reverse: r, I, lv, lv, G, z10, Sdf Sdf,, eh, b y d.  Primers Forward: Forward: P60, G, Sdf y d.  Primers Sdf: Sdf: específicos de S. Enteritidis  H:i  H:r  H:l,v  H:e,h  H:z10  H:b  Complejo G: f, g, m, p, s, t, q, u, m, t (no g), z51, z62, z63 y z85.

Ensayos de PCR estandarizados para Salmonella spp. aplicado en muestras Nombre de la Técnica

PCR Salmonella spp.

Blanco

invA ( factor de invasividad a nivel cromosomal).

Método

Tipo de muestra

Muestras de PCR simple Prueba de tamizaje alimento y con CIA para aplicar aislamiento? en muestras de alimentos

(Malorny et al,2003)

Requerimientos. Tiempo de procesamiento

Especificidad/ Sensibilidad

Detección en muestras de alimentos, previo enriquecimiento en APT, luego de 18 h de incubación a 37°C

E: 100% Recientemente se observó que algunas cepas de la serovariedad Saintpaul no poseen el gen invA) (Malorny y col., 2004) S: 1 UFC / 25 g, 103 UFC en tubo de reacción

PCR Real Time para Salmonella spp.

ttr (metabolismo respiratorio) ( Malorny et al, 2004)

PCR Real Time Muestras de Prueba de tamizaje alimento

Detección en E: 100% muestras de alimentos, previo enriquecimiento en APT, luego de 18 h de incubación a 37°C

Aplicación de PCR “screening “ o tamizaje en muestras 

PCR permite un diagnóstico presuntivo rápido, específico y confiable ,compatible con las necesidades diagnósticas, a confirmar con el aislamiento del microorganismo .

 Ensayo de PCR que incluye un IAC para detectar fallas en amplificación.( Malorny, 2003) . Trabajo colaborativo de Enterobacterias- INEI “C.G.Malbrán”- Dirección de Higiene y Seguridad Alimentaria del Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires

 Herramienta alternativa útil para descarte de las muestras negativas a nivel de la industria alimentaria y monitoreo de muestras .


En desarrollo

 Implementación de una PCR para serotipificación de Salmonella (Herrera L; JCM 2004,Research M, 2007, Inst Salud Carlos III ); incluyendo las serovariedades más frecuentes: * PCR para antígenos somáticos (O) y flagelares (1ra y 2da fase): STM, SE, SN, SINF, S. Agona, Agona, S Mbandaka, S Montevideo, S Anatum, Anatum, S Derby, S Oranienburg y otras



Se utilizará como técnica alternativa, y validada como “screening” de serotipificación en LRN y a transferir a laboratorios de la RND
Desde LRN , secuenciación genómica , en aislamientos de brotes y/ó cepas emergentes con nuevas características de virulencia y/ó resistencia.

Vigilancia en Argentina Figura - Diarreas bacterianas, agentes identificados por semana epidemiológica 2014. N=6200. Argentina.

Fuente: SIVILA.

Figura 6 a.- Casos positivos para distintos géneros bacterianos según serotipos y serogrupos, notificados en el agrupado. Total país. SE 1 a 53 de 2014. SIVILA

Se notificaron al LRN 2009 al 2014: * Aislamientos esporádicos de casos humanos,

animales, animal y ambiental.

de alimento, alimento para

•

Brotes: 16 de Salmonella Typhimurium (STM) 9 de Salmonella Enteritidis (SE) 2 de Salmonella Chester 1 de Salmonella Heidelberg (intrahosp) 1 de Salmonella Typhimurium (intrahosp)
De los brotes estudiados, se aisló Salmonella spp. de los pacientes y del alimento elaborados: salame, canelones de verdura y carne, milanesa de pollo, pernil de vaca y en domicilios familiares tiramisú, torta, vitel toné, ensalada rusa, mouse.


2011 Estudio prospectivo para detección temprana de brotes en colaboración con la Univ Harvard, USA en 6 provincias de la región centro-sur con el software SaTScan- plataforma WHONET. Se registró un aumento en el n de brotes

Análisis de la vigilancia desde el LRN de los aislamientos de Salmonella y Shigella del LCSP del Chaco en el marco de la RND Tabla. Análisis de los aislamientos recibidos en el LRN en 2014 del LCSP de Chaco microorganismo derivado (RND)

Shigella

Serotipificación obtenida (n)

Total (n)

60

15

No Serotipificado / Incorrecta serotipificación

S. flexneri 1 (2), S. flexneri 2 (2), 2 23 S. flexneri S. flexneri 3 (4), S. flexneri AA479 (3). S. sonnei (4)

19 (1 E. coli ), 3 no viables

S. Typhimurium (1), S. Enteritidis (8), S. 8 Salmonella spp.1 1 (S . Braenderup), 1 no viable Newport (3) Salmonella spp.1: S. Javiana, S. Derby, S. Newport, S. Panama, S. Ohio, S. Arechavaleta. S. flexneri2 : S. flexneri AA479 (15); S. flexneri Y (3), S. flexneri X (1), S. flexneri 1 (3), S. flexneri 3 (1).

Salmonella

22

12

Ejemplos de aplicación de Epidemiología Molecular en vigilancia de ETA

Aplicación de PFGE en el marco de la Red PulseNet Internacional St

St

St St: cepa estándard

BROTES de Salmonella Enteritidis en Argentina Di ce (Op t:1.50 %) (To l 1.5%-1 .5 %) (H>0 .0% S>0 .0 %) [0 .0 %-10 0.0% ]

PFGE-XbaI

PF GE- Xba I

Número de

Provincia

Localidad

Origen

Aislamiento

Patrón

Fagotipo

Nacional

10 0

95

90

Aislamiento

Sitio de

SE645/05 Mendoza

Mendoza

Stool

Human

ARJEGX01.0013

SE767/04 Buenos Aires

La Plata

SE typ e 21

Stool

Human

ARJEGX01.0001

SE typ e 21

SE1704/04 Tierra del Fue. Ushuaia

Stool

Human

ARJEGX01.0001

SE typ e 21

SE1705/04 Tierra del Fue. Ushuaia

Stool

Human

ARJEGX01.0001

SE typ e 21

SE1706/04 Tierra del Fue. Ushuaia

Stool

Human

ARJEGX01.0001

SE typ e 21

SE1707/04 Tierra del Fue. Ushuaia

Stool

Human

ARJEGX01.0001

SE typ e 21

SE1850/04 Tucumán

San Miguel de Tucu.

Mayonnaise Food

ARJEGX01.0001

SE typ e 4

SE1851/04 Tucumán

San Miguel de Tucu.

Mayonnaise Food

ARJEGX01.0001

SE typ e 4

SE1852/04 Tucumán

San Miguel de Tucu.

Stool

Human

ARJEGX01.0001

SE typ e 4

SE1853/04 Tucumán

San Miguel de Tucu.

Stool

Human

ARJEGX01.0001

SE typ e 4

SE1876/04 Buenos Aires

Buenos Aires

Stool

Human

ARJEGX01.0001

SE typ e 4

SE1877/04 Mendoza

Mendoza

Stool

Human

ARJEGX01.0001

SE typ e 4

SE1878/04 Mendoza

Mendoza

Stool

Human

ARJEGX01.0001

SE typ e 4

SE1881/04 Mendoza

Mendoza

Food

ARJEGX01.0001

SE typ e 4

SE532/05 Buenos Aires

Bahía Blanca

Stool

Human

ARJEGX01.0014

SE617/06 Buenos Aires

Capital Federal

Stool

Human

ARJEGX01.0014

SE1224/05 Buenos Aires

San Justo

Blood

Human

ARJEGX01.0005

SE1225/05 Buenos Aires

San Justo

Blood

Human

ARJEGX01.0005

SE762/04 Buenos Aires

Balcarce

Egg

Food

ARJEGX01.0012

SE1075/06 Cordoba

Cordoba

Stool

Human

ARJEGX01.0011

SE1874/04 Buenos Aires

Buenos Aires

Stool

Human

ARJEGX01.0011

SE typ e 4

SE1875/04 Buenos Aires

Buenos Aires

Stool

Human

ARJEGX01.0011

SE typ e 4

SE144/73 Buenos Aires

Capital Federal

Human

ARJEGX01.0003

Human

ARJEGX01.0003

SE168/04 Buenos Aires

Capital Federal

Stool

Human

ARJEGX01.0009

SE2092/07 Neuquen

Neuquen

Stool

Human

ARJEGX01.0023

SE1064/07 Cordoba

Cordoba

Stool

Human

ARJEGX01.0024

SE1023/90 Buenos Aires

Capital Federal

Human

ARJEGX01.0002

SEAlbis/72

Brote 4

ARJEGX01.0001

SE1703/04 Tierra del Fue. Ushuaia

Brote 3

ARJEGX01.0010

Food

Brote 2

Food

Pasta

Brote 1

Sandwich

SE1702/04 Tierra del Fue. Ushuaia

100

95

90

85

80

BROTES Salmonella Typhimurium Nº de Provincia Aislamiento

Localidad

Sitio de Origen Aislamiento

STM1205/05 Rio Negro

Viedma

Materia Fecal

Humano

STM1865/05 Tucumán

San Miguel de Tucum. Materia Fecal

Humano

STM1676/05 La Pampa

25 deMayo

Quesode cerdo Alimento

STM1734/05 La Pampa

25 deMayo

Materia Fecal

Humano

STM1735/05 La Pampa

25 deMayo

Materia Fecal

Humano

STM1736/05 La Pampa

Santa Isabel

Materia Fecal

Humano

STM1737/05 La Pampa

Santa Isabel

Materia Fecal

Humano

STM1738/05 La Pampa

Santa Isabel

Materia Fecal

Humano

STM1739/05 La Pampa

Santa Isabel

Materia Fecal

Humano

STM1740/05 La Pampa

Santa Isabel

Quesode cerdo Alimento

STM1741/05 La Pampa

25 deMayo

Quesode cerdo Alimento Materia Fecal

Humano

STM3069/98 Buenos Aires La Plata

Materia Fecal

Humano

STM2216/98 Mendoza

Materia Fecal

Humano

STM121/06

Buenos Aires GranBuenos Aires Mendoza

STM1018/05 Buenos Aires GranBuenos Aires STM10/06

Buenos Aires Azul

STM149/06

La Pampa

Animal Materia Fecal

Humano

STM1256/05 Santa Fe

Rafaela

Materia Fecal

Humano

STM1592/05 Corrientes

Corrientes

Materia Fecal

Humano

STM1354/05 Buenos Aires Azul

Animal

STM1612/05 Buenos Aires Azul Buenos Aires La Plata

STM1080/05 Buenos Aires Capital Federal

Brote A

Ambiental

Santa Rosa

STM278/02

Brote en la comunidad

Animal Materia Fecal

Humano

Materia Fecal

Humano

STM1319/04 Buenos Aires Azul

Animal

STM607/06

Tucumán

Faimallá

Materia Fecal

Humano

STM608/06

Tucumán

Faimallá

Materia Fecal

Humano

STM609/06

Tucumán

Faimallá

Materia Fecal

Humano

STM610/06

Tucumán

Faimallá

Materia Fecal

Humano

STM611/06

Tucumán

Faimallá

Materia Fecal

Humano

STM612/06

Tucumán

Faimallá

Materia Fecal

Humano

STM613/06

Tucumán

Faimallá

Materia Fecal

Humano

Brote familiar Brote B

Salmonella enterica ser. Typhimurium con el mismo perfil de resistencia, sospecha de brote intrahospitalario julio- setiembre- octubre 2014 Di ce (Opt:1.50 %) (Tol 1 .5 %-1 .5 %) (H> 0 .0 % S>0.0% ) [0 .0%-1 00 .0 %]

PFGE -XbaI

NºAislamiento

10 0

PFGE-XbaI

Ciudad

Origen

F. aislamiento

Patrón XbaI

STM13 99/14

Rosario

Stool

Hum an

2014-07 -19

A RJPXX0 1.03 44

STM14 09/14

Rosario

Stool

Hum an

2014-09 -21

A RJPXX0 1.03 44

STM14 10/14

Rosario

Stool

Hum an

2014-09 -26

A RJPXX0 1.03 44

STM14 11/14

Rosario

Stool

Hum an

2014-09 -26

A RJPXX0 1.03 44

STM14 12/14

Rosario

Stool

Hum an

2014-09 -29

A RJPXX0 1.03 44

STM14 13/14

Rosario

Stool

Hum an

2014-09 -29

A RJPXX0 1.03 44

STM14 14/14

Rosario

Stool

Hum an

2014-10 -06

A RJPXX0 1.03 44

STM14 15/14

Rosario

Stool

Hum an

2014-10 -06

A RJPXX0 1.03 44

STM14 16/14

Rosario

Stool

Hum an

2014-09 -26

A RJPXX0 1.03 44

100% de similitud

Figura 1. Dendograma de relación genética con la enzima primaria XbaI analizado con el coeficiente Dice de los 9 aislamientos S. Typhimurium asociados a la sospecha de brote intrahospitalario de la ciudad de Rosario. Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0%S>0.0%) [0.0%-100.0%] 100

PFGE-BPFG lnI E-BlnI

STM1411/14

2014-09-26

ARJPXX01.0344

ARJPXA26.0020

STM1412/14

2014-09-29

ARJPXX01.0344

ARJPXA26.0020

STM1409/14

2014-09-21

ARJPXX01.0344

ARJPXA26.0021

STM1410/14

2014-09-26

ARJPXX01.0344

ARJPXA26.0021

STM1399/14

2014-07-19

ARJPXX01.0344

ARJPXA26.0022

93% de similitud

Figura 2. Dendograma de relación genética con la enzima secundaria BlnI analizado con el coeficiente Dice de 5 de los 9 aislamientos S. Typhimurium asociados a la sospecha de brote intrahospitalario de la ciudad de Rosario.


En el análisis con la enzima primaria XbaI se observó un único perfil genético y nuevo en la Base de Datos Nacional (BDN) de Salmonella spp










Las IH prolongan la estadía del paciente en el hospital, contribuyen al incremento de costos y a la emergencia y diseminación a la comunidad de resistencia a los antimicrobianos.. antimicrobianos El hallazgo de Salmonella spp. si persiste indica la importancia de sostener las medidas de prevención y control en el hospital. hospital. PFGE permitió la confirmación de estos brotes, brotes, evaluar la persistencia de subtipos genéticos para tomar medidas de prevención y evaluar la diseminación de estas cepas en la comunidad.

Estudio epidemiológico de la provincia de Neuquén Brote de S. Typhimurium

Brote de S. Typhimurium en Neuquén. Evento festivo en Marzo 2013 con Estudio de Epidemiología y alimento por Bromatología Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

100

PFGE-XbaI PFGE-XbaI

Nº Aislamiento XbaI

Procedencia

Ciudad

Origen

Fecha

Patrón PFGE

STM293/13

Hosp Castro Rendon

Neuquén

Human

2013-03-15 ARJPXX01.0065

STM294/13

Hosp Castro Rendon

Neuquén

Human

2013-03-15 ARJPXX01.0065

STM295/13

Hosp Castro Rendon

Neuquén

Human

2013-03-15 ARJPXX01.0065

STM296/13

Hosp Castro Rendon

Neuquén

Human

2013-03-15 ARJPXX01.0065

STM297/13

Hosp Castro Rendon

Neuquén

Human

2013-03-15 ARJPXX01.0065

STM298/13

Hosp Castro Rendon

Neuquén

Human

2013-03-15 ARJPXX01.0065

STM299/13

Hosp Castro Rendon

Neuquén

Human

2013-03-15 ARJPXX01.0065

STM300/13

Hosp Castro Rendon

Neuquén

Human

2013-03-15 ARJPXX01.0065

STM301/13

Hosp Castro Rendon

Neuquén

Human

2013-03-15 ARJPXX01.0065

STM302/13

Hosp Castro Rendon

Neuquén

Human

2013-03-15 ARJPXX01.0065

STM411/13

Hospital Heller

Neuquén

Food

2013-03-22 ARJPXX01.0065

STM412/13

Hospital Heller

Neuquén

Food

2013-03-22 ARJPXX01.0065

STM431/13

Hospital Junín de los And. Junin de los A. Human

2013-03-25 ARJPXX01.0065

STM432/13

Hospital Junín de los And. Junin de los A. Human

2013-03-25 ARJPXX01.0065

STM46/13

Hospital Heller

Neuquén

Human

2013-01-11 ARJPXX01.0065

STM320/13

Hospital Área Cipolletti

Cipolletti

Human

2013-03-19 ARJPXX01.0065

STM321/13

Hospital Zatti

Viedma

Human

2013-03-19 ARJPXX01.0065

STM322/13

Hospital Zatti

Viedma

Human

2013-03-19 ARJPXX01.0065

Figura 1. Dendograma de relación genética analizado con el coeficiente de Dice y la enzima XbaI de aislamientos de Salmonella Typhimurium aisladas de un brote de la ciudad de Neuquén y otras esporádicas de la zona que presentaron igual perfil de resistencia. Patrón electroforético con una frecuencia del 9,5% en la BDN desde 2005, asociado a brotes en la Región (2007, 2009, 2010, 2011) Aislamientos de S. Typhimurium procedentes del brote de Neuquén.


resistencia a cefalosporinas de tercera generación debida a la producción de AMPc plasmídico.

Salmonella Typhi (Cluster 2004)
Entre el 31 de julio y el 6 de agosto de 2004, 3 aisl. de S. Typhi de hemocultivos de 3 pacientes procedentes de la prov. de Buenos Aires. Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

100

95

90

PFGE-XbaI

85

80

PFGE-XbaI

ST1026/ 02

Salta

ST250/03

Salta

ST 1617/04

Buenos Aires

ST 805/02

Buenos Aires

ST 1389/04

Buenos Aires

ST 1390/04

Buenos Aires

ST1388/ 04

Buenos Aires

ST1713/ 04

Buenos Aires

ST 1309/04

Buenos Aires

ST659/01

Buenos Aires

ST 472/01

Rio Negro

ST425/03

Misiones

ST 1134/01

Rio Negro

ST256/02

J ujuy


La recepción en el LRN en un período tan breve de tiempo y procedentes de una misma zona resultó de interés y se estudió por PFGE

Cluster 2004

BDR(Pulsenet -América Latina y El Caribe) 100

95

90

85

80

75

* Aplicación de PFGE en la identificación y monitoreo de diseminación de un clon patogénico S. Typhimurium multiresistentes DT104 con el mismo perfil de resistencia AMP, C, TE, S and SXT de Costa Rica (2004-2005), Argentina (2005) y Colombia (1998-1999) de origen humano y animal . .2005 . Argentina ST M1009/05 ST M2187/05

. Argentina

.2005

ST M141

. Colombia

1999

ST M1256/05

. Argentina

. .2005

ST M1778/05

Costa Ric a

. .2004

ST M1779/05

Costa Ric a

. .2004

ST M1780/05

Costa Ric a

. .2004

ST M1781/05

Costa Ric a

2004

ST M1782/05

Costa Ric a

2004

ST M1783/05

Costa Ric a

2004

ST M1784/05

Costa Ric a

2004

ST M1785/05

Costa Ric a

ST M1786/05

Costa Ric a

2005

ST M1787/05

Costa Ric a

2005

ST M1788/05

Costa Ric a

2005

ST M1789/05

Costa Ric a

2005

ST M1790/05

Costa Ric a

2005

Costa Ric a

2005

ST M1791/05 ST M121

. Colombia

1999

ST M24

. Colombia

1998

ST M271

Colombia

2005

ST M200

. Colombia

2003

ST M1676/05

. Argentina

. .2005

ST M1080/05

. Argentina

. .2005

ST M1319/04

. Argentina

. .2004

ST M1114/04

. Argentina

. .2004

PFGE - XbaI determinó un mismo patrón entre los aislamientos de

S. Typhimurium de Costa Rica y Argentina con el mismo patrón de resistencia, y 93% de similaridad con los aislamientos de Colombia con un perfil de resistencia a Amp,Te,SXT

Dendograma de aislamientos de S. Enteritidis asociados a un brote alimentario en Paraguay en 2007. Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-XbaI

Aislamiento

Pais

Ciudad

Serov. Origen Fecha aisl. Nº patrón AL

100

95

90

85

PFGE-XbaI

ARG__SE1225/05

Argentina

San Justo

Blood

Human

ALJEGX01.0008

ARG__SE1915/98

Argentina

Buenos Aires

Stool

Human

. ALJEGX01.0008

ARG__1251/07

Paraguay

Itaugua

Stool

Human

2007-10-07

ALJEGX01.0001

ARG__1255/07

Paraguay

Itaugua

Stool

Human

2007-10-07

ALJEGX01.0001

ARG__1256/07

Paraguay

Itaugua

Stool

Human

2007-10-08

ALJEGX01.0001

ARG__1259/07

Paraguay

Itaugua

Stool

Human

2007-10-08

ALJEGX01.0001

ARG__1262/07

Paraguay

Itaugua

Stool

Human

2007-10-08

ALJEGX01.0001

ARG__1267/07

Paraguay

Itaugua

Stool

Human

2007-10-07

ALJEGX01.0001

ARG__1280/07

Paraguay

Itaugua

Stool

Human

2007-10-08

ALJEGX01.0001

ARG__1302/07

Paraguay

Itaugua

Stool

Human

2007-10-07

ALJEGX01.0001

ARG__SE1222/05

Argentina

Paraná

Stool

Human

ALJEGX01.0001

ARG__SE1673/04

Argentina

San Miguel de T. Stool

Human

ALJEGX01.0001

ARG__SE1674/04

Argentina

San Miguel de T. Stool

Human

ARG__SE1770/05

Argentina

Santa Fe

Stool

Human

ARG__SE1852/04

Argentina

San Miguel de T. Stool

Human

ALJEGX01.0001

ARG__SE1853/04

Argentina

San Miguel de T. Stool

Human

ALJEGX01.0001

ARG__SE1876/04

Argentina

Buenos Aires

Stool

Human

ALJEGX01.0001

ARG__SE194/04

Argentina

Buenos Aires

Stool

Human

ALJEGX01.0001

ARG__SE428/98

Argentina

Capital Federal

Human

ARG__SE467/08

Argentina

Santa Fe

Food

2008-03-12

ALJEGX01.0001

ARG__SE661/05

Argentina

Santa Rosa

Stool

Human

2005-03-02

ALJEGX01.0001

ARG__1304/07

Paraguay

Itaugua

Stool

Human

2007-10-07

ALJEGX01.0017

ARG__SE645/05

Argentina

Mendoza

Stool

Human

2005-01-29

. ALJEGX01.0003

ARG__SE672/06

Argentina

Junín

Stool

Human

. ALJEGX01.0005

ARG__SE1075/06

Argentina

Cordoba

Stool

Human

ALJEGX01.0004

ARG__SE1874/04

Argentina

Buenos Aires

Stool

Human

ALJEGX01.0004

ARG__SE1875/04

Argentina

Buenos Aires

Stool

Human

ALJEGX01.0004

ARG__SE1981/05

Argentina

Córdoba

Stool

Human

. ALJEGX01.0004

ARG__SE217/05

Argentina

Mendoza

Stool

Human

ARG__SE1307/05

Argentina

Gran Buenos Air. Blood

Human

2005-04-04

. ALJEGX01.0007

ARG__SE94/05

Argentina

Capital Federal

Human

2005-01-06

. ALJEGX01.0006

ARG__SE144/73

Argentina

Capital Federal

ARG__SEAlbis/72

Argentina

ARG__SE168/04

Argentina

Capital Federal

ARG__SE2092/07

Argentina

Neuquen

ARG__SE1385/88

Argentina

La Plata

ARG__SE1922/90

Argentina

Capital Federal

ARG__SE994/90

Argentina

ARG__SE115/91

Argentina

ARG__SE634/91

Argentina

ARG__SE1638/90

Argentina

Stool

ALJEGX01.0001 2005-02-17

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0004

Human

. ALJEGX01.0015

Human

ALJEGX01.0015

Stool

Human

. ALJEGX01.0009

Stool

Human

2007-11-20

. ALJEGX01.0010

Human

ALJEGX01.0011

Human

. ALJEGX01.0011

La Plata

Human

. ALJEGX01.0012

Santa Fe

Human

. ALJEGX01.0013

Capital Federal

Human

. ALJEGX01.0014

Stool

. ALJEGX01.0016

Brote Paraguay

Diapositiva 59 m2

Al comparar en la BDR , el patrón encontrado en Paraguay coincide con el patrón más frecuente de Argentina mrvinas, 13/02/2009

Resistencia a antimicrobianos – Red WHONETWHONET-ARG (2010--2011) (2010

% de NS en Salmonella spp. Red WHONET-Arg Años 2010-11 (N=1.104) 100 80 2010

40

2011

%

60

20 0 AMP

SXT

NAL

CIP

CHL

FOS

CTX

ESBL

Antibiótico

Salmonella spp. (N=1104): se mantuvo sensible a la mayoría de los antimicrobianos, se observó un aumento en la R a ác. nalidíxico (NAL) respecto al período 2007-2008 (10.6% vs 3.8%) sin resistencia a CIP, lo que correspondería a un fenotipo de sensibilidad disminuida a fluorquinolonas. * Fenotipos inusuales determinados en el LNR: 7 aislamientos de Salmonella spp. con AmpC plasmídico tipo CIT y 1 Salmonella spp. con fenotipo de betalactamasa de espectro extendido CTX-M y PER.

• En caso de infecciones sistémicas se prueban las mismas drogas que un BGN de infección intrahospitalaria. • Sólo se informa el antibiograma en aislamientos de Salmonella Typhi ó

Paratyphi. • En los casos de infecciones causadas por Salmonella no Typhi sólo se informa si provienen de: Localizaciones Extraintestinales o Materia fecal (niños menores de 6 meses, gerontes, inmuno comprometidos y pacientes con prótesis). - CEFPODOXIMA: marcador de R a cefalosporinas de 3era generación (C3G). Si da R se deben probar discos de C3G, AMC y cefoxitina para confirmar BLEE ó AmpC plasmídica. Servicio ANTIMICROBIANOS INEI – ANLIS Dr Carlos G. Malbran


La vigilancia a través de RND y PTA ( H y A) y Red para la Vigilancia

de la Resistencia a los Antimicrobianos (WHONET- ARG) integrados a un sistema multidisciplinario, a los fines de un diagnóstico microbiológico confiable, oportuno y reproducible para:

 el mejoramiento de la atención del paciente: en la prevención de brotes e implementación de estrategias eficientes de control.  monitorear la emergencia de nuevas cepas con potencial patogénico y epidémico, y resistentes; sumado a *La incorporación de técnicas moleculares de diagnóstico y subtipificación aportan sensibilidad y especificidad para la Vigilancia de este patógeno

¡Muchas gracias!