Diagnostico Microbiológico Bacterias, Virus y Hongos

Bioqca María Leticia Triviño

Diagnostico microbiológico Conjunto de procedimientos y técnicas complementarias empleadas para establecer la etiología del agente responsable de una enfermedad infecciosa y poder así proceder a su tratamiento y a tomar medidas , para evitar la diseminación del patógeno

Toma de muestra • • • •

debemos de hacerlo con el mayor rigor posible Elegir el material que refleje el proceso patológico. Evitar contaminación con la flora del paciente. Muestras: esputo, sangre, heces, orina, tejido, LCR, etc que dependerán de la sospecha de procedencia de la afección • Obtener volumen suficiente para observación microscópica y cultivo. • Obtener la muestra, si es posible, antes de iniciar la terapia antimicrobiana. • Transportar la muestra rápidamente al laboratorio.

• Las muestras deben ser identificadas con una etiqueta adherida al envase y los datos anotados deben coincidir exactamente con los de la solicitud de examen dado por el médico tratante. Una vez tenemos las muestras adecuadas, podemos comenzar a realizar las técnicas diagnósticas correspondientes

Directos: Implican la demostración del agente patógeno, sus metabolitos o alguno de sus componentes antigénicos en los fluidos orgánicos del paciente.

Indirectos: Implican la demostración de la huella (AC) que el agente patógeno ha dejado en su contacto con el sistema inmunocompetente del paciente. Son aquellos que reconocen la respuesta inmune (humoral o celular) por parte del huésped

A.- Métodos Directos: • Observación microscópica • Cultivo e Identificación • Técnicas Inmunológicas: inmunofluorescencia, aglutinación, ELISA • Técnicas moleculares: hibridación – molecular (PCR)

• Examen microscópico (fresco, tinción): La visualización de los microorganismos patógenos es la técnica más evidente. Debido a su pequeño tamaño y a la similitud estructural existente entre algunos de ellos, se generan numerosas complicaciones. • FRESCO:

Tinción Gram

b.-Cultivo e Identificación • Cultivo: proceso de laboratorio por el que se induce el crecimiento cuantitativo de los agentes patógenos. Para ello se utilizan los medios de cultivo (líquidos o solidos) • Identificación: conjunto de pruebas bioquímicas que sirven para demostrar en forma clara una determinada característica bioquímica como presencia o ausencia de una determinada actividad enzimática, grupo de enzimas o determinada vía metabólica, crecimiento a una determinada temperatura, crecimiento en presencia de inhibidores, etc.

Técnicas Inmunológicas: inmunofluorescencia, aglutinación, ELISA • Inmunofluorescencia: anticuerpos unidos químicamente a una sustancia fluorescente para demostrar la presencia de una determinada molécula. • Aglutinación directa: reacción inmunoquímica que produce la agregación de partículas o células recubiertas de antígeno o anticuerpo.

• ELISA: técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable como cambio de color o algún otro tipo

PCR: reacción en cadena polimerasa •

es una técnica de biología molecular, cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN o ARN particular, partiendo de un mínimo, en teoría, de una única copia de ese fragmento. Esta técnica sirve para amplificar material genético. Tras la amplificación, resulta mucho más sencillo identificar con una muy alta probabilidad virus o bacterias causante de una enfermedad, identificar personas (cadáveres, criminales...) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado.

Métodos Indirectos: - I. F.I - ELISA indirecta - Aglutinación indirecta - -Hemoaglutinación indirecta

Inmunofluorescencia indirecta (IFI) • Detecta la presencia de anticuerpo en una muestra.

ELISA indirecto • Detecta Ac en la muestra de paciente en lugar de Ag • Ej. Test Determine (HIV)

Hemoaglutinación indirecta: • Esta técnica puede aplicarse al reconocimiento de anticuerpos contra los antígenos de superficie si se sensibilizan los hematíes de carnero.

Reacción de fijación del complemento • Esta técnica se basa en que los complejos antígeno-anticuerpo fijan el complemento. Una vez producida esta reacción, se añade complemento y un sistema indicador que está formado por eritrocitos de carnero recubiertos de anticuerpos. En la muestra clínica que existan anticuerpos se fijará el complemento y no se producirá la lisis del sistema indicador.